提高检测食用油过氧化值试纸热稳定性的方法
【专利摘要】本发明的目的在于提供了一种热稳定性高的食用油过氧化值试纸，大大缩短了样品处理和检测时间，提高试纸的准确度，从而实现样品的现场快速检测。提高检测食用油过氧化值试纸热稳定性的方法步骤如下：(1)把柠檬酸缓冲剂、还原剂、表面活性剂、底色原料和稳定剂溶解在去离子水中，得到溶液A；(2)把显色剂和反应促进剂溶解在无水乙醇中，得到溶液B；(3)把滤纸依次在溶液A和溶液B中浸泡后鼓风干燥；(4)干燥好的滤纸分切成试纸块，封装；(5)检测反射率的波长范围600-650nm；(6)配制各级过氧化值标准液(0-12meq/kg)，用化学滴定法标定真实值；在试纸块上定量滴加标准液，选定波长检测试纸块的反射率，做出反射率-过氧化值关系曲线和标准方程。
【专利说明】提高检测食用油过氧化值试纸热稳定性的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及食用油安全检测领域，具体涉及一种提高检测食用油过氧化值试纸热 稳定性的方法。
【背景技术】
[0002] 食用油过氧化值的检测是确保油品质量的关键手段，国内外广泛使用的测定方法 主要有高效液相色谱法和化学滴定法。高效液相色谱法需使用大型仪器，实际成本高，难以 作为普查使用；而化学滴定法的反应时间长，步骤繁琐，试剂需提前一周以上时间配制，全 部手工操作，易受操作人员的人为因素干扰。目前我国各防疫部门检测食用油过氧化值都 按照GB/T5009. 37-1996规定的分析方法（化学滴定法）。国内外相继发表了检测过氧化值 的发明文献专利，如中国专利（CN87106131. 7) "过氧乙酸测定试纸及其制备方法"涉及用 试纸测定水溶性消毒液中的过氧乙酸的含量；日本专利（53-30383) "油脂中过氧化物测定 试纸的制备方法"是以可溶性淀粉、碘化钾作为主要成分，都具有如下缺陷：对光和氧敏感， 易失效；反应时间长，超过5分钟；只能定性和半定量测量，不能测出准确的数值等。
[0003] 经对现在技术文献的检索发现，中国专利申请号为03114362. 8,名称为"一种检测 液态食用油的过氧化值的方法"该专利中采用通过在高分子骨架结构中吸附药物并干燥， 制备成含药膜片。当液态食用油样品接触膜片时，油样品中的过氧化物与膜片中所含药物 发生反应，显现颜色，颜色变化的程度与油样品的过氧化值的关系可以用二次方程表达。在 可见光范围内检测膜片的反射率可以准确测定过氧化值。同时也可以与比色表配合使用， 目测判定过氧化值的范围。该方法制备的试纸热稳定性差，50°C烘烤一天试纸灵敏度明显 下降，大大降低了试纸的准确度。在光电化学试条中，较为普遍的是在使用前的某一时间制 造这些试条，在此期间对试条进行存放。在存放期间，一些还原剂已失活，因此当最终使用 该试条时，就可能得到不准确的结果。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于针对上述现有技术的不足，提供了一种热稳定性高的食用油过 氧化值试纸，使其易于产业化制作和一次性使用，并且大大缩短了样品处理和检测时间，提 高试纸的准确度，从而实现样品的现场快速检测。该方法通过在高分子骨架结构中吸附药 物并干燥，制备成试纸块。当食用油样品接触试纸块时，油样品中的过氧化物与试纸块中所 含药物发生反应，显现颜色，颜色变化的程度与油样品的过氧化值的关系可以用二次方程 表达。在可见光范围内检测试纸块的反射率可以准确测定过氧化值。
[0005] 试纸块中含有的药物由柠檬酸缓冲剂、稳定剂、显色剂、还原剂、表面活性剂、底色 原料、反应促进剂等构成。
[0006] 稳定剂是甘露醇和海藻糖两者的混合，甘露醇是山梨糖醇的异构化体，山梨糖醇 的吸湿性很强，而该品完全没有吸湿性，甘露醇无吸湿性，干燥快，化学稳定性好，不易被空 气中的氧所氧化。耐油性、耐热氧化性以及尺寸稳定性均较好，耐热度更是高达180°c。海 藻糖又称漏芦糖、蕈糖，是由两个葡萄糖分子以1，1-糖苷键构成的非还原性糖，对多种生 物活性物质具有非特异性保护作用。科学家们发现，沙漠植物卷叶柏在干旱时几近枯死，遇 水后却又可以奇迹般复活；高山植物复活草能够耐过冰雪严寒；一些昆虫在高寒、高温和 干燥失水等条件下不冻结、不干死，就是它们体内的海藻糖创造的生命奇迹。海藻糖因此在 科学界素有"生命之糖"的美誉。国际权威的《自然》杂志曾在2000年7月发表了对海藻糖 进行评价的专文，文中指出："对许多生命体而言，海藻糖的有与无，意味着生命或者死亡"。 海藻糖对生物体具有神奇的保护作用，是因为海藻糖在高温、高寒、高渗透压及干燥失水等 恶劣环境条件下在细胞表面能形成独特的保护膜，有效地保护蛋白质分子不变性失活，从 而维持生命体的生命过程和生物特征。许多对外界恶劣环境表现出非凡抗逆耐受力的物 种，都与它们体内存在大量的海藻糖有直接的关系。而自然界中如蔗糖、葡萄糖等其它糖 类，均不具备这一功能。这一独特的功能特性，使得海藻糖可以作为蛋白质药物、酶、疫苗和 其他生物制品的优良活性保护剂，海藻糖可应用于研宄用生物试剂的保存，作为对生物酶 制剂中反应中激活剂与稳定剂。例如各种工具酶、细胞膜、细胞器、抗体、抗原及病毒等等， 使得生命科学研宄更为方便快捷有效，英国大学Camilo.C等详细的研宄了海藻糖对DNA限 制性内切酶、DNA连接酶和DNA聚合酶的保护作用，结果表明，所有加入海藻糖干燥的酶样， 在70°C保存35天或在37°C保存9个月后，其活力并无损失，仍能精确的将DNA截断。我国 中科院微生物研宄所应用海藻糖干燥制备、用于人血清胆固醇测定的三种诊断工具酶，在 室温下长期保存后，活性保持率都在90%以上，现已成功的进入于临床应用。这是其它种 类的保护剂都不可能达到的效果，利用海藻糖作为诊断工具酶等生物试剂的稳定剂和保护 剂，可置于常温条件下干燥并保存，不仅简化了生物试剂的制备过程，也给我国幅员广大的 农村地区患者的疾病诊治带来便利。温度是影响酶反应效率的重点因素之一，高温能提高 酶的催化活力，但易使酶失活。研宄发现海藻糖在高温下能保持酶的正常活性，甚至起热激 活作用，还能用于提高干燥保存的酶的活性。在反应体系中加入海藻糖，使热敏感的酶在高 温下稳定性和活性增加，可当作耐热酶使用，海藻糖的这一作用在生物药学和工业生产领 域具有广泛的应用价值。
[0007] 显示剂是联苯胺的衍生物，分子式为：[R1C6HmNiy2;其中m=Z-IR1=^CHyC6H5,CH30,NH2;R2=H，CH3。还原剂为辣根过氧化物酶，反应促进剂是噻唑、，的衍生物，分子结构 为！R3C6HniN!C(R4)S;其中m= 3-4 ;R3=H，CH3,C2H5iR4=H，0H，SH，NH2。表面活性剂是十二 烷基硫酸钠、吐温20、0P-10、曲拉通100及渗透剂0T，底色原料是甲基橙、橙黄G。
[0008] 试纸块的制备，按以下步骤进行：
[0009] (1)把柠檬酸缓冲剂、还原剂、表面活性剂、底色原料和稳定剂溶解在去离子水中， 得到溶液A。
[0010] ⑵把显色剂和反应促进剂溶解在无水乙醇中，得到溶液B。
[0011] (3)把滤纸依次在溶液A和溶液B中浸泡并在温度50-70°C下鼓风干燥。
[0012] (4)干燥好的滤纸分切成试纸块，封装在真空铝箔袋或装有硅胶干燥剂的塑料瓶 内。
[0013] (5)检测反射率的波长范围600-650nm，最好是630nm〇
[0014] (6)标准曲线的制作：配制各级过氧化值标准液（0-12meq/kg)，用化学滴定法标 定真实值。在试纸块上定量滴加标准液，120秒后选定波长检测试纸块的反射率，做出反射 率-过氧化值关系曲线和标准方程。
[0015] 使用方法：
[0016] 在试纸块上滴加样品，120秒后在选定的波长测定试纸块的反射率，若反射率在食 用油检测仪的检测范围之内，则可通过食用油检测仪自动处理转化，并与单片机中储存的 标准曲线进行比对，转化为过氧化值的浓度，直接由显示器显示出检测结果。
【具体实施方式】
[0017] 下面以【具体实施方式】对本发明进行进一步说明，但本发明并不局限于这些实施 例。
[0018] 实施例1试剂组合物的稳定剂只有海藻糖的试纸块的制备
[0019] 1、将IOOg的柠檬酸缓冲试剂、I. 6g辣根过氧化物酶、2. 8g表面活性剂、12g底色原 料和IOOg的海藻糖依次溶解在IOOOmL的去离子水中。将滤纸浸入溶液中，1分钟后取出， 6〇°C烘干；再把15g的显色剂、IOg反应促进剂溶解在IOOOmL的无水乙醇中，把滤纸在溶液 中浸泡1分钟，取出并在60°C下烘干，分切成5X5mm正方形试纸块分装在密闭真空包装的 铝箔袋待用。同时取少量试纸块密封放置于60°C的烘箱中分别连续烘烤1天，2天，7天。
[0020] 2、用吸管在试纸块上滴加一滴待测油样的样品，120秒后在食用油检测仪检测试 纸块的反射率，并通过食用油检测仪自动处理转化，与单片机中储存的标准曲线进行比对， 转化为过氧化值的浓度，直接由显示器显示出检测结果。试验结果见表1
[0021] 表1实例1油样测试结果
[0022]
【权利要求】
1. 提高检测食用油过氧化值试纸热稳定性的方法，其步骤如下： (1) 把柠檬酸缓冲剂、还原剂、表面活性剂、底色原料和稳定剂溶解在去离子水中，得到 溶液A ; (2) 把显色剂和反应促进剂溶解在无水乙醇中，得到溶液B ; (3) 把滤纸依次在溶液A和溶液B中浸泡并在温度50-70°C下鼓风干燥； (4) 干燥好的滤纸分切成试纸块，封装在真空铝箔袋或装有硅胶干燥剂的塑料瓶内； (5) 检测反射率的波长范围600-650nm，最好是630nm ; (6) 标准曲线的制作：配制各级过氧化值标准液（0_12meq/kg)，用化学滴定法标定 真实值；在试纸块上定量滴加标准液，120秒后选定波长检测试纸块的反射率，做出反射 率-过氧化值关系曲线和标准方程。
2. 根据权利要求1所述的方法，所述稳定剂为甘露醇或海藻糖或两者的混合物。
【文档编号】G01N21/78GK104483314SQ201410822679
【公开日】2015年4月1日 申请日期:2014年12月25日 优先权日:2014年12月25日
【发明者】廖姗, 李中, 梁明龙, 伍寿胜 申请人:桂林中辉科技发展有限公司