专利名称：用于监测三维纤维蛋白凝块形成的方法和仪器的制作方法
技术领域：
本发明涉及用于监测多个样本中的三维纤维蛋白凝块形成(spatial fibrin clot formation)的方法和仪器。
背景技术：
为了诊断和基础研究的目的在体外模拟血液凝结的问题长期存在。已经提出了许 多用于测量血浆的凝血参数的方法和装置；然而，这些方法中的大多数方法(例如激活部 分凝血激酶时间的测定、血栓弹性描记法、凝血酶生成试验)监测凝血时间或其它同质参 数。换句话说，在血液(血浆)的样本与激活剂均勻混合的这些实验中，整体监测样本的凝 结。这是最简单的方法，但是这种方法是非生理性的，因为体内血液凝结是空间不均勻现 象。反应剂的扩散在该过程中起着至关重要的作用。有少数方法考虑了空间不均勻性和扩散的作用。其中考虑这些参数的最相关的方 法是细胞凝结试验(Monroe等人的Br J Haematol. 1994 ；88 (2) =364-371以及随后的一系 列研究)。该方法基于常规荧光分光计的使用。该方法涉及通过在荧光底物的帮助下在血 浆蛋白和血小板的重组系统中二次取样来监测凝血酶的生成，其中凝结由单层组织因子表 达细胞(单核细胞)激活。尽管这是灵敏的方法，但是该方法的主要缺陷在于该方法并非 是真正三维的尽管反应剂不均勻地分布，但是观测信号是凝结过程的整体特征。在样本采 集期间通过移液管混合也使空间不均勻性不太明显。该方法是极其耗力和耗时的。该方法 仅用于基础研究和药理研究。该方法以目前的形式不可能用于诊断，因为该方法不能在不 修改的情况下用于血浆凝结，这是因为纤维蛋白凝块的形成将阻止取样的可能性。第二种方法是三维凝血方法(spatial clotting method) (Ataullakhanov 等人 的 Biochim Biophys Acta. 1998; 1425 (3) :453_468 ;Sinauridze 等人的 Biochim Biophys Acta. 1998 ； 1425 (3) :607_616 ；Ovanesov 等人的 Biochim Biophys Acta. 2002 ；1572(1) 45-57 ;0vanesov 等人的 Thromb Haemost. 2003 ；89 (2) :235_242 ；Ovanesov等人的 J Thromb Haemost. 2005 ；3 (2) :321_331 ;Panteleev 等人的 Biophys J. 2006 ；90 (5) :1489_1500。关 于三维凝血方法所引用的出版物通过参引包含在本文中)。该方法能够在通过使血浆与激 活剂(玻璃或成纤维细胞单层)接触产生的再钙化血浆中通过视频显微镜监测血栓的形 成来进行三维凝块形成的研究。该方法被确立为灵敏的和可再现的方法。该方法有效地 用于血液凝结调节的研究。除了基础研究之外，还研究了在各种异常状态下的三维凝血异 常(血友病A、B和C ；凝血因子X、XII、II和纤维蛋白原的缺乏；败血症和大面积创伤；在 输注治疗期间的血浆稀释等等)，并且还调查了治疗剂(因子VIII浓缩剂、重组激活因子 VII (丹麦诺和诺德公司(NovoNordisc)的诺其(Novoseven ))、抗凝血酶III浓缩剂 等等)的作用机理。尽管有这些优点，但是以前使用的用于三维凝血的方法和仪器不足以 实际使用。该方法并不允许同时测量一个以上的样本，这对于基础研究是不方便的并且完 全阻碍了大范围的临床使用。所需的最少血浆量为300μ 1，这超过了标准凝血实验中的使 用量(ΙΟΟμΙ)的几倍。激活通过成纤维细胞单层或玻璃进行；前一种方法再现性差、昂贵并且耗时、耗力并且耗材(需要细胞培养设施)，后一种方法是非生理性的(通过玻璃的激 活经由体内路径，这在体内不起作用)。为了将样本保持在37°C，通过将比色皿保持在水温 箱中并用搅拌装置热稳定比色皿；然而，这导致气泡形成，从而降低信号质量。第三种方法涉及血浆凝结以及血浆凝结从表面扩展的成像(参见Faxalv等人的 J Biomed Mater Res A. 2007 ；印刷中，在印刷前电子出版，DOI 10. 1002/jbm. a. 3152)。该 方法基本类似于上述的三维凝血方法并且依赖于从形成于比色皿中的纤维蛋白网散射的 光的定时间隔图像采集。激活仅通过玻璃进行。主要区别在于使用了标准分光光度比色皿 来代替用于三维凝血方法中的特定比色皿。可以同时监测若干比色皿，但是分辨率低并且 没有自动化。尽管该方法允许使用标准分光光度比色皿并且能够同时监测若干样本，但是 该方法的主要缺陷在于该方法需要数量很大的血浆(1500μ1)。此外，对于具有若干样本 (100 μ 1而不是“三维凝血方法”中的10μ 1)的实验，该方法的三维分辨率低，并且该方法 通过非生理激活(仅通过玻璃激活)进行。没有自动化，并且该方法是耗时和耗力的。该方 法设计成仅用于材料实验，并且该方法对于诊断目的、基础和药理研究的适用性是有限的。第四种方法在于在带有重组人体组织因子的构型支撑膦脂双层上的时空凝血 (spatiotemporal clotting) (Kastrup ^AW Proc Natl AcadSci USA. 2006 ； 103 (43) 15747-17752)。在该方法中，微流体室用于容纳在构型脂质表面上的新再钙化血浆。明视 野显微镜用于检测纤维蛋白的形成。在该方法中，光轴垂直于激活剂表面，这不允许监测沿 该方向的三维扩展。只能观察到凝块形成以及凝块沿着激活剂的扩展。该方法的主要优点 在于该方法能够观察在构型激活表面上的凝血并且研究凝血引发的机理。然而，这是狭窄 和特定的问题。该方法对于其它类型的为了诊断目的基础研究和药理研究的适用性是有限 的。因此，在本领域中需要一种克服一个或多个上述缺陷的改进方法，特别是需要一 种克服一个或多个上述缺陷的仪器。
发明内容
因此，本发明的总的目的是提供允许灵敏地可再现地体外模拟血液凝结(具体地 是指纤维蛋白凝块形成和/或溶解的过程)的高分辨率的方法，特别是仪器，其考虑了空间 不均勻性和扩散的作用并且适于同时监测多个样本，这在临床监测中是特别重要的。本新发明特别地公开了制造和使用更加简单的比色皿组件(cuvette assembly) 26、比色皿保持器(cuvette holder) 13、包括比色皿保持器和光检测装置的仪器 14以及构成三维凝血方法的进一步的发展的方法，从而提供了更多信息、允许自动化并且 适于临床环境中的使用。在第一方面，本发明提供了一种用于光度分析的比色皿组件26，所述比色皿组件 26包括比色皿、插入物和凝血激活剂，其中比色皿1由分隔壁4分隔成多个腔室2 ；插入物5 包括从一个区域7突出的多个突出部6，所述突出部适于装配到所述比色皿1的腔室2中； 并且所述激活剂选自生理性和非生理性凝血激活剂的类别，并且其中所述激活剂位于插入 物的突出部6上，优选地在突出部6的底部边缘24处。优选地，比色皿1的腔室2在剖视图中是平面平行形状和/或矩形形状。更优选地，比色皿1的腔室2布置成一条线并且具有相等的容积。
在一个优选实施例中，比色皿1由透光的塑料材料制成，优选由聚苯乙烯制成。然 而，可以使用其它生物惰性材料(诸如聚氯乙烯或聚甲基丙烯酸甲酯)。在另一优选实施例中，插入物5的突出部6的数量对应于比色皿1的腔室2的数量。在另一个优选实施例中，插入物5在装配到比色皿1中时使得插入物5的表面与 比色皿1的内表面之间的有效距离减小到0. Imm或以下，优选减小到0. 05mm。在又一优选实施例中，插入物5在每个突出部6上载有相同或不同的激活剂，或者 其中并非所有突出部6都载有激活剂。在又一优选实施例中，插入物5的突出部6是能更换的，以便可以通过将处于所需 组分中的突出部6设置到插入物5中而获得用于特定实验的激活剂的预期组合。因此，本 发明还涉及一种比色皿组件，其中插入物5的突出部6能拆卸地或不能拆卸地连接到所述 区域7。在一个有利的实施例中，插入物5由塑料制成，优选由聚苯乙烯、聚氯乙烯或聚甲 基丙烯酸甲酯制成。本发明还包括用于插入物5的其它材料(诸如其它生物惰性材料)。在另一有利的实施例中，所述激活剂是生理性凝血激活剂(例如组织因子、凝血 酶、组织因子表达细胞层、组织样本等)。对于涉及不仅监测凝块形成而且监测凝块溶解的 实验，可以使用纤维蛋白溶解激活剂(组织纤维蛋白溶酶原激活剂(tPA)、尿激酶纤维蛋白 溶酶原激活剂(uPA)等)。为了生物材料相容性的研究，可以使用非生理性激活剂(例如玻 璃)、可植入装置/材料和人工器官/材料的样本等。激活剂(优选蛋白质)通过已知的化 学过程(例如化学键合)固定在表面上。在本文中公开的比色皿组件26优选地用于在体外监测三维纤维蛋白凝块的形 成。 在第二方面，本发明公开了 一种比色皿保持器。在本文中使用的术语“比色皿保持 器”是指一种装置，该装置固定比色皿使得在比色皿内发生的化学或生物化学反应可以由 适当的设备监测。本文描述的比色皿保持器包括热稳定比色皿1的恒温器10和用于将比色皿1保 持在恒温器10内并沿着光路的装置。在本文中使用的术语“恒温器”指的是带有温度控制 流体28的室。恒温器10充满流体28 ；合适的流体28包括气体(诸如N2和空气)；液体 (诸如水、酒精或多元醇)，最优选水。此外，包括流体28的恒温器10至少部分是透光的， 使得在比色皿组件26内的化学或生物化学反应可以经由光学装置记录。流体28也在光路 内。优选地，比色皿保持器13被热稳定和热绝缘。在一个优选实施例中，比色皿保持器适于使比色皿1垂直于光路并且以相对于竖 直线优选成10° -40°倾角的方式布置。然而，比色皿平面应当严格地垂直于光路。在一个优选实施例中，比色皿保持器尤其适用于上述比色皿。在另一方面，本发明提供了一种用于在体外监测三维纤维蛋白凝块形成和/或溶 解的仪器14，所述仪器14包括本文描述的比色皿保持器和光学检测装置。在另一方面，本发明公开了一种仪器，特别是上述公开的仪器，所述仪器包括比色 皿保持器13和光学检测装置，其中比色皿保持器13垂直于光路地并且以相对于竖直线优 选成10° -40°倾角的方式布置比色皿1。比色皿保持器优选地是本文公开的比色皿保持器13。典型地，比色皿平面严格地垂直于光路。在另一方面，本发明描述了一种用于在体外监测三维纤维蛋白凝块形成和/或溶 解的方法，所述方法包括以下步骤A)在凝块形成的情况下(a)提供容纳血浆的一个或多个样本的比色皿；(b)使血浆与生理性凝血激活剂接触；和(c)记录纤维蛋白凝块随时间的生长。B)在凝块溶解的情况下(a)提供容纳包括一个或多个纤维蛋白凝块的血浆的一个或多个样本的比色皿；(b)使血浆与纤维蛋白溶解激活剂接触；和(c)记录纤维蛋白凝块随时间的溶解。优选地在控制温度下，优选地在生理温度下，即37°C或37°C左右执行所述方法。步骤(a)的比色皿优选地是上面公开的比色皿1。样本分配到比色皿1中可以使 用多道移液管进行，这允许所述方法的自动化。更优选地，比色皿1被放置在本文公开的比色皿保持器13中。最优选地，所述方 法在本文公开的仪器14内进行。在一个优选实施例中，通过将上述插入物5插入比色皿1中执行步骤(b)。梳状插 入物5在突出部6的表面上，优选在突出部6的底部边缘24处载有激活剂。当存在于突出 部6的底部边缘24上的激活剂与血浆接触时，纤维蛋白凝块开始形成于激活剂表面上并且 扩展到大量血浆中。优选地，所述激活剂是组织因子；然而，可以使用其它激活剂(例如凝血酶、组织 因子表达细胞或组织样本)。备选地，所述激活剂可以是非生理性的(例如正在测试其生物 相容性的玻璃或塑料)。对于血液凝块溶解的实验，可以使用纤维蛋白溶解激活剂(例如组 织纤维蛋白溶酶原激活剂)。在本文中使用的术语“血浆”包括血浆、富含血小板的血浆、再钙化血浆和血浆成 分。为了特定的研究应用，血浆可以与各种反应剂(附加激活剂、抑制剂、药物等)混合。为 了监测纤维蛋白溶解，血浆可以与纤维蛋白溶解激活剂(例如尿激酶纤维蛋白溶酶原激活 剂或链激酶)的溶液混合。另外，为了研究目的，凝血蛋白质、校准溶液等的特定反应剂混 合物可以用于代替血浆。因此术语“血浆”应当理解成是在该广义范围内，也包括这些改性 血浆类型。纤维蛋白凝块的生长例如由发光二极管照射。正在生长的纤维蛋白凝块所散射的 光可以由光学检测装置15 (例如由CCD照相机)记录。然后，优选地通过计算机数字地分 析记录数据(例如正在生长的血栓的采集定时间隔图像)。例如，可以由本文公开的方法确 定的主要参数是凝块生长的速度、滞后时间和凝血时间。在另一方面，本发明公开了一种固定在(例如化学键合到)一个表面上的血液凝 结或纤维蛋白溶解激活剂。这分别对于在体外监测三维纤维蛋白凝块的形成或溶解是有用 的。血液凝结激活剂可以是蛋白质(诸如组织因子或凝血酶)或者细胞或组织表达组织因 子。用于纤维蛋白溶解的激活剂的例子包括tPA和uPA。本文公开的方法和用于监测三维纤维蛋白凝块形成的仪器14优于现有技术的主要优点在于仅需要少量体积的血浆。使用少至20 μ 1 (而不是300至1500 μ 1，即为以前报 导的唯一另一个类似系统的1/75，并且是标准凝血实验所需的最少血浆量的1/5)便可以 产生高分辨率的可靠结果。此外，本发明的比色皿1容易使用并且仅需要最少的操作步骤，这些操作不需要 任何特定技能。与之相比，现有技术的装置需要具有平均水平以上的手部技能的专业生物 化学家进行操作。与需要一个或两个熟练生物化学家的现有技术的方案相比，仪器14操作简单并 且可以由辅助人员使用。方便的非必需的比色皿1和插入物5的使用使所需操作步骤减小 到最小(插入比色皿1、装载血浆、插入存在于插入物5上的激活剂)。所述方法和仪器不仅可以用于监测凝块形成，而且可以用于监测纤维蛋白凝块溶 解(“溶解”或纤维蛋白溶解)的过程。此外，实验样本快速地装载到本文所述的比色皿1上。样本装载需要很少的时间， 不超过1-2分钟。通常的实验时间为25-30分钟；每10秒拍摄图像。血栓形成的通常模式 包括2-5分钟的滞后时间(在激活之后的该时间期间什么也看不到；滞后时间大大取决于 激活剂的类型)，随后是纤维蛋白凝块以30-40 μ m/min的速度扩展到大量血浆中。在病理 条件下，滞后时间可以延长或缩短；凝块生长速度可以增大或减小。另外，在血浆中的促凝 血素变化的情况下，可以在比色皿1中观察到自发的、与激活剂无关的凝血。最重要的是，可以通过以自动方式使用不同的激活剂来同时监测若干样本使用 本文公开的比色皿1允许例如通过由常规多道移液管分配样本而将血浆同时装载到所有 腔室中，并且可插入激活剂的使用允许用单个动作同时激活凝血。因此，在专门设计的一次 性塑料比色皿1带有四个腔室和一个相应的插入物5的实施例中，可以同时用多达四种不 同的激活剂在多达四个不同的样本中监测三维凝块的形成。可以同时装载(例如用多道移 液管)样品，并且同时用梳状插入物激活样本。该方法和仪器14的主要优点在于能够检测凝血障碍(例如血浆中的促凝血素的 变化)，常规凝血试验(例如激活部分凝血激酶时间的测定、凝血酶原时间的测定、血栓弹 性描记法或凝血酶生成试验)不能检测凝血障碍或检测性差。尽管该优点可能部分地由先 前所述的现有技术的时空方法所享有，但是所提出的方法和仪器是唯一方便实际用于临床 环境中的。本发明可以用于诊断、生物材料实验、血栓症和止血的基础和药理研究。
当考虑本发明的以下详细描述时将更好地理解本发明并且将显而易见除了上述 以外的目的。这样的描述参考附图，附图中图Ia示出比色皿1的主视图，并且图Ib示出比色皿1的内部空间的剖视图。图2a示出用于比色皿1的梳状插入物5的主视图。图2b提供了插入物5的侧视 图，并且图2c提供了插入物5的透视图。图2d示出比色皿组件26的剖视图。图2e示出 图2d的侧视图。图3示出比色皿1放置在其中的比色皿保持器13。比色皿保持器包括可以经由防 水门11接近的恒温器10。
图4示出仪器14的主要元件的透视图。图5a和5b示意性地示出了比色皿1倾斜定位在光路中的布置。
具体实施例方式图Ia示出实验比色皿1的主视图。比色皿1具有基本为长方体的形状。如图Ib的剖视图中可以看到的，比色皿1的内部空间由分隔壁4分隔成相同大小 的四个腔室(well)2。每个腔室2都具有3X Imm2的矩形截面。然而，本发明并不限于所指 示的尺寸；例如可以有具有更小矩形截面的更多腔室2。在一个优选实施例中，比色皿1和 腔室2的整体设计设计成仅需要少量的样本体积来提供可靠的结果。在图Ia和Ib所示的 实施例中，仅需要20μ 1的样本体积来获得可靠的结果。优选地，分隔壁4将比色皿1分隔成多个平行且串联地对准的腔室2 (参见图lb)。 室或腔室2的宽度优选相等。在该实施例中，分隔壁4不与比色皿1的总高度等高。然而，分隔壁4可以具有不 同的高度，例如与比色皿的顶部等高。能够将插入物5固定到比色皿1的保持装置19在比色皿1的头部18中。这里， 保持装置19设计成凸起(knub) 19 ；然而，其它实施例也是可以的。在主视图中，头部18基本为带倾斜边缘的正方形。然而，头部18也可以具有不同 的形状。倾斜边缘区域8为比色皿1提供定向，使得使用者可以确定地将他的样本和/或 插入物5定位到比色皿1中。在另一实施例中，为了定向比色皿1，比色皿1可以具有不同 的定向装置8，诸如彩色标记、符号或突出区域。在图Ia中，比色皿1外表面上的边缘27也用于校正定位并且是可选的。当边缘 8帮助校正插入物5在比色皿1内的定向时，这些定向装置27是防止错误定向的导向器。在另一优选实施例中，比色皿的宽度比深度大，优选地，宽度仅为1. Imm或大约为 1. Imm0比色皿1由聚苯乙烯制成。然而，本发明还包括其它透光塑料(诸如聚甲基丙烯 酸甲酯或聚苯乙烯)。分隔壁4由与比色皿1相同的材料制成；然而，在一个备选实施例中，所述分隔壁 4可以由不同的材料制成。如图Ib中所示，比色皿具有四个腔室2。然而，本发明包括在技 术上可行并且有用的任何其它数量的腔室2。此外，在一个备选实施例中，比色皿1可以在它的外表面3上具有用于稳定地和可 移除地插入如下文描述的比色皿保持器中的装置。图2a示出用于比色皿1的梳状插入物5的主视图。插入物5具有以平行方式从 支撑部7突出的四个突出部6。本发明的插入物5并不限于四个突出部，本发明包括在技 术上可行并且有用的任何其它数量的突出部6。最优选地，突出部6的数量对应于比色皿1 中的腔室2的数量。此外，突出部6可以是能更换的，以便能够在现场容易地组成特定实验设计所需 的激活剂的组合。区域7 (支撑部)基本为矩形，并且在左上边界具有斜面8，一旦插入物5要插入 比色皿1中，所述斜面使得能够定向插入物5。通过握持区域7可以抓握和操纵插入物5。
9在另一优选实施例中，代替倾斜边缘或者附加地，区域7载有其它定向装置8，例如物理标 记(诸如彩色标记、符号或突出区域)。由此，使用者可以容易地将插入物5定向到比色皿 1的腔室2中，从而将每个突出部6分配给特定的腔室2。在一个实施例中，定向装置8可 以形成为从区域7突出的导向区域，当插入时所述导向区域沿着比色皿1的头部18引导插 入物5。典型地，插入物的突出部6比比色皿1的腔室2的宽度窄，使得插入物5可以插入 比色皿1中，同时也使得空气能够排出。当插入物5被放置到比色皿1中时，在插入物5的 表面与比色皿1的内表面之间的剩余空间28优选为0. 05mm，这允许可能下沉的空气逸出。突出部6在被放置到装载有样本的比色皿1中时与样本直接接触。然而，突出部6 的长度应当使得这些突出部不会到达腔室2的底部9。形成的纤维蛋白凝块将从突出部6 的底部边缘24朝着比色皿1的底部(即在形成于突出部6与腔室2的底部9之间的剩余 空间28中)生长。存在于区域7中的圆孔20用作允许插入物5与比色皿1的内表面上的保持装置 19连接的固定装置。固定装置20可以具有不同的设计。然而，保持装置19和固定装置20 优选彼此匹配。如图2b和图2c中可以看到的，插入物5比宽度更窄。插入物5由聚苯乙烯制成；然而，本发明还包括其它材料，优选为塑料(诸如聚甲 基丙烯酸甲酯)。插入物5在它的表面上，优选地在突出部6的底部边缘24上载有凝血激活剂或纤 维蛋白溶解激活剂。各种类型的凝血激活表面可以用作激活剂，但是优选使用允许可再现 生理引发凝血的生理性激活剂(例如固定的组织因子(immobilized tissue factor))。备 选地，插入物5由玻璃制成，并且生理性激活剂的存在可以不是必须的。插入物5的每个突 出部6可以载有相同或不同浓度的相同的激活剂，或者每个突出部6可以载有不同的激活 剂。因此，当使用如图Ib和图2a-2c中所示的实施例时，可以同时用多达四种不同的激活 剂在多达四个不同的样本中监测三维凝块的形成。在图2d的剖视图中，示出被放置在比色皿1中的插入物5。插入物5在比色皿1 内的位置被固定，因为插入物用它的固定装置20安装在比色皿1的保持装置19上。在突出 部6与分隔壁4之间留出小空间28，该空间允许可能俘获的空气逸出。插入物5以及比色 皿1的定向装置8对准。如可以看到的，突出部6的底部边缘24没有到达腔室2的底部。 图2e示出被放置在比色皿1中的插入物5的侧视图。图3示出一个实施例的拆卸开的比色皿保持器13，其中比色皿组件26被放置到恒 温器10中。恒温器10提供热稳定和热绝缘，从而最小化位于比色皿中的不同样本内的可能 的对流。流体28存在于恒温器10内，所述流体优选被再循环和过滤和/或包括抗菌剂，以 便保证良好的可见性。然而，没有热稳定和/或热绝缘发生的其它实施例也是可以的。经由防水门11可以接近恒温器10从而允许维护。门11和恒温器10经由连接装 置22 (诸如图3中所示的螺钉)连接。恒温器10具有允许成像和监测凝块形成的可视部分21。恒温器10可以具有一个 或多个可视部分21或者完全是透明的。
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图3还示出带有开口 23的外壳12，当带有门11的恒温器10插入外壳12中时，所 述开口用于插入比色皿1。所述外壳优选地具有至少一个连接装置(诸如螺纹)，所述连接 装置能够将比色皿保持器13连接到另一个物品(诸如板17)。图4示出一个实施例的拆卸开的仪器14的透视图，仪器14包括识别装置15 (在 这里是带有物镜16的CXD照相机)、前板17和带有比色皿1的实验比色皿保持器13。识别装置15是光学检测装置(诸如CXD照相机、摄像机、胶片)或者当前的装置 (诸如激光扫描装置、显微镜或其它光检测器)。前板17的存在是可选的。比色皿保持器13附连到仪器14内可以以不同的方式 解决。在使用前板17的情况下，比色皿保持器13可以经由连接装置25 (诸如螺纹25)被 附连。典型地，比色皿保持器13定位成(例如附连到前板17)使得比色皿1被放置在非 竖直的位置上，以便当插入物5插入比色皿1中时防止空气滞留。优选地，相对于竖直轴线 的倾角是10° -40° (参见图4和5)。可选地(未示出)，一个外壳可以保护仪器14。在图5a中，示意性地示出了比色皿1或比色皿组件26定位在比色皿保持器13中。 比色皿保持器和可选的检测装置二者在沿χ轴方向的光路上对准。垂直于光路的平面沿y 和ζ轴方向形成。如可以看到的，比色皿1或比色皿组件26垂直于光路布置。图5b是图 5a的示意性主视图并且示出比色皿1或比色皿组件26不仅垂直于光路，而且相对于竖直线 倾斜。应当理解的是，各个实施例、参数选择和范围可以任意组合。此外，根据特定实施 例，选定的定义、实施例或范围可能不适用。尽管示出和描述了本发明的当前优选的实施例，但是显然应当理解的是本发明并 不局限于此，而是可以在以下权利要求的范围内以另外的方式变化地实施和实践。
权利要求
一种用于光度分析的比色皿组件，所述比色皿组件包括比色皿、插入物和激活剂，其中所述比色皿(1)由分隔壁(4)分隔成多个腔室(2)；所述插入物(5)包括从一个区域(7)突出的多个突出部(6)，所述突出部适于装配到所述比色皿(1)的腔室(2)中；并且所述激活剂选自生理性凝血激活剂、非生理性凝血激活剂、生理性纤维蛋白溶解激活剂或非生理性纤维蛋白溶解激活剂的类别，并且其中所述激活剂位于插入物的突出部(6)上，优选地在突出部(6)的底部边缘(24)处。
2.根据权利要求1所述的比色皿组件，其中腔室(2)在剖视图中是平面平行形状和/ 或矩形形状。
3.根据前述权利要求中任一项所述的比色皿组件，其中比色皿⑴的腔室(2)布置成 一条线并且具有相等的容积。
4.根据前述权利要求中任一项所述的比色皿组件，其中比色皿(1)由透光的塑料材料 制成，优选由聚苯乙烯制成。
5.根据前述权利要求中任一项所述的比色皿组件，其中插入物(5)的突出部(6)的数 量对应于比色皿(1)的腔室(2)的数量。
6.根据前述权利要求中任一项所述的比色皿组件，其中插入物(5)在装配到比色皿 ⑴中时使得插入物(5)的表面与比色皿(1)的内表面之间的有效距离减小到0. Imm或以 下，优选减小到0. 05mm。
7.根据前述权利要求中任一项所述的比色皿组件，其中插入物(5)在每个突出部(6) 上载有相同或不同的激活剂，或者其中并非所有突出部(6)都载有激活剂。
8.根据前述权利要求中任一项所述的比色皿组件，其中插入物(5)由塑料制成，优选 由聚苯乙烯制成。
9.根据前述权利要求中任一项所述的比色皿组件，其中所述激活剂是例如组织纤维蛋 白溶酶原激活剂的生理性激活剂，或者是例如玻璃的非生理性激活剂。
10.根据前述权利要求中任一项所述的比色皿组件，其中所述突出部(6)能拆卸地或 不能拆卸地连接到插入物(5)的所述区域(7)。
11.一种比色皿保持器，所述比色皿保持器包括热稳定比色皿的恒温器(10)；和用于 将比色皿保持在恒温器(10)内并沿着光路的装置，其中恒温器(10)充满流体(28)；并且其中包括流体(28)的恒温器(10)至少部分是透光的；并且其中流体(28)也在光路内。
12.根据权利要求11所述的比色皿保持器，所述比色皿保持器适于使得比色皿垂直于 光路并且以相对于竖直线优选地成10° -40°倾角的方式布置。
13.根据权利要求11或12所述的比色皿保持器，所述比色皿保持器尤其适用于根据权 利要求1-10所述的比色皿组件(26)。
14.一种用于在体外监测三维纤维蛋白凝块形成和/或溶解的方法，所述方法包括以 下步骤A)在凝块形成的情况下(a)提供容纳血浆的一个或多个样本的比色皿；(b)使血浆与生理性凝血激活剂接触；和(c)记录纤维蛋白凝块随时间的生长。B)在凝块溶解的情况下(a)提供容纳包括一个或多个纤维蛋白凝块的血浆的一个或多个样本的比色皿；(b)使血浆与纤维蛋白溶解激活剂接触；和(c)记录纤维蛋白凝块随时间的溶解。
15.根据权利要求14所述的方法，其中在控制温度下，优选在37°C执行所述方法。
16.根据权利要求14或15所述的方法，其中步骤(a)的比色皿是权利要求1_9中任一 项所述的比色皿(1)。
17.根据权利要求14-16中任一项所述的方法，其中通过将根据权利要求1-10中任一 项所述的插入物(5)插入比色皿⑴中执行步骤(C)。
18.根据权利要求14-17中任一项所述的方法，其中所述激活剂位于插入物(5)的突 出部(6)的底部边缘(24)上，并且当插入物(5)插入比色皿(1)中时所述激活剂与血浆接 触。
19.根据权利要求14-18中任一项所述的方法，其中所述激活剂是组织纤维蛋白溶酶 原激活剂。
20.一种根据权利要求1-10中任一项所述的比色皿组件的用途，所述比色皿组件用于 在体外监测三维纤维蛋白凝块的形成或溶解。
21.一种固定的血液凝结或纤维蛋白溶解激活剂、特别是组织因子的用途，用于在体外 监测三维纤维蛋白凝块的形成。
22.一种用于在体外监测三维纤维蛋白凝块形成和/或溶解的仪器，所述仪器包括根 据权利要求11-13中任一项所述的比色皿保持器(13)和光学检测装置。
23.一种仪器，特别是根据权利要求23所述的仪器，所述仪器包括比色皿保持器(13) 和光学检测装置，其中比色皿保持器(13)垂直于光路地并且以相对于竖直线优选地成 10° -40°倾角的方式布置比色皿(1)。
全文摘要
本发明涉及一种用于在多个样本中监测三维纤维蛋白的形成或溶解的方法、专用比色皿(1)和带有载有激活剂的突出部(6)的插入物(5)。
文档编号G01N33/49GK101903772SQ200780101862
公开日2010年12月1日 申请日期2007年11月2日 优先权日2007年11月2日
发明者F·阿陶拉克哈诺夫, M·奥瓦涅索夫, M·潘特利夫, V·萨巴什 申请人:医学塑料股份有限公司;医学创新有限公司