二对甲苯磺酸拉帕替尼同分异构体杂质的分析方法与流程

本发明涉及药物分析技术领域，具体地，涉及二对甲苯磺酸拉帕替尼同分异构体杂质的分析方法。

背景技术：
二对甲苯磺酸拉帕替尼具有式1所示的结构：拉帕替尼是一种能够同时靶向人表皮生长因子受体(EGFR)和人表皮生长因子受体-2(HER2)的小分子激酶抑制剂，药用为二对甲苯磺酸拉帕替尼，由英国葛兰素史克公司开发，于2007年3月获得美国FDA批准，用于联合用药：合用卡培他滨治疗过度表达HER2的晚期或转移性乳腺癌，合用来曲唑治疗过度表达HER2、激素受体阳性的转移性乳腺癌绝经期妇女。然而，目前二对甲苯磺酸拉帕替尼同分异构体杂质的分析检测方法仍有待改进。

技术实现要素：
本发明旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。为此，本发明的一个目的在于提出一种用时短，且分离度好、分离效率高的二对甲苯磺酸拉帕替尼同分异构体杂质的分析方法。本发明是基于发明人的以下发现完成的：二对甲苯磺酸拉帕替尼中通常含有分别具有式2、式3所示结构的两个同分异构体杂质，而含有同分异构体杂质会影响二对甲苯磺酸拉帕替尼的质量和稳定性。为了能够有效地检测分析二对甲苯磺酸拉帕替尼同分异构体杂质、提高分离度，本发明的发明人对本发明所述的二对甲苯磺酸拉帕替尼同分异构体杂质的分析方法进行了摸索研究。发明人尝试采用C18色谱柱，以醋酸铵缓冲溶液为流动相A，以乙腈为流动相B，按下表所示线性梯度洗脱条件，利用结合紫外检测器的高效液相色谱法检测分析二对甲苯磺酸拉帕替尼同分异构体杂质。具体而言，包括如下步骤：1.取二对甲苯磺酸拉帕替尼适量，用乙腈-水(体积比4：1)溶解并用乙腈-水(体积比4：1)定量稀释制成1ml含二对甲苯磺酸拉帕替尼0.8mg的溶液A，取适量式2所示结构的化合物杂质加入溶液A中，即得混合溶液为供试品溶液；2.取步骤1中制备获得的供试品溶液及空白溶剂照上述色谱条件，分别注入高效液相色谱仪，记录色谱图。结果显示：式2所示结构的化合物杂质与二对甲苯磺酸拉帕替尼的主峰不能实现良好的分离。为此，本发明发明人对上述二对甲苯磺酸拉帕替尼同分异构体杂质的分析方法进一步进行调整。本发明的发明人经过艰苦卓绝的实验摸索和研究，提出了一种用时短，且分离度好、分离效率高的二对甲苯磺酸拉帕替尼同分异构体杂质的分析方法。因而，本发明提供了一种二对甲苯磺酸拉帕替尼同分异构体杂质的分析方法。根据本发明的实施例，该方法利用结合紫外检测器的高效液相色谱法进行，其中，色谱柱采用五氟苯基柱；流动相由流动相A和流动相B组成；采用醋酸铵缓冲液作为所述流动相A；采用甲醇作为所述流动相B；洗脱方式为等度洗脱。采用本发明的方法，可以很好地分离二对甲苯磺酸拉帕替尼的同分异构体杂质，灵敏度高，专属性强，分离度达到要求。根据本发明实施例的二对甲苯磺酸拉帕替尼同分异构体杂质的分析方法还可以具有以下附加技术特征：根据本发明的实施例，所述紫外检测器的检测波长为261±2nm。发明人将二对甲苯磺酸拉帕替尼的供试品溶液，应用紫外-可见分光光度计在190nm～400nm进行全扫描，发现二对甲苯磺酸拉帕替尼的最大吸收波长为261nm，故选择261±2nm作为检测波长。根据本发明的实施例，所述方法采用高效液相色谱法进行分析检测。所述流动相由流动相A和流动相B组成；采用醋酸铵缓冲液作为所述流动相A；采用甲醇作为所述流动相B。根据本发明的实施例，在所述流动相中，所述醋酸铵缓冲液和甲醇的体积比例为(25～40)：(75～60)，洗脱方式为等度洗脱。由此，有利于二对甲苯磺酸拉帕替尼和其同分异构体杂质进行分离，上述比例的流动相能够实现优于其他比例的流动相的分离效果。根据本发明的一个具体示例，所述醋酸铵缓冲液和甲醇的体积比例为30：70。由此，分离效果较佳。根据本发明的实施例，所述高效液相色谱法的柱温为35摄氏度～40摄氏度。由此，有利于二对甲苯磺酸拉帕替尼和其同分异构体杂质进行分离，如果温度过高或过低，分离效果均不理想。根据本发明的实施例，所述高效液相色谱法的流速为0.8～1.2ml/min。由此，有利于二对甲苯磺酸拉帕替尼和其同分异构体杂质进行分离，如果流速过快或过慢，分离效果均不理想。根据本发明的一个具体示例，所述高效液相色谱法的流速为1.0ml/min。由此，二对甲苯磺酸拉帕替尼和其同分异构体杂质的分离效果理想。根据本发明的实施例，在所述醋酸铵缓冲液中，醋酸铵的浓度为40～60mmol/L。由此，二对甲苯磺酸拉帕替尼和其同分异构体杂质进行分离的效果理想。根据本发明的一个具体示例，在所述醋酸铵缓冲液中，醋酸铵的浓度为50mmol/L。由此，分离效果较佳。根据本发明的实施例，所述醋酸铵缓冲液用冰醋酸调节pH至4.0～5.0。由此，有利于二对甲苯磺酸拉帕替尼和其同分异构体杂质进行分离，如果pH过高或过低，分离效果均不理想。根据本发明的一个具体示例，所述醋酸铵缓冲液用冰醋酸调节pH至4.5。由此，能够有效分离二对甲苯磺酸拉帕替尼和其同分异构体杂质，且分离度较好。利用本发明所述的二对甲苯磺酸拉帕替尼同分异构体杂质的分析方法，能够快速有效地将二对甲苯磺酸拉帕替尼和其同分异构体杂质分离，且用时短、分离度好、分离效率高、专属性强。根据本发明的实施例，所述方法包括以下步骤：(1)取二对甲苯磺酸拉帕替尼原料药，用体积比为4：1的乙腈-水混合溶剂超声溶解，配制成二对甲苯磺酸拉帕替尼浓度为0.1mg/ml的供试品溶液；(2)色谱条件：仪器采用高效液相色谱仪配备紫外检测器；色谱柱采用五氟苯基柱，以用冰醋酸调节pH至4.0～5.0的浓度为40～60mmol/L的醋酸铵缓冲液为所述流动相A，以甲醇为所述流动相B，所述醋酸铵缓冲液和甲醇的体积比例为(25～40)：(75～60)，洗脱方式为等度洗脱，检测波长为261±2nm，脱方式为，流速为0.8～1.2ml/min，柱温为35摄氏度～40摄氏度，按上述所示条件进行等度洗脱；(3)取所述(1)样品5μl，按照上述色谱条件，注入液相色谱仪，记录色谱图。利用本发明的该方法，色谱图中式2、以及式3所示结构的化合物杂质与二对甲苯磺酸拉帕替尼的主峰可以实现良好的分离。根据本发明的一个具体示例，所述方法包括以下步骤：(a-1)取二对甲苯磺酸拉帕替尼原料药，用体积比为4：1的乙腈-水混合溶剂超声溶解，配制成二对甲苯磺酸拉帕替尼浓度为0.1mg/ml的供试品溶液；(a-2)色谱条件：采用五氟苯基柱，以用冰醋酸调节pH至4.5的浓度为50mmol/L的醋酸铵缓冲液为所述流动相A，以甲醇为所述流动相B，在所述流动相中，所述流动相A和流动相B的体积比为30：70，检测波长为261nm，流速为1.0ml/min，柱温为40摄氏度；(a-3)取所述供试品溶液5μl，按照上述色谱条件，注入配备紫外检测器的高效液相色谱仪，记录色谱图。根据本发明的一个具体示例，所述方法包括以下步骤：(b-1)取二对甲苯磺酸拉帕替尼原料药，用体积比为4：1的乙腈-水混合溶剂超声溶解，配制成二对甲苯磺酸拉帕替尼浓度为0.1mg/ml的供试品溶液；(b-2)色谱条件：采用五氟苯基柱，以用冰醋酸调节pH至5.0的浓度为40mmol/L的醋酸铵缓冲液为所述流动相A，以甲醇为所述流动相B，在所述流动相中，所述流动相A和流动相B的体积比为25：75，检测波长为262nm，流速为0.8ml/min，柱温为38摄氏度；(b-3)取所述供试品溶液5μl，按照上述色谱条件，注入配备紫外检测器的高效液相色谱仪，记录色谱图。根据本发明的一个具体示例，所述方法包括以下步骤：(c-1)取二对甲苯磺酸拉帕替尼原料药，用体积比为4：1的乙腈-水混合溶剂超声溶解，配制成二对甲苯磺酸拉帕替尼浓度为0.1mg/ml的供试品溶液；(c-2)色谱条件：采用五氟苯基柱，以用冰醋酸调节pH至4.0的浓度为60mmol/L的醋酸铵缓冲液为所述流动相A，以甲醇为所述流动相B，在所述流动相中，所述流动相A和流动相B的体积比为40：60，检测波长为259nm，流速为1.0ml/min，柱温为36摄氏度；(c-3)取所述供试品溶液5μl，按照上述色谱条件，注入配备紫外检测器的高效液相色谱仪，记录色谱图。根据本发明的一个具体示例，所述方法包括以下步骤：(d-1)取二对甲苯磺酸拉帕替尼原料药，用体积比为4：1的乙腈-水混合溶剂超声溶解，配制成二对甲苯磺酸拉帕替尼浓度为0.1mg/ml的供试品溶液；(d-2)色谱条件：采用五氟苯基柱，以用冰醋酸调节pH至4.4的浓度为45mmol/L的醋酸铵缓冲液为所述流动相A，以甲醇为所述流动相B，在所述流动相中，所述流动相A和流动相B的体积比为35：65，检测波长为263nm，流速为1.2ml/min，柱温为35摄氏度；(d-3)取所述供试品溶液5μl，按照上述色谱条件，注入配备紫外检测器的高效液相色谱仪，记录色谱图。根据本发明的一个具体示例，所述方法包括以下步骤：(e-1)取二对甲苯磺酸拉帕替尼原料药，用体积比为4：1的乙腈-水混合溶剂超声溶解，配制成二对甲苯磺酸拉帕替尼浓度为0.1mg/ml的供试品溶液；(e-2)色谱条件：采用五氟苯基柱，以用冰醋酸调节pH至4.8的浓度为55mmol/L的醋酸铵缓冲液为所述流动相A，以甲醇为所述流动相B，在所述流动相中，所述流动相A和流动相B的体积比为30：70，检测波长为261nm，流速为1.0ml/min，柱温为40摄氏度；(e-3)取所述供试品溶液5μl，按照上述色谱条件，注入配备紫外检测器的高效液相色谱仪，记录色谱图。由此，利用本发明所述的方法，能够获得理想的分离效果。根据本发明的实施例，所述五氟苯基柱优选为PhenmonexKinetex2.6μmPFP100×4.6mm色谱柱。由此，分离效果理想。附图说明图1显示了根据本发明的一个实施例，二对甲苯磺酸拉帕替尼的紫外扫描图；图2显示了根据本发明的一个实施例，利用梯度洗脱的方法分析二对甲苯磺酸拉帕替尼原料药的色谱图；图3显示了根据本发明的一个实施例，利用等度洗脱的方法分析二对甲苯磺酸拉帕替尼原料药的色谱图，其中色谱图中1为式2所示结构的化合物，2为式3所示结构的化合物，3为二对甲苯磺酸拉帕替尼主峰。具体实施方式下面详细描述本发明的实施例。下面描述的实施例是示例性的，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。实施例1：检测波长的确定取用加乙腈-水(体积比4:1)混合溶剂溶解并稀释制成每1ml中约含20μg原料药的溶液，在紫外-可见分光光度计在190nm～400nm进行全扫描，二对甲苯磺酸拉帕替尼的紫外扫描结果见图1。由图1可知，二对甲苯磺酸拉帕替尼的最大吸收波长为261nm，故选择261±2nm作为检测波长。实施例2：采用PhenmonexlunaC183μm,100×4.6mm色谱柱，以50mmol/L醋酸铵缓冲溶液(取3.85g醋酸铵，溶于990ml水中，用冰醋酸调节PH至4.5，用水稀释至1000ml)为流动相A，以乙腈为流动相B，检测波长261nm，柱温40℃，进样5μl，按下表进行线性梯度洗脱梯度：时间(分钟)流动相A(％)流动相B(％)06535136535334258431090481090506535606535实验步骤：1.取二对甲苯磺酸拉帕替尼适量，用乙腈-水(体积比4：1)溶解并用乙腈-水(体积比4：1)定量稀释制成1ml含二对甲苯磺酸拉帕替尼0.8mg的溶液A，取适量式2所示结构的化合物杂质加入溶液A中，即得混合溶液为供试品溶液。2.取供试品溶液及空白溶剂照上述色谱条件，分别注入高效液相色谱仪，记录色谱图。结果：该色谱图中式2所示结构的化合物杂质与二对甲苯磺酸拉帕替尼的主峰不能实现良好的分离，典型图谱如图2。实施例3(1)取二对甲苯磺酸拉帕替尼原料药，用体积比为4：1的乙腈-水混合溶剂超声溶解，配制成二对甲苯磺酸拉帕替尼浓度为0.1mg/ml的供试品溶液；色谱条件：仪器采用高效液相色谱仪配备紫外检测器；采用五氟苯基柱PhenmonexKinetex2.6μmPFP100×4.6mm色谱柱，以用冰醋酸调节pH至4.5的浓度为50mmol/L的醋酸铵缓冲液为所述流动相A，以甲醇为所述流动相B，所述醋酸铵缓冲液和甲醇的体积比例为30：70，洗脱方式为等度洗脱，检测波长为261nm，流速为1.0ml/min，柱温为40摄氏度，按上述所示条件进行等度洗脱；(2)取所述供试品溶液5μl，按照上述色谱条件，注入液相色谱仪，记录色谱图。结果：该色谱图中式2、以及式3所示结构的化合物杂质与二对甲苯磺酸拉帕替尼的主峰可以实现良好的分离，典型图谱如图3。实施例4(1)取二对甲苯磺酸拉帕替尼原料药，用体积比为4：1的乙腈-水混合溶剂超声溶解，配制成二对甲苯磺酸拉帕替尼浓度为0.1mg/ml的供试品溶液；色谱条件：仪器采用高效液相色谱仪配备紫外检测器；采用五氟苯基柱PhenmonexKinetex2.6μmPFP100×4.6mm色谱柱，以用冰醋酸调节pH至5.0的浓度为40mmol/L的醋酸铵缓冲液为所述流动相A，以甲醇为所述流动相B，所述醋酸铵缓冲液和甲醇的体积比例为25：75，洗脱方式为等度洗脱，检测波长为262nm，流速为0.8ml/min，柱温为38摄氏度，按上述所示条件进行等度洗脱；(2)取供试品溶液5μl，按照上述色谱条件，注入液相色谱仪，记录色谱图。结果：该色谱图中式2、以及式3所示结构的化合物杂质与二对甲苯磺酸拉帕替尼的主峰可以实现良好的分离。实施例5(1)取二对甲苯磺酸拉帕替尼原料药，用体积比为4：1的乙腈-水混合溶剂超声溶解，配制成二对甲苯磺酸拉帕替尼浓度为0.1mg/ml的供试品溶液；色谱条件：仪器采用高效液相色谱仪配备紫外检测器；采用五氟苯基柱PhenmonexKinetex2.6μmPFP100×4.6mm色谱柱，以用冰醋酸调节pH至4.0的浓度为60mmol/L的醋酸铵缓冲液为所述流动相A，以甲醇为所述流动相B，所述醋酸铵缓冲液和甲醇的体积比例为40：60，洗脱方式为等度洗脱，检测波长为259nm，流速为1.0ml/min，柱温为36摄氏度，按上述所示条件进行等度洗脱；(2)取供试品溶液5μl，按照上述色谱条件，注入液相色谱仪，记录色谱图。结果：该色谱图中式2、以及式3所示结构的化合物杂质与二对甲苯磺酸拉帕替尼的主峰可以实现良好的分离。实施例6(1)取二对甲苯磺酸拉帕替尼原料药，用体积比为4：1的乙腈-水混合溶剂超声溶解，配制成二对甲苯磺酸拉帕替尼浓度为0.1mg/ml的供试品溶液；色谱条件：仪器采用高效液相色谱仪配备紫外检测器；采用五氟苯基柱PhenmonexKinetex2.6μmPFP100×4.6mm色谱柱，以用冰醋酸调节pH至4.4的浓度为45mmol/L的醋酸铵缓冲液为所述流动相A，以甲醇为所述流动相B，所述醋酸铵缓冲液和甲醇的体积比例为35：65，洗脱方式为等度洗脱，检测波长为263nm，流速为1.2ml/min，柱温为35摄氏度，按上述所示条件进行等度洗脱；(2)取供试品溶液5μl，按照上述色谱条件，注入液相色谱仪，记录色谱图。结果：该色谱图中式2、以及式3所示结构的化合物杂质与二对甲苯磺酸拉帕替尼的主峰可以实现良好的分离。实施例7(1)取二对甲苯磺酸拉帕替尼原料药，用体积比为4：1的乙腈-水混合溶剂超声溶解，配制成二对甲苯磺酸拉帕替尼浓度为0.1mg/ml的供试品溶液；色谱条件：仪器采用高效液相色谱仪配备紫外检测器；采用五氟苯基柱PhenmonexKinetex2.6μmPFP100×4.6mm色谱柱，以用冰醋酸调节pH至4.8的浓度为55mmol/L的醋酸铵缓冲液为所述流动相A，以甲醇为所述流动相B，所述醋酸铵缓冲液和甲醇的体积比例为30：70，洗脱方式为等度洗脱，检测波长为261nm，流速为1.0ml/min，柱温为40摄氏度，按上述所示条件进行等度洗脱；(2)取供试品溶液5μl，按照上述色谱条件，注入液相色谱仪，记录色谱图。结果：该色谱图中式2、以及式3所示结构的化合物杂质与二对甲苯磺酸拉帕替尼的主峰可以实现良好的分离。在本发明的描述中，需要理解的是，术语“第一”、“第二”仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此，限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隐含地包括一个或者更多个该特征。在本发明的描述中，“多个”的含义是两个或两个以上，除非另有明确具体的限定。在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结合和组合。尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。