专利名称：一种检测酸浆宿萼中β-隐黄质含量的方法
一种检测酸浆宿萼中β-隐黄质含量的方法
技术领域：
本发明属于天然植物中有效成分的检测方法的技术领域，更具体地，本发明涉及一种能够检测酸浆宿萼中β -隐黄质含量的反相HPLC方法。
背景技术：
% (Physalis alkekengi L. var. franchetii(Masters)Makino) M ^ (Solanaceae)酸浆属(Physalis)的一种多年生草本植物，又名“红姑娘”、“洋姑娘”、“红灯笼”、“锦灯笼”等。酸浆果实为球状浆果，外部有宽大四棱型宿萼包裹，呈灯笼形囊状，在我国大部分地区均有分布，全草均可入药，果实可加工成果汁和果酱等制品。酸浆的宿萼和果实组织中含有丰富的β -隐黄质，且以脂肪酸酯形式存在，其结构式如下，R =脂肪酸基
权利要求
1.酸浆宿萼中隐黄质含量的测定方法，其特征在于该方法的步骤如下Α)样品预处理将酸浆的宿萼与浆果剥离，再用组织捣碎机将酸浆宿萼粉碎成丝状宿萼样品；B)游离水含量的测定把准确称取的丝状宿萼样品置于表面皿中，在温度40 80°C烘箱中烘干至恒重，然后，按下式计算样品中游离水的含量 M-M'X =-xlOO(1)M式中X=游离水含量，以％ (重量)计；M =烘干前重量，以克计；M，=烘干后重量，以克计；C)总类胡萝卜素提取准确称取步骤A)得到的丝状宿萼样品10重量份，再加入5 8重量份石英砂和以所述丝状宿萼样品重量计4 8倍的选自丙酮、乙醇、甲醇或四氢呋喃的第一有机溶剂，研磨 5 15min后静置分离4 8min，取上清液作为“第一萃取溶媒”；剩余物再加入与所述的第一有机溶剂等量的选自正己烷、石油醚或乙酸乙酯的第二有机溶剂，研磨5 15min后静置分离4 8min，取上清液作为“第二萃取溶媒”，并反复用第二有机溶剂研磨提取，直至上清液和提余物为无色；将第一萃取溶媒和所有的第二萃取溶媒合并，置于分液漏斗中，加入与合并萃取溶媒等量的蒸馏水，剧烈震荡混合，静置分离25 35min，取上清液在温度40°C、压力-0. 06MPa 与旋转速度60rpm的条件下旋转浓缩至干，得到0. 5 1. 5重量份含有总类胡萝卜素酯的提取物；D)水解使用20 40重量份的由正己烷-乙醇-丙酮-甲苯按照体积比10 6 7 7组成的稀释液将步骤C)得到的含有总类胡萝卜素酯的提取物完全溶解，得到所述提取物溶液再加入以所述溶液体积计0. 1 0. 5倍重量百分浓度为35 45 %的碱性甲醇溶液，在温度50 60°C下进行水解反应15 25min后，冷却到室温；然后，将所述冷却反应液转移至分液漏斗中，并用20 40重量份的正己烷反复洗涤反应瓶，洗涤液合并至分液漏斗中，向反应液中加入20 60重量份的重量百分浓度为5 15%的Na2SO4溶液，剧烈震荡后，在避光的条件下静置分离0. 8 1. 4h，弃去下层相，将收集的上层溶液转移至IOOmL棕色容量瓶中，用正己烷定容至刻度，准确移取其溶液lmL，离心分离10 15min，得到的上清液进行HPLC分析；E)HPLC分析a) β -隐黄质标准溶液配制准确称取β-隐黄质参比样品lmg，用ImL丙酮溶解后转移至25mL棕色容量瓶中，用正己烷定容至刻度，配制成40 μ g/mL的储备液；准确量取配制好的储备液，用逐级稀释法，配制成质量浓度分别为0. 00,0. 039,0. 078、 0. 156,0. 313,0. 625、1. 250,2. 500,5. 000 μ g/mL 的标准溶液；b)HPLC分析条件的设定色谱柱0丨3!110118丨1"1，54111，4.611111^25011;流动相六以体积计9 1的乙腈-水混合物；流动相B 乙酸乙酯；线性梯度洗脱流动相B的体积百分浓度在25min内由0%增加至 100% ；流速1. OmL/min ；检测波长450nm ；PDA 波长范围 250nm 550nm ；进样量20 μ L ；c)标准曲线绘制使用C18-HPLC，测定步骤a)中配制的β -隐黄质标准溶液在λ = 450nm处的峰面积， 再结合所述标准溶液浓度绘制标准曲线；d)样品中β-隐黄质含量的HPLC测定使用高效色谱仪，在步骤b)设定的条件下测定样品在λ = 450nm处的峰面积，根据步骤c)所绘制的标准曲线得到该样品的隐黄质含量。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的酸浆宿萼用酸浆的浆果代替。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤B使用的第一萃取溶剂选自丙酮、乙醇或四氢呋喃。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤B使用的第二萃取溶剂选自正己烷或乙酸乙酯。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的碱性甲醇溶液选自氢氧化钾-甲醇溶液或氢氧化钠-甲醇溶液。
全文摘要
本发明涉及一种能够检测酸浆宿萼中β-隐黄质含量的反相HPLC方法。该方法包括样品预处理、游离水含量的测定、总类胡萝卜素提取、水解和HPLC分析等步骤。本方法可以准确客观地检测出酸浆果实和宿萼中β-隐黄质的含量，将有非常显著的现实应用意义。
文档编号G01N30/88GK102253161SQ20111010636
公开日2011年11月23日 申请日期2011年4月27日 优先权日2011年4月27日
发明者徐志文, 惠伯棣, 王旭, 胡春凤 申请人:秦皇岛大惠生物技术有限公司