专利名称：一种提高胶体金免疫层析试纸条检测灵敏度的方法
技术领域：
本发明属于胶体金检测领域，具体涉及ー种提高胶体金免疫层析试纸条检测灵敏度的方法。
背景技术：
食品是人类赖以生存和发展的物质基础，食品安全则直接关系到人类健康。然而，近年来恶性食品安全事故接连不断出现，如病原微生物超标、三聚氰胺牛奶、瘦肉精猪肉、黄曲霉毒素奶等。针对食品中微生物、真菌毒素、药物残留、重金属等污染问题，目前，免疫层析试纸条技术已广泛应用到食品，农产品等领域。其中最为常见的免疫层析试纸条为胶 体金免疫层析试纸条。胶体金免疫层析试纸条适用于现场快速检测，最初主要用于蛋白质、微生物及多种化合物的定性检测，仅需肉眼即可完成判断。随着食品安全学科领域发展，各国对于食品中的污染物都有明确的限量要求，单纯的胶体金免疫层析试纸条定性检测对于很多种污染物检测已经难以满足消费者对污染物的定量要求。胶体金免疫层析试纸条读条仪的出现使得胶体金试纸条由定性检测逐渐转变到定量检测水平。然而，胶体金免疫层析试纸条读条仪虽然能提高检测灵敏度，但是检测灵敏度有限，且这种结合光学的检测技术容易受试纸条本身背景的干扰。为进ー步提高读条仪的读数灵敏度，研究者分别从信号增强、数据处理等方面进行优化。现有技术中，主要采用增敏试剂对检测试纸条进行增敏处理，来提高检测的灵敏度，但氯金酸和抗坏血酸作为常用的增敏试剂，成本较高，不适于广泛应用。因此在这些研究基础上，研究一种能降低试纸条自身背景值的处理方法，对于进一歩改善胶体金免疫层析试纸条的读数灵敏度具有重要意义。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是针对上述现有技术存在的不足而提供一种提高胶体金免疫层析试纸条检测灵敏度的方法。其可提高胶体金免疫层析试纸条的检测灵敏度，増大检测线性范围，操作简单方便。本发明为解决上述提出的问题所采用的技术方案为
一种提高胶体金免疫层析试纸条检测灵敏度的方法，具体步骤如下
(1)透明化试剂的配制选取苯甲醇与甲醇作为配方组分，将两者以体积为9:1 10:1充分混匀，制得透明化试剂，避光密封保存；
(2)试纸条处理取胶体金免疫层析试纸条对待测样品进行检测，检测完成后在胶体金免疫层析试纸条的检测区滴加步骤(I)配制得到的透明化试剂，放置待试纸条检测区由白色变成透明后，读条仪即可进行读数。按上述方案，所述步骤(2)中就是透明化试剂的使用量为5(Tl00iiし按上述方案，所述步骤(2)的放置时间为3 5min。按上述方案，所述的胶体金免疫层析试纸条为真菌毒素胶体金免疫层析试纸条或病毒胶体金免疫层析试纸条。本发明在检测前通过对胶体金试纸条进行预处理，可使胶体金试纸条上检测区的硝酸纤维素膜由白色非透明的易碎结构转变成透明且具备一定韧性的薄膜结构(见图1)，而降低光反射作用造成的背景干扰；同时还可防止因胶体金自身氧化而使显色区域逐渐变色，而通过对胶体金试纸条显色区域的顔色固定，达到避免因胶体金氧化而对试纸条的读数检测造成不良影响的作用，预处理完毕后再进行读条仪读数，可达到降低背景值影响，提高胶体金免疫层析试纸条检测灵敏度的目的。与现有技术相比，本发明的有益效果在于
(1)提高检测灵敏度，増大检测线性范围；采用本发明方法对胶体金免疫层析试纸条进行处理后可使读条仪进行检测时的最小有效读数减小，从而可提高胶体金免疫层析试纸条的检测灵敏度，増大其检测线性范围；
(2)操作简单方便，无需专业人员；
(3)处理时间短，检测完成后3飞分钟即可完成。
图1为本发明实施例1处理前后的黄曲霉毒素总量胶体金免疫层析试纸条的纵切面剖视图，图中T检测线，C质控线。
具体实施例方式为了更好地理解本发明，下面结合实例进ー步阐明本发明的内容，但本发明不仅仅局限于下面的实施例。实施例1 :
实验组
(1)透明化试剂的配制选取苯甲醇与甲醇作为配方组分，按照ImL甲醇加入IlOiiL苯甲醇比例充分混匀，避光密封保存；
(2)试纸条处理配制系列浓度黄曲霉毒素(AFT)标准溶液(0ng/mL、0. 01 ng/mL、0. 03 ng/mL、0. 06 ng/mL、0. 125 ng/mL、0. 25 ng/mL、0. 5 ng/mL、Ing/mL),分别取 100 u L上述各浓度的标准溶液滴加到黄曲霉毒素总量的胶体金检测试纸条的样品垫上，进行检測，10分钟检测完成后，在胶体金免疫层析试纸条的检测区滴加2滴(约IOOy L)透明化试齐U，放置3分钟后，试纸条检测区由白色变成透明(见图1)，立即进行读条仪读数，记录测试值。对照组对照组与实验组的不同之处在于检测完成后直接读数不进行透明化试剂处理。结果分析
对照组有效检测范围为0. 03ng/mL、. 5ng/mL,即待测体系中黄曲霉毒素总量浓度达0. 03ng/mL时，读条仪达到其最高测试阈值，高于0. 5ng/mL时,读条仪达到其最低测试阈值。实验组有效检测'泡围为0. 01ng/mL Ing/mL，即待测体系中黄曲霉韋素总量浓度达到0. 0Ing/mL时,读条仪达到其最高测试阈值,高于Ing/mL时,读条仪达到其最低测试阈值。由此对比结果可以看出采用本发明方法对黄曲霉毒素总量胶体金免疫层析试纸条进行处理后提高了黄曲霉毒素总量胶体金免疫层析试纸条的检测灵敏度，增大了其检测线性范围。实施例2:
实验组
(1)透明化试剂的配制选取苯甲醇与甲醇作为配方组分，按照ImL甲醇加入IOOiiL苯甲醇比例充分混匀，避光密封保存；
(2)试纸条处理配制系列浓度黄曲霉毒素M1(AFM1)标准溶液(0 ng/mL、0.05 ng/mL、0.1 ng/mL >0. 25 ng/mL、0. 50 ng/mL、l ng/mL、2 ng/mL、3 ng/mL、4ng/mL)，分别取 100 u L上述各浓度的标准溶液滴加到黄曲霉毒素M1 (AFM1)胶体金检测试纸条的样品垫上，10分钟检测完成后，在试纸条的检测区滴加2滴(约100 u L)透明化试剂，放置待试纸条检测区由白色变成透明，立即进行读条仪读数，记录测试值。对照组对照组与实施组的不同之处在于检测完成后直接读数不进行透明化试剂处理。结果分析
对照组有效检测范围为0. lng/mL^3ng/mL,即待测体系中黄曲霉毒素Ml浓度低于
0.03ng/mL时,读条仪达到其最高测试阈值,高于3ng/mL测试值时,读条仪达到其最低测试阈值。实验组有效检测范围为0. 05ng/mL 4ng/mL，即待测体系中黄曲霉毒素Ml浓度达
0.05ng/mL时,读条仪达到其最高测试阈值,高于4ng/mL测试值时,读条仪达到其最低测试阈值。由此对比结果可以看出采用本发明方法对黄曲霉毒素Ml胶体金免疫层析试纸条进行处理后提高了黄曲霉毒素Ml胶体金免疫层析试纸条的检测灵敏度，增大了其检测线性范围。实施例3
实验组
(1)透明化试剂的配制选取苯甲醇与甲醇作为配方组分，按照ImL甲醇加入105yL苯甲醇比例充分混匀，避光密封保存；
(2)试纸条处理及检测配制系列浓度玉米赤霉烯酮标准溶液(0ng/mL、0. 05 ng/mL、0.1 ng/mL >0. 25 ng/mL、0. 50 ng/mL>I ng/mL>2 ng/mL>3 ng/mL、4ng/mL)，分别取100 u L上述各浓度的标准溶液滴加到玉米赤霉烯酮胶体金检测试纸条的样品垫上，10分钟检测完成后，在试纸条检测区滴加透明化试剂，4分钟后试纸条检测区由白色变成透明，立即进行读条仪读数，记录测试值。对照组对照组与实施组的不同之处在于检测完成后直接读数不进行透明化试剂处理。结果分析
对照组有效检测范围为0. lng/mL^ng/mL,即体系中玉米赤霉烯酮浓度达0.1ng/mL时，读条仪达到其最高测试阈值，高于2ng/mL时，读条仪达到其最低测试阈值。
实验组有效检测范围为O. 05ng/mL 3ng/mL,即体系中玉米赤霉烯酮浓度达到O.05ng/mL时,读条仪达到其最高测试阈值,高于3ng/mL时,读条仪达到其最低测试阈值。
由此对比结果可以看出采用本发明方法对玉米赤霉烯酮胶体金免疫层析试纸条进行处理后提高了玉米赤霉烯酮胶体金免疫层析试纸条的检测灵敏度，增大了其检测线性范围。
实施例4实验组(1)透明化试剂的配制选取苯甲醇与甲醇作为配方组分，按照ImL甲醇加入110μ L苯甲醇比例充分混匀，避光密封保存；(2)试纸条处理取灭活Η5型禽流感病毒阳性尿囊液，用O.OlM PBS 1:2倍比稀释，然后分别取不同稀释度样品溶液(1:2 1:214)滴加到Η5型禽流感检测试纸条的样品垫上进行 Η5型禽流感检测，10分钟检测完成后，在试纸条的检测区滴加100 μ L透明化试剂，3分钟后试纸条检测区由白色变成透明，立即进行读条仪读数，记录测试值。
对照组对照组与实施组的不同之处在于检测完成后直接读数不进行透明化试剂处理。
结果分析对照组最低检测稀释度为21(1，即稀释倍数高于21°时，读条仪达到其最低测试阈值，不能检测到阳性。
实验组最低检测稀释度为212，即稀释倍数高于212时，读条仪达到其最低测试阈值，不能检测到阳性。
权利要求
1.一种提高胶体金免疫层析试纸条检测灵敏度的方法，其特征在于具体步骤如下 (1)透明化试剂的配制选取苯甲醇与甲醇作为配方组分，将两者以体积为9:1 10:1充分混匀，制得透明化试剂，避光密封保存； (2)试纸条处理取胶体金免疫层析试纸条对待测样品进行检测，检测完成后在胶体金免疫层析试纸条的检测区滴加步骤(I)配制得到的透明化试剂，放置待试纸条检测区由白色变成透明后，读条仪即可进行读数。
2.根据权利要求1所述的提高胶体金免疫层析试纸条检测灵敏度的方法，其特征在于所述步骤(2)中就是透明化试剂的使用量为50 ΙΟΟμ L。
3.根据权利要求1所述的提高胶体金免疫层析试纸条检测灵敏度的方法，其特征在于所述步骤(2)的放置时间为3-5min。
4.根据权利要求1所述的提高胶体金免疫层析试纸条检测灵敏度的方法，其特征在于所述的胶体金免疫层析试纸条为真菌毒素胶体金免疫层析试纸条或病毒胶体金免疫层析试纸条。
全文摘要
本发明涉及一种提高胶体金免疫层析试纸条检测灵敏度的方法。其特征在于具体步骤如下(1)透明化试剂的配制选取苯甲醇与甲醇作为配方组分，将两者以体积为9:1～10:1充分混匀，制得透明化试剂，避光密封保存；(2)试纸条处理取胶体金免疫层析试纸条对待测样品进行检测，检测完成后在胶体金免疫层析试纸条的检测区滴加步骤(1)配制得到的透明化试剂，放置待试纸条检测区由白色变成透明后，读条仪即可进行读数。采用本发明方法对胶体金免疫层析试纸条进行处理可提高其检测灵敏度，增大其检测线性范围；操作简单方便，无需专业人员；处理时间短，检测完成后3~5分钟即可完成。
文档编号G01N33/558GK103018439SQ20121050738
公开日2013年4月3日 申请日期2012年11月30日 优先权日2012年11月30日
发明者李培武, 李冉, 张奇, 丁小霞, 张文, 张兆威 申请人:中国农业科学院油料作物研究所