17α-羟基黄体酮的检测方法
【专利摘要】本发明公开了一种17α-羟基黄体酮的检测方法，该方法包括鉴别方法和/或含量测定方法，以17α-羟基黄体酮为对照品，以体积比为50～70∶30～50的乙腈-水为流动相，用高效液相色谱法进行鉴别和/或含量测定。本发明可以在制得粗品步骤及干燥步骤前就进行检测，可以更好更全面的反映最终产品中17α-羟基黄体酮的含量，从而保证产品的质量。
【专利说明】17α-羟基黄体酮的检测方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种药物中活性成份的检测方法，具体涉及的是一种合成激素类药物所需要的中间体17 a-羟基黄体酮的检测方法，属于医药【技术领域】。
【背景技术】
[0002]本发明具体涉及到的合成激素类药物所需要的中间体即17 a -羟基黄体酮，由它可以合成倍他米松、氢化可的松、己酸孕酮、醋酸可的松、氯地孕酮等激素类药物，在糖代谢，抗炎等方面有很好疗效。
[0003]目前，17a -羟基黄体酮的制备工艺中主要涉及制备方法为:取4-雄烯二酮进行氰醇化反应，得到氰醇化物，然后再进行缩合反应得到缩酮，最后与格氏试剂反应得到17 a -羟基黄体酮。中国专利文件一种制备黄体酮的方法(CN103524588A)涉及一种制备黄体酮的方法，该方法以4-雄烯二酮(4AD)为原料，依次经过羟氰化、脱水、保护、氢化、加成水解反应制得黄体酮。
[0004]经过分析可以得知，目前制备方法的整个生产工艺中质量控制比较简单，可能会因为生产批次的不一样，或者就算是同一批次也会生产出含量各不相同，品质不均匀的产品。如果在精制步骤进行适当的鉴别和含量测定，这无疑会对产品的质量和疗效稳定起着至关重要的作用。
[0005]通过查询目前国内外的相关文献发现，仅有17 a-羟基黄体酮合成工艺的报道，还没有关于对17 a -羟基黄体酮检测方法的相关报道。
【发明内容】
[0006]针对现有技术的不足，本发明提供了一种17 a-羟基黄体酮的检测方法，可以全面鉴别及检测该产品的质量，确保了该药物的安全有效。
[0007]为实现上述发明目的，本发明采用的具体技术方案如下:
[0008]17 a -羟基黄体酮的检测方法，包括鉴别方法和/或含量测定方法，以17 a -羟基黄体酮为对照品，以体积比为50?70: 30?50的乙腈-水为流动相，用高效液相色谱法进行鉴别和/或含量测定。
[0009]所述的高效液相色谱法的色谱条件与系统适应性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比50?70: 30?50的乙腈-水为流动相，检测波长为235nm，理论板数按17 a -羟基黄体酮峰计算不低于4000。
[0010]根据本发明优选的，上述方法中的流动相为体积比60:40的乙腈-水。
[0011]根据本发明优选的，所述的鉴别方法具体步骤如下:
[0012]A.对照品溶液的制备:精密称取17 a -羟基黄体酮对照品适量，用乙腈制成每Iml中含0.2-0.4mg的溶液；
[0013]B.供试品溶液的制备:精密称定17 a-羟基黄体酮10_20mg，置50ml容量瓶中，力口乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，作为供试品溶液；
[0014]C.液相色谱测定色谱峰:分别精密量取对照品溶液与供试品溶液各10 μ 1，注入液相色谱仪中，检测出供试品色谱中与对照品色谱峰保留时间相一致的色谱峰。
[0015]进一步优选的，所述的鉴别方法具体步骤如下:
[0016]Α.对照品溶液的制备:精密称取17 α -羟基黄体酮对照品适量，用乙腈制成每Iml中含0.3mg的溶液；
[0017]B.供试品溶液的制备:精密称定17 α -羟基黄体酮15mg，置50ml容量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，作为供试品溶液；
[0018]C.液相色谱测定色谱峰:分别精密量取对照品溶液与供试品溶液各10 μ 1，注入液相色谱仪中，检测出供试品色谱中与对照品色谱峰保留时间相一致的色谱峰。
[0019]根据本发明优选的，所述的含量测定方法具体步骤如下:
[0020]Α.对照品溶液的制备:精密称取17 α -羟基黄体酮对照品适量，用乙腈制成每Iml中含0.2-0.4mg的溶液；
[0021]B.供试品溶液的制备:精密称定17 α-羟基黄体酮10_20mg，置50ml容量瓶中，力口乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，作为供试品溶液；
[0022]C.液相色谱测定色谱峰:分别精密量取对照品溶液与供试品溶液各10 μ 1，注入液相色谱仪中，检测出供试品色谱中与对照品色谱峰保留时间相一致的色谱峰，按外标法以峰面积计算其含量。
[0023]进一步优选的，所述的含量测定方法具体步骤如下:
[0024]Α.对照品溶液的制备:精密称取17 α -羟基黄体酮对照品适量，用乙腈制成每Iml中含0.3mg的溶液；
[0025]B.供试品溶液的制备:精密称定17 α -羟基黄体酮15mg，置50ml容量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，作为供试品溶液；
[0026]C.液相色谱测定色谱峰:分别精密量取对照品溶液与供试品溶液各10 μ 1，注入液相色谱仪中，检测出供试品色谱中与对照品色谱峰保留时间相一致的色谱峰，按外标法以峰面积计算其含量。
[0027]以上本发明方法中未特别说明的均按照现有技术。
[0028]下述实验例和实施例用于进一步说明但不限于本发明。
[0029]实验例1、17 α -羟基黄体酮的鉴别方法研究
[0030]方法:高效液相色谱法
[0031]1.仪器与实验药
[0032]岛津高效液相色谱仪，LC-10AT型泵，STO-1OA型紫外检测器，KQ2200B型超声波清洗器。乙腈为色谱纯，水为纯化水。17α-羟基黄体酮对照品为山东众诚药业股份有限公司实验室精制后标定的工作对照品。17 α-羟基黄体酮样品为山东众诚药业股份有限公司合成实验室提供。
[0033]2.方法与结果
[0034]2.1样品和对照品处理方法如下:
[0035]对照品溶液的制备:精密称取17 α -羟基黄体酮对照品适量，用乙腈制成每Iml中含0.3mg的溶液。
[0036]供试品溶液的制备:精密称定17 α -羟基黄体酮15mg，置50ml容量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，作为供试品溶液。
[0037]测定法:分别精密量取对照品溶液与供试品溶液各10μ 1，注入液相色谱仪中，测定，即得。
[0038]2.2色谱条件:
[0039]色谱柱:月旭C18 (150mmX 4.6mm, 5 μ m)
[0040]流动相:乙腈-水(体积比60:40)
[0041]检测波长:235nm
[0042]流速:1.0ml/min
[0043]结果:在拟定的条件下，样品中有与对照品保留时间一致的色谱峰。
[0044]实验例2、17 α -羟基黄体酮的含量测定方法研究
[0045]方法:高效液相色谱法
[0046]1.仪器与实验药
[0047]岛津高效液相色谱仪，LC-1OAT型泵，STO-1OA型紫外检测器，KQ2200B型超声波清洗器。乙腈为色谱纯，水为纯化水。17α-羟基黄体酮对照品为山东众诚药业股份有限公司实验室精制后标定的工作对照品。17 α-羟基黄体酮样品为山东众诚药业股份有限公司合成实验室提供。
[0048]2.方法与结果
[0049]2.1色谱条件:
[0050]色谱柱:月旭C18 (150mmX 4.6mm, 5 μ m)
[0051 ] 流动相:乙腈-水(体积比60:40)
[0052]检测波长:235nm
[0053]流速:1.0ml/min
[0054]2.2溶液的制备
[0055]对照品溶液的制备:精密称取17 α -羟基黄体酮对照品适量，用乙腈制成每Iml中含0.3mg的溶液；
[0056]供试品溶液的制备:精密称定17 α -羟基黄体酮15mg，置50ml容量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，作为供试品溶液；
[0057]2.3系统适用性试验:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μ 1，注入高效液相色谱仪中，记录色谱图(见图1)，结果17 α -羟基黄体酮的保留时间为9.223min,17 α -羟基黄体酮峰与前后色谱峰的分离度均大于1.5，理论板数以17 α _羟基黄体酮峰计算为16632。
[0058]2.4线性关系:精密称取17α-羟基黄体酮对照品31.4mg，置50ml量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，作为母液，分别精密最取母液3ml、4ml、5ml、6ml、7ml置1ml量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，作为线性测定溶液。分别精密量取线性测定溶液各10μ 1，注入液相色谱仪中，按照上述色谱条件测定峰面积，以峰面积积分值Y对溶液浓度X (mg/ml)进行线性回归，结果如下表I所示:
[0059]表1: 17 α -羟基黄体酮线性关系试验结果
[0060]
【权利要求】
1.17 α-羟基黄体酮的检测方法，包括鉴别方法和/或含量测定方法，以17 α-羟基黄体酮为对照品，以体积比为50~70: 30~50的乙腈-水为流动相，用高效液相色谱法进行鉴别和/或含量测定。
2.根据权利要求1所述的17α-羟基黄体酮的检测方法，其特征在于:所述的高效液相色谱法的色谱条件与系统适应性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比50~70: 30~50的乙腈-水为流动相，检测波长为235nm，理论板数按17 α -羟基黄体酮峰计算不低于4000。
3.根据权利要求1或2所述的17α -羟基黄体酮的检测方法，其特征在于，所述鉴别方法具体步骤如下: Α.对照品溶液的制备:精密称取17α-羟基黄体酮对照品适量，用乙腈制成每1ml中含0.2-0.4mg的溶液； B.供试品溶液的制备:精密称定17α-羟基黄体酮10-20mg，置50ml容量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，作为供试品溶液； C.液相色谱测定色谱峰:分别精密量取对照品溶液与供试品溶液各10μ 1，注入液相色谱仪中，检测出供试品色谱中与对照品色谱峰保留时间相一致的色谱峰。
4.根据权利要求3所述的17α-羟基黄体酮的检测方法，其特征在于，所述鉴别方法具体步骤如下: Α.对照品溶液的制备:精密称取17 α -羟基黄体酮对照品适量，用乙腈制成每1ml中含0.3mg的溶液； B.供试品溶液的制备:精密称定17α -羟基黄体酮15mg，置50ml容量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，作为供试品溶液； C.液相色谱测定色谱峰:分别精密量取对照品溶液与供试品溶液各10μ 1，注入液相色谱仪中，检测出供试品色谱中与对照品色谱峰保留时间相一致的色谱峰。
5.根据权利要求1或2所述的17α -羟基黄体酮的检测方法，其特征在于，所述的含量测定方法具体步骤如下: Α.对照品溶液的制备:精密称取17 α-羟基黄体酮对照品适量，用乙腈制成每1ml中含0.2-0.4mg的溶液； B.供试品溶液的制备:精密称定17α-羟基黄体酮10-20mg，置50ml容量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，作为供试品溶液； C.液相色谱测定色谱峰:分别精密量取对照品溶液与供试品溶液各10μ 1，注入液相色谱仪中，检测出供试品色谱中与对照品色谱峰保留时间相一致的色谱峰，按外标法以峰面积计算其含量。
6.根据权利要求5所述的17α-羟基黄体酮的检测方法，其特征在于，所述的含量测定方法具体步骤如下: Α.对照品溶液的制备:精密称取17 α -羟基黄体酮对照品适量，用乙腈制成每1ml中含0.3mg的溶液； B.供试品溶液的制备:精密称定17α -羟基黄体酮15mg，置50ml容量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，作为供试品溶液； C.液相色谱测定色谱峰:分别精密量取对照品溶液与供试品溶液各10μ 1，注入液相色谱仪中， 检测出供试品色谱中与对照品色谱峰保留时间相一致的色谱峰，按外标法以峰面积计算其含量。
【文档编号】G01N30/06GK104076103SQ201410332429
【公开日】2014年10月1日 申请日期:2014年7月11日 优先权日:2014年7月11日
【发明者】高英涵, 李义, 李新山 申请人:山东众诚药业股份有限公司