一种使用四苯乙烯衍生物检测乳制品中酪蛋白的方法
【专利摘要】本发明提供一种使用四苯乙烯衍生物检测乳制品中酪蛋白的方法，具体为四苯乙烯衍生物制备用于检测乳制品中酪蛋白的产品中的应用，所述四苯乙烯衍生物的结构式如下述结构式Ⅰ所示；所述方法为：制备标准曲线；沉淀乳制品中的酪蛋白；再将沉淀的酪蛋白溶解；将溶解的酪蛋白与上述所述的四苯乙烯衍生物的溶液混合，测定荧光值；再将测得的荧光值与标准曲线对比，得出酪蛋白的含量。本发明使用可聚集发光的四苯乙烯衍生物，在遇到乳制品中的酪蛋白时，会进入蛋白结构中成为聚集态，发出荧光，可以防止干扰，从而可以有效地测定乳制品如牛奶和奶粉中酪蛋白的含量。式（Ⅰ）
【专利说明】—种使用四苯乙烯衍生物检测乳制品中酪蛋白的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及生物工程和食品安全领域。具体涉及一种酪蛋白的检测方法，尤其涉及一种使用四苯乙烯衍生物检测乳制品中酪蛋白的检测方法。
【背景技术】
[0002]目前牛奶中蛋白质的定量检测方法的原理比较单一，许多年来并没有新的检测方法出现，基本只有凯氏定氮法，双缩脲法，考马斯亮蓝检测等几种标准方法，凯氏定氮是通过测定蛋白样品含量中的氮含量来推算蛋白质的含量。双缩脲蛋白定量是通过蛋白质含的特殊肽键结构与铜离子发生络合反应变色来定量。考马斯亮蓝法是通过考马斯亮蓝分子与蛋白特异性结合变色来定量。这些方法很容易被添加的伪蛋白物质干扰，如氨基酸，明胶，三聚氰胺，尿素等。
[0003]而且，现有牛奶蛋白的测定方法容易受到干扰，比如国标中规定的双缩脲蛋白定量方法会受到氨基酸的干扰，凯氏定氮法容易受到三聚氰胺和尿素的干扰，无法得到准确的定量数值。这些检测方法的灵敏度、特异性比较差。灵敏度差无法进行低蛋白含量牛奶和奶制品、乳饮料的检测。特异性差指对所有的蛋白反应相同，无法分别出牛奶中的蛋白与添加的劣质蛋白。
[0004]因而，需要一种方法，使用新的原理避免常规干扰物质，与现有方法互补；同时需要更高的灵敏度和特异性来完成比较特殊样品如乳制品的检测。
【发明内容】
[0005]因此，本发明的目的是针对现有技术牛奶蛋白的测定方法易受干扰，灵敏度低，特异性差的不足，提供一种使用四苯乙烯衍生物检测乳制品中酪蛋白的方法，从而能够有效地测定乳制品中酪蛋白的含量，并且灵敏度高，特异性强。
[0006]除非特别指明，本文中的“乳制品”是指“奶粉、牛奶或乳饮料”。
[0007]针对上述目的，本发明提供的技术方案如下:
[0008]一方面，本发明提供一种四苯乙烯衍生物在制备用于检测乳制品中酪蛋白的产品中的应用，所述四苯乙烯衍生物的结构式如下述结构式I所示:
[0009]
[0010]式(I)[0011]其中，R或 R1 选自-H、-XYH、-B (OH) 2、-XYCOOR'、-XYCOOH、-XYNH2、-XYNHR'、-XYNHR' 2、-XYN+R' 3Br\ -XYOH、-XYSH、-XYSO3If ；
[0012]R,选自-(CH2) nCH3 和-CH2-C6H5 ；
[0013]X为NH，O或没有；
[0014]Y 为(CH2)n;
[0015]或XY选自-(OCH2CH2)n和-(OCH2CH2CH2)n，其中0与四苯乙烯环一侧相连；
[0016]M+为碱金属离子；
[0017]n=(T20。
[0018]优选地，n=l~10。
[0019]优选地，n=l。
[0020]优选地，M+为Na+或K+，还优选地，M+为Na+。
[0021]优选地，所述四苯乙烯衍生物如下述式II所示，其简写为BSP0TPE:
[0022]
【权利要求】
1.一种四苯乙烯衍生物在制备用于检测乳制品中酪蛋白的产品中的应用，所述四苯乙烯衍生物的结构式如下述结构式I所示:
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，n=f10，优选地，n=l，更优选地，M+为Na+或K+,还优选地，M+为Na+。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述四苯乙烯衍生物如下述式II所示:
4.根据权利要求1至3中任一项所述的应用，其特征在于，所述产品为试剂盒、试剂或药物。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的应用，其特征在于，所述乳制品选自奶粉、牛奶和乳饮料，优选地，所述奶粉选自全脂奶粉和脱脂奶粉，或优选地，所述牛奶选自脱脂牛奶和全脂牛奶，或优选地，所述乳饮料为无脂乳饮料。
6.一种用于检测乳制品中酪蛋白的方法，所述方法是通过使用权利要求1至5任一项中所述的四苯乙烯衍生物进行的。
7.根据权利要求6所述的用于检测乳制品中酪蛋白的方法，其特征在于，具体包括如下步骤:1)将酪蛋白溶液与权利要求1至5任一项中所述的四苯乙烯衍生物的溶液混合为混合液，制成标准曲线； 2)通过乙酸或盐酸调节溶液的pH值，使乳制品中的酪蛋白沉淀，优选地，调节溶液的pH值至4.7，优选地，乙酸或盐酸的浓度为0.1M^lOM,乙酸或盐酸的浓度优选为2M，更优选地，于5000rpnTl5000rpm离心5~20分钟沉淀酪蛋白，还优选地，于5000rpm离心10分钟； 3)再将步骤I)中制得的酪蛋白沉淀溶于水中，制得酪蛋白溶液； 4)将步骤3)制得的酪蛋白溶液与权利要求1至5任一项中所述的四苯乙烯衍生物的溶液混合为混合液，测定荧光值，优选地，酪蛋白溶液与四苯乙烯衍生物的溶液的体积比为I: 10~10:1，体积比优选1:1; 5)将步骤4)测得的荧光值与步骤I)的标准曲线对比，得出酪蛋白的含量。
8.根据权利要求7所述的用于检测乳制品中酪蛋白的方法，其特征在于，在步骤2)中，当乳制品中含有脂肪时，在用乙酸或盐酸将酪蛋白沉淀前，还包括脱脂处理的步骤。
9.根据权利要求8所述的用于检测乳制品中酪蛋白的方法，其特征在于，所述脱脂处理包括以下步骤: 将乳制品加水溶解或稀释成溶液，再将所述溶液离心，去除溶液表面的脂肪，优选地，将溶液于2000rpm离心10~20分钟，离心优选10分钟。
10.根据权利 要求7至9中任一项所述的用于乳制品中检测酪蛋白的方法，其特征在于，在步骤I)中，所述酪蛋白溶液的浓度为(T5mg/ml。
11.根据权利要求7至10中任一项所述的用于检测乳制品中酪蛋白的方法，其特征在于，在步骤4)中，于370nm的激发光，450nm的发射光测定荧光值。
12.根据权利要求7至11中任一项所述的用于检测乳制品中酪蛋白的方法，其特征在于，所述混合液中的四苯乙烯衍生物的溶液的浓度为0.1 μ M^lOO μ Μ，浓度优选0.5 μ Μ。
13.根据权利要求7至12中任一项所述的用于检测乳制品中酪蛋白的方法，其特征在于，在步骤2)沉淀酪蛋白后，还包括通过乙醇-乙醚洗涤沉淀的步骤，优选地，所述乙醇-乙醚中乙醇和乙醚的体积比为I '2~2:1，体积比优选1:1。
【文档编号】G01N21/76GK103630529SQ201210306050
【公开日】2014年3月12日 申请日期:2012年8月24日 优先权日:2012年8月24日
【发明者】蒋兴宇, 王卓, 刘颖昳, 张伟, 张德清 申请人:国家纳米科学中心