专利名称：一种顺丙烯磷酸中顺反异构体及其相关杂质的检测方法
技术领域：
本发明属于药物分析领域，具体涉及一种顺丙烯磷酸中顺反异构体及其相关杂质的检测方法。
背景技术：
目前，磷霉素1、2_环氧丙基磷酸二钠盐，是一种游离酸，最初从Mi^ptomyces fradicle中分离，对革兰氏阳性和阴性菌有效，其作用机理是抑制细菌细胞壁的合成导致细菌死亡。磷霉素能与一种细菌细胞壁合成酶相结合，阻碍细菌利用有关物质合成细胞壁的第一步反应，从而起杀菌作用，磷霉素抗菌谱较广，主要用于金萄菌、大肠埃希菌、肺炎雷伯菌、产气杆菌、沙雷菌属、志贺菌属、铜绿假单孢菌等敏感菌引起的呼吸道、泌尿道、肠道和皮肤软组织感染，以及败血症、腹膜炎、脑膜炎等。综上所述其疗效仅次于青霉素类，发生过敏性休克的机会甚少。所以受到广大的医务人员及患者的欢迎，使用磷霉素的诊所和个人随处可见。顺丙烯磷酸是制备磷霉素的中间体，丙二稀磷酸为顺丙烯磷酸的前体，在磷霉素的制备过程中，顺丙烯磷酸中的反异构体及丙二稀磷酸的含量直接影响到磷霉素系列产品的收率及质量。为保证药品的质量及其安全性，需建立检测方法对磷霉素中顺丙烯磷酸、顺丙烯磷酸中的反异构体及丙二稀磷酸的含量进行控制。目前，顺丙烯磷酸中顺反异构体及其相关杂质的检测方法，未见相关报道。因此，研制开发一种顺丙烯磷酸中顺反异构体及其相关杂质的检测方法一直是亟待解决的新课题。
发明内容
本发明的目的在于提供一种顺丙烯磷酸中顺反异构体及其相关杂质的检测方法， 本方法采用高效液相色谱法监控顺丙烯磷酸中顺反异构体及其前体丙二稀磷酸的含量，以确保能够持续稳定地生产出质量均一的合格产品。本发明的目的是这样实现的一种顺丙烯磷酸中顺反异构体及其相关杂质的检测方法，所述方法包括如下步骤(1)色谱条件色谱柱C-18柱，4. 6mmX250mmX5. Oym ；流速1. Oml/min ；紫外检测器，检测波长 225nm，进样量 10 μ 1 ；流动相50mmol/L的磷酸氢二钾水溶液-甲醇；(2)供试液制备取供试品0. 1 μ 1，用流动相溶解并稀释到25ml，过滤；(3)取供试液，进样10微升，记录图谱，顺丙烯磷酸保留时间为12. 3min，其顺反异构体相对保留值为1. 15，丙二稀磷酸相对保留值为0. 38，采用面积归一化法计算各杂质含量；所述流动相中50mmol/L的磷酸氢二钾水溶液中含2%的四丁基氢氧化铵水溶液； 所述四丁基氢氧化铵水溶液的浓度为；所述流动相磷酸氢二钾水溶液的PH需用磷酸调到7.0;所述流动相磷酸氢二钾水溶液与甲醇体积比为90 1;所述检测方法根据保留时间及相对保留值对顺丙烯磷酸及其顺反异构体、丙二稀磷酸进行识别。本发明的要点在于它的检测方法。该检测方法的基本原理是，顺丙烯磷酸、丙二稀磷酸、顺丙烯磷酸反式异构体在流动相中的保留时间不同，利用HPLC检测方法分别计算其含量。一种顺丙烯磷酸中顺反异构体及其相关杂质的检测方法与现有技术相比，具有通过该方法检测顺丙烯磷酸中顺反异构体及其相关杂质，重现性、灵敏度、准确度均能符合要求等优点，将广泛的应用于药物分析领域中。
具体实施例方式以下实例将有助于对本发明的了解，但这些实例仅为了对本发明加以说明，本发明并不限于这些内容。一种顺丙烯磷酸中顺反异构体及其相关杂质的检测方法，所述方法包括如下步骤(1)色谱条件色谱柱C-18柱，4. 6_Χ250_Χ5. Ομπι ；流速1. Oml/min ；紫外检测器，检测波长 225nm，进样量 10 μ 1 ；流动相50mmol/L的磷酸氢二钾水溶液-甲醇；(2)供试液制备取供试品0. 1 μ 1，用流动相溶解并稀释到25ml，过滤；(3)取供试液，进样10微升，记录图谱，顺丙烯磷酸保留时间为12. 3min，其顺反异构体相对保留值为1. 15，丙二稀磷酸相对保留值为0. 38，采用面积归一化法计算各杂质含量；所述流动相中50mmol/L的磷酸氢二钾水溶液中含2%的四丁基氢氧化铵水溶液； 所述四丁基氢氧化铵水溶液的浓度为；所述流动相磷酸氢二钾水溶液的PH需用磷酸调到7.0;所述流动相磷酸氢二钾水溶液与甲醇体积比为90 1;所述检测方法根据保留时间及相对保留值对顺丙烯磷酸及其顺反异构体、丙二稀磷酸进行识别。下面结合实施例对本发明作进一步具体描述1.相关溶液及流动相的配制1. 1流动相的制备取磷酸二氢钾6. 8g，加水适量溶解，加入20. Oml质量百分比浓度为55%的四丁基氢氧化铵水溶液，用水稀释到1000ml，用磷酸调节pH到7. O。量取该液 900ml，与IOOml甲醇混合，过滤，脱气。1.2供试品溶液制备1. 2. 1取供试品(批号:1)0. 1ml，用流动相溶解并稀释到25ml，过滤。1. 2. 2取供试品(批号2)0. 1ml，用流动相溶解并稀释到25ml，过滤。1. 2. 3取供试品(批号3)0. 1ml，用流动相溶解并稀释到25ml，过滤。2.测定方法将3批供试品溶液各10 μ 1分别注入液相色谱仪，记录图谱。顺丙烯磷酸保留时间为12. 3min，其顺反异构体相对保留值为1. 15，丙二稀磷酸相对保留值为0. 38。采用面积归一化法计算各杂质含量。
3.检测结果供试品1丙二稀磷酸的峰面积为811140，顺丙烯磷酸的峰面积为3436614，顺丙烯磷酸反式异构体的峰面积为1409M8丙二稀磷酸含量=811140+(811140+3436614+1409248)X 100%= 14. 34%顺丙烯磷酸含量=3436614+(811140+3436614+1409248) X 100%= 60. 75%顺丙烯磷酸反式异构体含量=1409248+(811140+3436614+1409248)X 100% =
24.91%供试品2丙二稀磷酸的峰面积为831520，顺丙烯磷酸的峰面积为3386510，顺丙烯磷酸反式异构体的峰面积为1438236丙二稀磷酸含量=831520+(831520+3386510+1438236)X 100%= 14. 70%顺丙烯磷酸含量=3386510+(831520+3386510+1438236) X 100%= 59. 87%顺丙烯磷酸反式异构体含量=1438236+(831520+3386510+1438236) X 100% =
25.43%供试品3丙二稀磷酸的峰面积为820377，顺丙烯磷酸的峰面积为3356745，顺丙烯磷酸反式异构体的峰面积为1436502丙二稀磷酸含量1 = 820377^- (820377+3356745+1436502) X 100%= 14. 61%顺丙烯磷酸含量1 = 3356745 + (820377+3356745+1436502) X 100%= 59. 80%顺丙烯磷酸反式异构体含量=1436502+(820377+3356745+1436502) X 100% = 25. 59%。
权利要求
1.一种顺丙烯磷酸中顺反异构体及其相关杂质的检测方法，其特征在于所述方法包括如下步骤(1)色谱条件色谱柱c-18柱，4. 6πιπιΧ250πιπιΧ5.0μπι;流速1. Oml/min ；紫外检测器，检测波长 225nm，进样量 10 μ 1 ；流动相50mmol/L的磷酸氢二钾水溶液-甲醇；(2)供试液制备取供试品0.1 μ 1，用流动相溶解并稀释到25ml，过滤；(3)取供试液，进样10微升，记录图谱，顺丙烯磷酸保留时间为12.3min，其顺反异构体相对保留值为1. 15，丙二稀磷酸相对保留值为0. 38，采用面积归一化法计算各杂质含量。
2.根据权利要求1所述一种顺丙烯磷酸中顺反异构体及其相关杂质的检测方法，其特征在于所述流动相中50mmol/L的磷酸氢二钾水溶液中含2%的四丁基氢氧化铵水溶液。
3.根据权利要求2所述一种顺丙烯磷酸中顺反异构体及其相关杂质的检测方法，其特征在于所述四丁基氢氧化铵水溶液的浓度为55%。
4.根据权利要求1所述一种顺丙烯磷酸中顺反异构体及其相关杂质的检测方法，其特征在于所述流动相磷酸氢二钾水溶液的PH需用磷酸调到7. O。
5.根据权利要求1所述一种顺丙烯磷酸中顺反异构体及其相关杂质的检测方法，其特征在于所述流动相磷酸氢二钾水溶液与甲醇体积比为90 1。
6.根据权利要求1所述一种顺丙烯磷酸中顺反异构体及其相关杂质的检测方法，其特征在于所述检测方法根据保留时间及相对保留值对顺丙烯磷酸及其顺反异构体、丙二稀磷酸进行识别。
全文摘要
一种应用于药物分析领域中的顺丙烯磷酸中顺反异构体及其相关杂质的检测方法，所述方法包括如下步骤色谱条件色谱柱C-18柱，4.6mm×250mm×5.0μm；流速1.0ml/min；紫外检测器，检测波长225nm，进样量10μl；流动相50mmol/L的磷酸氢二钾水溶液-甲醇；供试液制备取供试品0.1μl，用流动相溶解并稀释到25ml，过滤；取供试液，进样10微升，记录图谱，顺丙烯磷酸保留时间为12.3min，其顺反异构体相对保留值为1.15，丙二稀磷酸相对保留值为0.38，采用面积归一化法计算各杂质含量；所述流动相中50mmol/L的磷酸氢二钾水溶液中含2％的四丁基氢氧化铵水溶液；所述四丁基氢氧化铵水溶液的浓度为55％。该发明通过该方法检测顺丙烯磷酸中顺反异构体及其相关杂质，重现性、灵敏度、准确度均能符合要求。
文档编号G01N30/02GK102507758SQ20111031035
公开日2012年6月20日 申请日期2011年10月13日 优先权日2011年10月13日
发明者冯文宇, 周秀峰, 唐奎山, 娄玉涛, 孟涛, 尤楠, 苏贵弟, 邓暤, 金玉坤 申请人:东北制药集团股份有限公司