本发明涉及医药领域,特别涉及光学纯度的测定方法。
背景技术:
随着生活水平的提高,人们的饮食习惯也逐渐改变:肉类的摄入量在增加,青菜类的摄入量则相对降低。同时,越来越多的食品添加剂应用于人们每天的食物当中,一些不法商贩为了追求更好的口味而忽略食品添加剂的限度。这样的饮食习惯及食物慢慢侵蚀着人们的健康。患有以高血压、高血脂为代表的富贵病的人也越来越多。
依折麦布是治疗原发性高胆固醇血症的药物,2002年11月首次在德国上市,商品名为益适纯(EZETROL)。化学名为(3R,4S)-1-(4-氟苯基)-3-[(3S)-3-(4-氟苯基)-3-羟丙基]-4-(4-羟苯基)-2-氮杂环丁酮,结构式如下。其作用机制是抑制来源于食物的肠内胆固醇吸收,降低小肠中的胆固醇向肝脏中的转运,降低血浆胆固醇水平。
依折麦布中间体的化学名为1-(4-氟苯基)-3-((3S)-3-(4-氟苯基)-3-羟丙基)-4-(4-(苄氧基)苯基)-2-氮杂环丁酮,其化学结构式及消旋体的结构如下式所示。控制依折麦布中间体光学异构体杂质的含量,对于控制以及提高依折麦布成品质量有着重要作用和现实意义。
技术实现要素:
针对上述技术问题,本发明提供一种依折麦布中间体光学纯度测定方法,本方法采用硅胶表面键合有直链淀粉-三(3-氯-4-甲基苯基氨基甲酸酯)为填充剂的色谱柱,以正己烷-乙醇-二氯甲烷为流动相。
进一步地,所述流动相中含有90~95%的正己烷、4~8%的乙醇和1~2%的二氯甲烷。
优选地,所述流动相中包含有机酸,所述有机酸体积与正己烷、乙醇与二氯甲烷三者混合后体积的比为0.05~0.3:100。
更优选地,所述流动相中还包含有机酸,所述有机酸体积与正己烷、乙醇与二氯甲烷三者混合后体积的比为0.1:100。
进一步地,所述有机酸为甲酸、乙酸或三氟乙酸中的一种或多种混合物。
具体地,所述有机酸为三氟乙酸。
本方法包括如下步骤:
(1).称取依折麦布中间体样品及消旋体适量,置于容量瓶中,加流动相配置成0.46~0.54mg/ml的溶液;
(2).设置流动相的流速为0.8~1.2ml/min,检测波长为254nm,柱温为25~45℃;
(3).去依折麦布中间体消旋体溶液20μl,注入液相色谱仪,两个异构体峰之间的分离度大于1.5后,去依折麦布样品20μl,注入液相色谱仪,以峰面积归一化法计算光学纯度。
具体地,步骤(2)中所述流动相的流速为0.9ml/min。
具体地,步骤(2)中所述柱温为35℃。
本发明的依折麦布中间体光学纯度测定方法用时短,可达到基线分离,R>1.5。而且峰形良好,可准确测定依折麦布中间体的光学纯度,进而控制依折麦布终产品的质量。
为了更好地理解和实施,下面结合附图详细说明本发明。
附图说明
图1是本发明系统适用性图谱。
具体实施方式
系统适用性实施例
色谱条件:柱:大赛璐IF; 柱温:35℃;
流动相:正己烷:乙醇:二氯甲烷:三氟乙酸=93:5.5:1.5:0.1;流速:0.9ml/min
检测波长:254nm;
样品配制:称取依折麦布中间体消旋体25.06mg,置50ml容量瓶中,加流动相溶解并稀释至刻度。
试验过程及结果:在上述色谱条件下取20μl,注入液相色谱仪,所得色谱图如图1所示,两峰分离度为4.3,R>1.5,说明分离度良好,可用于样品检测。
样品检测实施例1
色谱条件:柱:大赛璐IF; 柱温:25℃;
流动相:正己烷:乙醇:二氯甲烷:三氟乙酸=90:8:2:0.3;流速:0.8ml/min
检测波长:254nm;
样品配制:称取批号为140325的依折麦布中间体样品23.85mg,置50ml容量瓶中,加流动相溶解并稀释至刻度。
试验过程及结果:在上述色谱条件下取20μl,注入液相色谱仪,依折麦布中间体出风时间为10.268min;对映异构体两峰出峰时间为14.356min,分离度为4.0,R>1.5,以峰面积归一化发计算,对映异构体含量为0.51%。
样品检测实施例2
色谱条件:柱:大赛璐IF; 柱温:45℃;
流动相:正己烷:乙醇:二氯甲烷:三氟乙酸=95:4:1:0.05;流速:1.2ml/min
检测波长:254nm;
样品配制:称取批号为140418的依折麦布中间体样品25.37mg,置50ml容量瓶中,加流动相溶解并稀释至刻度。
试验过程及结果:在上述色谱条件下取20μl,注入液相色谱仪,依折麦布中间体出风时间为3.104min;对映异构体两峰出峰时间为5.097min,分离度为4.1,R>1.5,以峰面积归一化发计算,对映异构体含量为0.39%。
样品检测实施例3
色谱条件:柱:大赛璐IF; 柱温:35℃;
流动相:正己烷:乙醇:二氯甲烷:三氟乙酸=93:5.5:1.5:0.1;流速:0.9ml/min
检测波长:254nm;
样品配制:称取批号为140420的依折麦布中间体样品26.03mg,置50ml容量瓶中,加流动相溶解并稀释至刻度。
试验过程及结果:在上述色谱条件下取20μl,注入液相色谱仪,依折麦布中间体出风时间为3.875min;对映异构体两峰出峰时间为5.987min,分离度为4.3,R>1.5,以峰面积归一化发计算,对映异构体含量为0.47%。
本发明并不局限于上述实施方式,如果对本发明的各种改动或变形不脱离本发明的精神和范围,倘若这些改动和变形属于本发明的权利要求和等同技术范围之内,则本发明也意图包含这些改动和变形。