专利名称：一种乳中α-酪蛋白含量的检测方法
技术领域：
本发明涉及一种乳中a-酪蛋白含量的检测方法，尤其是一种利用毛细管电 泳检测乳中a-酪蛋白含量的方法，特别是关于毛细管电泳检测乳中oc-酪蛋白含 量过程中样品的处理步骤的改进。
背景技术：
酪蛋白制品是乳品工业的主要产品之一，由于其具有优良的功能特性和较 高的营养价值，因此在食品工业和其他工业上都得到了广泛的应用。酪蛋白具 有较高的营养价值，可添加到其他食品中强化蛋白质。酪蛋白能够在水中形成 胶体，具有一定的粘度和良好的持水特性，在冰淇淋生产中。添加酪蛋白酸钠 做稳定剂，具有增强脂肪乳化、保湿和改善粘度等作用。酪蛋白中存在着明显 的疏水区和亲水区，因此具有较好的乳化性和发泡性。近年来，对酪蛋白生理 功能及生物活性的研究日益增多，对酪蛋白采用各种方法改性制备改性产品也 越来越受到关注，因此酪蛋白改性制品的生产必将成为今后食品工业发展的一 大趋势。因此准确检测出乳中oi-酪蛋白含量对于乳品加工过程中各种功能及营 养的配比具有非常重要的意义。
(x-酪蛋白大约占牛乳总酪蛋白含量的45-55%，是酪蛋白胶粒结构中的基 本组成部分，主要有asl-酪蛋白和as2-酪蛋白两种形态。a-酪蛋白由199个氨 基酸组成，每个分子上结合8个磷酸根离子，结合位点主要集中在肽链的第 43—79位置处，在这个部位经酶解可得到磷肽。
目前，国内尚未有oi-酪蛋白含量检测方法的国家标准和行业标准。相关国 标有DIN-10466 —2001《牛奶和牛奶制品的全部蛋白中乳清蛋白含量的测定》、 DIN-10470-1999C牛奶和牛奶制品的全部蛋白质中乳蛋白含量和酪蛋白含量测 定》、DIN—10472 —1996《牛奶和乳制品总蛋白量中乳蛋白和酪蛋白成分量测 定-电泳法》。
毛细管电泳仪是一类包括电泳、色谱及其交叉内容的液相微分离技术。它能快速精确检测出牛奶中的掺假成分、抗生素、添加的功能性因子、乳清蛋白、 免疫球蛋白、酶、糖、添加剂和其他小分子的含量。毛细管电泳仪检测最低浓
度能达到10.5-10.8 mol/L。该方法操作简便、准确，检测到出结果时间仅为l-2h 左右。目前，毛细管电泳仪的应用前景非常广泛。
《毛细管电泳在牛乳中酪蛋白含量测定及掺假检测方面的应用》(《食品与 发酵工业》，2005年第31巻第1期，张东送、庞广昌、高法国、张涛、陈庆森、 胡志和)公开了一种毛细管电泳法分离和检测原料乳中酪蛋白的方法，该方法 离心处理原料乳来分离脂肪，但离心30min的时间较长，容易引起部分蛋白沉 淀或者脂肪残留。此外，该方法还公开了一种样品缓冲溶液，然而其对酪蛋白 的分离效果仍不够理想。
《奶制品中蛋白质测定的毛细管电泳法研究》，(《分析科学学报》，2006 年2月，第22巻第1期，唐萍、田晶、佘振宝、翁前锋、许国旺)也公开了一 种使用毛细管电泳法检测奶制品中酪蛋白的定量分析方法。
上述两种方法均使用了较长的涂层毛细管柱，但较长的毛细管柱分离时间 也较长，涂层毛细管柱的价格相对较高、容易损坏、对使用环境要求苛刻。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种利用毛细管电泳检测乳中a-酪蛋白 含量的方法，以提高a-酪蛋白的分离效果，縮短检测时间，降低检测成本。
本发明要解决的另一个技术问题是提供一种乳中a-酪蛋白含量的检测方 法，以提供一种改进的样品处理步骤。
本发明要解决的另一个技术问题是通过采用较短的未涂层毛细管柱，降低 检测成本，提高检测速度。
为解决上述技术问题，本发明提供了一种乳中ct-酪蛋白含量的检测方法， 该方法包括以下步骤将需要检测的乳样品与样品缓冲液进行混合处理，将混 合处理之后的样品通过毛细管电泳仪进行检测，所述样品缓冲液的配制方法 是三甲基氨基甲垸缓冲液加3-吗啉代丙烷磺酸、乙二胺四乙酸二钠、尿素， 处理样品时再添加(3-巯基乙醇，甲基羟乙基纤维素。
优选的，样品缓冲液的配制方法为160mmol/L三甲基氨基甲垸缓冲液加 40mmol/L3-吗啉代丙烷磺酸、60mmol/L乙二胺四乙酸二钠、7mol/L尿素，处 理样品时再添加5ul/ml的(3-巯基乙醇，甲基羟乙基纤维素0.05%，调节pH值
至8.5。
优选的，在所述乳样品与所述样品缓冲液混合前，对乳样品进行离心处理， 离心的条件为2000-6000r/min、离心5-15min，优选4500r/min、 10min。离心 的目的是去除脂肪，避免脂肪颗粒对分离峰值和分离时间的影响。
优选的，在通过所述毛细管电泳仪对所述混合处理之后的样品进行检测 前，将所述混合处理之后的样品以超声波清洗l-10min。超声波清洗可防止缓 冲液中有气体，缓冲液中含有气体将影响电流，使其忽高忽低，影响检测结果。
优选地，所述检测方法进一步包括如下步骤l)将ot-酪蛋白溶于所述样品 缓冲液中，制备得到多个不同含量a-酪蛋白的标准溶液，并对所述多个标准溶 液通过所述毛细管电泳仪分别检测得到ot-酪蛋白含量与检测结果之间的标准 曲线；2)将通过所述毛细管电泳仪检测获得的所述乳样品的检测结果与所述 标准曲线比对，得到所述乳样品中a-酪蛋白的含量。
上述步骤l)中，在所述样品缓冲液中溶解(x-酪蛋白标准物质，配制成 4mg/ml、 2mg/ml、 lmg/ml、 0.5mg/ml、 0.25mg/ml的标准溶液。
所述乳样品的上清液或所述(x-酪蛋白标准物质与所述样品缓冲液使用漩 涡混合器摇匀。该仪器能混合样品比较均匀，同时对样品不会产生任何破坏作 用。
上述毛细管电泳仪检测参数如下检测温度15-40°C，毛细管柱直径 25-75pm、长度20-600 mm， 二极管阵列检测器或紫外光检测器，压力进样或 电动进样，压力为0-lpsi，进样时间ls-20s，检测温度为15-40°C，工作电压 7-30 kV;优选参数为检测温度为3(TC，毛细管柱直径25-75pim、长度20mm， 压力进样，压力为0.5psi，进样时间5s-20s，工作电压15-"kV。
上述毛细管柱可使用涂层石英毛细管柱也可以使用未涂层的石英毛细管柱。
优选的，使用涂层石英毛细管柱时，上述电泳工作电压为20kV，使用未 涂层石英毛细管柱时，电泳工作电压为25kV。
优选的，上述毛细管电泳检测时电泳模式为区带电泳或凝胶电泳，其电泳 缓冲液为无机盐缓冲液，pH2.0-9.0，优选磷酸盐、硼酸或柠檬酸缓冲液。
上述的检测结果为样品分离的图谱，运用毛细管电泳仪所带的分析软件, 积分各峰的峰高或峰面积，与标准曲线比对，计算出样品浓度，再乘稀释倍数， 即得实际浓度。本发明所提供的检测方法与现有的方法相比具有以下优点
1. 样品离心时间短，不会引起部分蛋白沉淀或者脂肪残留，其离心分离效 果较好；
2. 样品缓冲液能有效防止蛋白质吸附于毛细管管壁上，能准确反映出蛋白 质实际含量；同时能使各种蛋白保持独立状态，去除相互干扰和聚集，与现有 技术相比，明显提高蛋白质分离效果。更具体的说与现有技术相比，其尿素 含量的提高提高了吸光度值，分离效果好，分离吸光度值增加了50%左右；(3-巯基乙醇作为电荷表面活性剂，使分离效果明显提高；使用甲基羟乙基纤维素
作为动态网络形成剂其分离效果比使用甲基羟乙基纤维素更佳。
3. 本发明的方法可以使用涂层石英毛细管柱也可以使用未涂层的石英毛细 管柱，使用未涂层石英毛细管柱价格低廉、坚韧耐用，对使用环境要求底，可 以降低检测成本。
4. 本发明的方法可以使用较短的石英毛细管柱，其分离速度较快。
5. 本发明的方法线性回归方程相关系数〉0.98，其线性范围在 0.01mg/ml-2mg/ml，最低检出限为0.15ng，最低检出浓度为0.005mg/ml，精确 度达90%以上，标准样品回收率达到90%以上，样品回收率达70%以上，能有 效检测出样品中的(x-酪蛋白的含量。
图1是本发明一个实施例中的a-酪蛋白标准曲线； 图2是本发明一个实施例中的a-酪蛋白检测分离图谱； 图3是本发明的另一实施例中的a-酪蛋白标准标准曲线； 图4是本发明的另一实施例中的a-酪蛋白检测分离图谱； 图5是本发明的又一实施例中的a-酪蛋白检测分离图谱； 图6是本发明的又一实施例中的(x-酪蛋白检测分离图谱-， 图7是不同离心转速下酪蛋白检测分离图谱； 图8是不同尿素浓度下酪蛋白检测分离图谱；
图9是分别使用e-巯基乙醇和DL-二硫苏糖醇作为电荷表面活性剂的酪 蛋白检测分离图谱；
图10是使用羟丙基甲基纤维素和甲基羟乙基纤维素的酪蛋白检测分离图
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具体实施例方式
下面将结合具体实施方案对本发明的方法做更详细的说明。本领域技术人 员应当理解，下述实施例均用于对本发明所要求保护的范围进行实例性的描 述，以此概括本发明的各参数的相对范围，因而不能将之理解为对本发明的一 种具体限制。
实施例l检测牛乳中ot-酪蛋白含量(使用涂层石英毛细管柱)
1. 样品缓冲液的配制160 mmol/L三甲基氨基甲烷缓冲液中加40 mmol/L 3-吗啉代丙垸磺酸，60mmol/L乙二胺四乙酸二钠，7mol/L尿素，处理样品时 添加5ul/ml的p-巯基乙醇，甲基羟乙基纤维素0.05%，使用0.1M氢氧化钠溶 液把pH值调至8.5。
2. 电泳缓冲液的配制0.32mol/L柠檬酸，20 mmol/L柠檬酸三钠，7 mol/L 尿素，羟丙基甲基纤维素0.05%。
3. 高压毛细管电泳仪(美国贝克曼库尔特公司P/ACE MDQ毛细管电泳仪)， 检测参数检测温度控制在3(TC，使用直径为50pm、长度为20mm的涂层石 英毛细管柱，二极管阵列检测器(DAD检测器)，压力进样，进样压力为0.5psi， 进样时间为5s，工作电压为20kV。
4. 标准曲线的制定将(X-酪蛋白标准品溶于样品缓冲液中，配制成浓度分 别为4mg/ml、 2mg/ml、 lmg/ml、 0.5mg/ml、 0.25mg/ml的标准溶液。使用漩涡 混合器摇匀，精确提取40ul处理后的标准溶液加入样品管中，之后使用前述 高压毛细管电泳仪测定。利用毛细管电泳仪自带软件32KamtTM8.0获得的图谱 各峰积分后的峰面积分别为2851350、 1398500、 740061、 368065、 150017，利 用高压毛细管电泳仪自带32KamtTM8.0软件得出标准曲线如图1所示(图中的 横坐标代表采样值，单位为AU;纵坐标代表拟合值，单位ml/L)，其线性回 归相关系数为0.9995，最低检出限为O.Olug，最低检出含量为0.25mg/ml，标 准样品回收率达91%。分离前，把电泳缓冲液加入到仪器所特有的容量瓶中， 待检测。
5. 样品处理和检测取牛乳样品加入15ml的离心管中，在4500r/min离心 条件下离心10min。准确提取离心处理之后的牛乳样品上清液100ul置入冻存 管(或其他容器)。提取900ul样品缓冲液加入冻存管(或其他容器)，并使用
漩涡混合器混匀。精确提取40ul处理后的样品加入样品管中，放置于超声波
清洗机3min，之后使用高压毛细管电泳仪测定。
6.样品定量读数仪器检测后得到样品分离的图谱，如图2所示(图中的 横坐标代表分离时间，单位为min;纵坐标代表吸光值，单位AU)，利用高压 毛细管电泳仪所自带的32KaratTM8.0软件，得到a-酪蛋白的峰面积为1036081， 利用毛细管电泳仪自带32KaratTM8.0软件自动套入上述图1所示标准曲线方程 内计算出试样浓度为1.4mg/ml，再乘稀释倍数10，即得实际浓度为14mg/ml， 所以该奶样含有的a-酪蛋白浓度为14g/L。
实施例2检测牛乳中ot-酪蛋白含量(使用未涂层石英毛细管柱)
1. 样品缓冲液的配制160mmol/L三甲基氨基甲垸缓冲液中加40mmol/L 3-吗啉代丙烷磺酸，60mmol/L乙二胺四乙酸二钠，7 mol/L尿素,处理样品时添 加5ul/ml的P-巯基乙醇，甲基羟乙基纤维素0.05%。使用0.1M氢氧化钠调至 pH值为8.5。
2. 电泳缓冲液的配制0.32 mol/L柠檬酸，20 mmol/L柠檬酸三钠，7 mol/L 尿素，羟丙基甲基纤维素0.05%。
3. 毛细管电泳仪(美国贝克曼库尔特公司P/ACEMDQ毛细管电泳仪)，检 测参数检测温度控制在3(TC，使用直径为75pm、长度为600 mm的未涂层 石英毛细管柱，DAD检测器，压力进样，进样压力为0.5psi，进样时间为5s， 工作电压为25kV。
4. 校准曲线的制定将ot-酪蛋白标准品溶于样品缓冲液中，配制成浓度分 别为4mg/ml、 2mg/ml、 lmg/ml、 0.5mg/ml、 0.25mg/ml的标准溶液。使用漩涡 混合器摇匀，精确提取40ul处理后的标准溶液加入样品管中，使用高压毛细 管电泳仪测定。检测得到的图谱各峰积分后的峰面积分别为，2951350、 1487620、 751200、 369034、 140010，利用32KaratTM8.0分析软件得出标准曲 线如图3所示，其线性回归相关系数为0.9996，最低检出线为O.Olug，最低检 出含量为0.25mg/ml，标准样品回收率达90%。分离前，把电泳缓冲液加入到 仪器所特有的容量瓶中，待检测。图中的横坐标代表采样值，单位为AU;纵 坐标代表拟合值，单位ml/L。
5. 样品处理和检测取牛乳样品加入15ml的离心管中，在4500r/min离
心条件下离心5min。准确提取离心处理之后的牛乳样品上清液100ul置入冻存 管(或其他容器)。提取900ul样品缓冲液加入冻存管(或其他容器)，并使用 漩涡混合器混匀。精确提取40ul处理样品加入样品管中，放置于超声波清洗 机3min，之后使用毛细管电泳仪测定。
6.样品定量读数仪器检测后得到样品分离的图谱，如图4所示，运用毛 细管电泳仪所带的分析软件，积分a-酪蛋白的峰面积为1124510，利用分析软 件自动套入上述图3所示标准曲线方程内计算出试样浓度为1.49mg/ml，再乘 稀释倍数IO，即得实际浓度为14.9mg/ml，所以该奶样含有的a-酪蛋白浓度为 14.9g/L。
实施例3 —种巴氏灭菌乳中ot-酪蛋白含量的检测方法
使用与实施例1相同的样品缓冲液、电泳缓冲液、以及高压毛细管电泳仪， 使用与实施例1相同的仪器检测参数。采用实施例1得到的标准曲线。
样品处理和检测步骤为把巴氏灭菌乳样品加入15ml的离心管中，在 4500r/min离心条件下离心10min。准确提取离心处理之后的巴氏灭菌乳样品上 清液100ul置入冻存管(或其他容器)。提取300ul样品缓冲液加入冻存管(或 其他容器)，并使用漩涡混合器混匀。精确提取40ul处理样品加入样品管中， 放置于超声波清洗机3min，之后使用毛细管电泳仪测定。
样品定量读数仪器检测后得到样品分离的图谱，如图5所示，运用毛细 管电泳仪所带的分析软件，积分oi-酪蛋白的峰面积为192993，利用分析软件 自动套入图1所示标准曲线方程内计算出试样浓度为2.76mg/ml,再乘稀释倍 数5，即得实际浓度为13.8mg/ml，所以该样品含有的a-酪蛋白浓度为13.8g/L。
实施例4 一种UHT灭菌乳中a-酪蛋白含量的检测方法
使用与实施例1相同的样品缓冲液、电泳缓冲液、以及高压毛细管电泳仪， 使用与实施例相同的仪器检测参数。采用实施例1得到的标准曲线。
样品处理和检测步骤为把UHT灭菌乳样品加入15ml的离心管中，在 4500r/min离心条件下离心10min。准确提取离心处理之后的UHT灭菌乳样品 上清液50ul置入冻存管(或其他容器)。提取950ul样品缓冲液加入冻存管(或 其他容器)，并使用漩涡混合器混匀。精确提取40ul处理样品加入样品管中，
放置于超声波清洗机3min，之后使用毛细管电泳仪测定。
样品定量读数仪器检测后得到样品分离的图谱，如图6所示，运用毛细 管电泳仪所带的分析软件，积分(x-酪蛋白的峰面积为574181，利用分析软件 自动套入图1所示标准曲线方程内计算出试样浓度为0.78mg/ml，再乘稀释倍 数20，即得实际浓度为15.6mg/ml，所以该样品含有的a-酪蛋白浓度为15.6g/L。
实施例5 —种原料乳中a-酪蛋白含量的检测方法
样品缓冲液、电泳缓冲液以及指定标准曲线的方法与实施例l相同。高压 毛细管电泳仪(美国贝克曼库尔特公司P/ACEMDQ毛细管电泳仪)，检测参数 检测温度控制在15°C，使用直径为25|im、长度为60 mm的未涂层石英毛细管 柱，紫外光检测器，电动进样，进样压力为Opsi，进样时间为20s，工作电压 为7kV。
检测得到标准曲线，其线性回归相关系数为0.9996，最低检出限为O.Olug， 最低检出含量为0.15mg/ml，标准样品回收率达90%，样品回收率70%。
样品处理和检测取原料乳样品加入15ml的离心管中，在2000r/min离心 条件下离心15min。准确提取离心处理之后的原料乳样品上清液40ul置入冻存 管(或其他容器)。提取800ul样品缓冲液加入冻存管(或其他容器)，并使用 漩涡混合器混匀。精确提取40ul处理样品加入样品管中，放置于超声波清洗 机lmin，之后使用毛细管电泳仪测定。
样品定量读数仪器检测后得到样品分离的图谱，运用毛细管电泳仪所带 的分析软件，积分a-酪蛋白的峰面积为1134560，利用分析软件自动套入标准 曲线方程内计算出试样浓度为1.69mg/ml，再乘稀释倍数21，即得实际浓度为 35.49mg/ml，所以该奶样含有的a-酪蛋白浓度为35.49g/L。
实施例6—种原料乳中a-酪蛋白含量的检测方法
样品缓冲液、电泳缓冲液以及指定标准曲线的方法与实施例1相同。高压 毛细管电泳仪(美菌贝克曼库尔特公司P/ACEMDQ毛细管电泳仪)，检测参数: 检测温度控制在15°C，使用直径为50pm、长度为60 mm的未涂层石英毛细管 柱，紫外光检测器，压力进样，进样压力为lpsi，进样时间为ls，工作电压为 30kV。检测得到标准曲线，其线性回归相关系数为0.9991，最低检出限为0.01ug， 最低检出含量为0.15mg/ml，标准样品回收率达92。/。，样品回收率90%。
样品处理和检测取原料乳样品加入15ml的离心管中，在6000r/min离心 条件下离心5min。准确提取离心处理之后的原料乳样品上清液100ul置入冻存 管(或其他容器)。提取900ul样品缓冲液加入冻存管(或其他容器)，并使用 漩涡混合器混匀。精确提取40ul处理样品加入样品管中，放置于超声波清洗 机10min，之后使用毛细管电泳仪测定。
样品定量读数仪器检测后得到样品分离的图谱，运用毛细管电泳仪所带 的分析软件，积分cx-酪蛋白的峰面积为11563020，利用分析软件自动套入标 准曲线方程内计算出试样浓度为1.32mg/ml，再乘稀释倍数10，即得实际浓度 为13.20mg/ml，所以该奶样含有的a-酪蛋白浓度为13.20g/L。
实施例7对比实施例
1. 不同离心转速下分离效果对比
按照实施例1的方法进行试验，调整离心转速，结果如图7所示a-酪蛋 白分离效果好到差的顺序依次为4500 r/min、 4000 r/min和3500 r/min。
2. 不同样品缓冲液组成时分离效果的对比
1) 不同尿素含量下，分离效果对比，具体实验歩骤为固定其他成分，分 别使用尿素浓度为7mol/L和6mol/L的样品缓冲液处理样品，检测原奶，得到 a -酪蛋白如图8所示，尿素含量为7mol/L的吸光值比6mol/L的吸光值要高， 而且整个图谱清晰、分离效果更好，分离吸光值增加50%左右。
2) 不同电荷表面活性剂的分离效果对比，固定其他成分，分别使用P-巯 基乙醇和DL-二硫苏糖醇(DTT)，以上两种物质均为电荷表面活性剂。但是 P-巯基乙醇功效比DTT大六倍，很显然功能越强分离效果越好。检测原奶后 得到的图谱如图9所示，可见使用(3-巯基乙醇的图谱明显比使用DTT的分离 效果好。
3) 使用羟丙基甲基纤维素和甲基羟乙基纤维素的分离效果对比，两者均 为动态网络形成剂。分离巴氏杀菌乳，得到的分离图谱如图10所示可以看 到，使用羟丙基甲基纤维素比使用了甲基羟乙基纤维素分离效果更佳。
权利要求
1.一种乳中α-酪蛋白含量的检测方法，包括以下步骤将需要检测的乳样品与样品缓冲液进行混合处理，将混合处理之后的样品通过毛细管电泳仪进行检测，其特征在于，所述样品缓冲液的配制方法是三甲基氨基甲烷缓冲液加3-吗啉代丙烷磺酸、乙二胺四乙酸二钠、尿素，处理样品时再添加β-巯基乙醇，甲基羟乙基纤维素。
2. 根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述样品缓冲液的配制方法是160mmol/L三甲基氨基甲烷缓冲液加40mmol/L3-吗啉代丙垸磺酸、 60mmol/L乙二胺四乙酸二钠、7mol/L尿素，处理样品时再添加5ul/ml的|3-巯基乙醇，甲基羟乙基纤维素0.05%，调节pH值至8.5。
3. 根据权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于，在所述乳样品与所述 样品缓冲液进行混合处理前，将所述乳样品进行离心处理，离心的条件为 转速2000-6000r/min、离心5-15min;优选转速4500r/min、离心时间10min。
4. 根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，在通过所述毛细管电泳仪 对所述混合处理之后的样品进行检测前，将所述混合处理之后的样品以超 声波清洗l-10min。
5. 根据权利要求1-4之一所述的检测方法，其特征在于，在所述乳样品与所 述样品缓冲液进行混合处理的步骤中，取所述乳样品或离心后的的上清液 与所述样品缓冲液进行混合处理，乳样品的上清液与所述样品缓冲液的混 合比例为l:(3-20)(v/v)。
6. 根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，该方法进一步包括如下步 骤1)将a-酪蛋白溶于所述样品缓冲液中，制备得到多个不同含量a-酪蛋 白的标准溶液，并对所述多个标准溶液通过所述毛细管电泳仪分别检测得 到a-酪蛋白含量与检测结果之间的标准曲线；2)将通过所述毛细管电泳仪 检测获得的所述乳样品的检测结果与所述标准曲线比对，得到所述乳样品 中cc-酪蛋白的含量。
7. 根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于，在所述步骤l)中，在所述 样品缓冲液中溶解a-酪蛋白标准物质，配制成4mg/ml、 2mg/ml、 lmg/ml、 0.5mg/ml、 0.25mg/ml的标准溶液。
8. 根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于，所述乳样品的上清液或所 述a-酪蛋白标准物质与所述样品缓冲液使用漩涡混合器摇匀。
9. 根据权利要求7或8所述的检测方法，其特征在于，所述毛细管电泳仪的 检测参数为检测温度15-40°C，毛细管柱直径25-75pm、长度20-600 mm， 二极管阵列检测器或紫外光检测器，压力进样或电动进样，压力为0-lpsi， 进样时间ls-20s，检测温度为15-40°C，工作电压7-30kV;优选参数为 检测温度为3(TC，毛细管柱直径25-75pm、长度20mm，压力进样，压力 为0.5psi，进样时间5s-20s，工作电压15-25 kV。
10. 根据权利要求9所述的检测方法，其特征在于，所述毛细管柱为涂层石英 毛细管柱，所述工作电压为20kV;或所述毛细管柱为未涂层石英毛细管柱， 所述工作电压为25kV。
全文摘要
本发明涉及一种乳中α-酪蛋白含量的检测方法，包括以下步骤将需要检测的乳样品与样品缓冲液进行混合处理，将混合处理之后的样品通过毛细管电泳仪进行检测，所述样品缓冲液的配制方法是三甲基氨基甲烷缓冲液加3-吗啉代丙烷磺酸、乙二胺四乙酸二钠、尿素，处理样品时再添加β-巯基乙醇，甲基羟乙基纤维素。其中乳样品处理的步骤包括乳样品的离心处理，取离心处理后的样品上清液与样品缓冲液混合，再经超声波清洗。本发明的方法分离效果好、速度快，可使用未涂层毛细管柱。本发明的方法线性回归方程相关系数＞0.98，最低检出线为0.15ng，最低检出浓度为0.005mg/ml，精确度达90％以上。
文档编号G01N27/447GK101339159SQ20081014695
公开日2009年1月7日 申请日期2008年8月28日 优先权日2008年8月28日
发明者刘卫星, 孙国庆, 康小红, 胡新宇 申请人:内蒙古蒙牛乳业(集团)股份有限公司