基于分子印迹膜的快速检测猪尿液中克伦特罗方法与流程

文档序号:12358304阅读:来源:国知局

技术特征:

1.基于分子印迹膜的快速检测猪尿液中克伦特罗方法,其特征在于,该方法采用以下步骤:

(1)使用分子模拟软件Hyperchem 7.5确定模板分子与功能单体的最佳比例;

(2)制备分子印迹膜-石英晶体微天平(MIP-QCM)系统;

(3)在分子印迹膜-石英晶体微天平系统的基础上,建立声波传感器检测系统;

(4)利用声波传感器检测系统测定MIP-QCM单一性能和三种MIP-QCM组合性能,对猪尿液中克伦特罗的含量进行检测。

2.根据权利要求1所述的基于分子印迹膜的快速检测猪尿液中克伦特罗方法,其特征在于,步骤(1)采用以下步骤:

(1-1)画出模板分子、功能性单体的2D结构,然后将其转化成3D分子模型,经分子力学方法和半经验量化方法优化两步优化;

(1-2)计算后得到模板分子能量,功能单体能量和各自的电荷分布,再将不同比例的模板分子和功能单体根据电荷分布和氢键规则进行摆放,再依次用分子力学方法和半经验量化方法得到复合物最低能量构象,通过比较不同比例条件下的能量变化,来确定模板分子和功能单体的最佳比例。

3.根据权利要求1所述的基于分子印迹膜的快速检测猪尿液中克伦特罗方法,其特征在于,步骤(2)采用以下步骤:

(2-1)用Piranha溶液清洗石英晶体微天平(QCM)的金电极;

(2-2)洗净的电极置于8-10mmol/L的11-巯基十一烷酸乙醇溶液中在20℃下浸泡24h巯基自组装至金电极表面;

(2-3)分别用乙醇和去离子水清洗去除未自组装至金电极表面的残留11-巯基十一烷酸;将完成自组装操作的QCM晶片置于8-10mmol/L伍德沃德氏试剂K水溶液中,浸泡30min,活化羧基,用去离子水冲洗,氮气吹干;

(2-4)在氮气保护和冰浴条件下,将QCM晶片置于8-10mmol/L 2,2-偶氮二(2-甲基丙基咪),0.20-0.30mmol/L对二甲氨基吡啶和1-3mmol/L二环己基碳二亚胺的甲醇溶液中,待逐渐升至室温后,反应5h,然后依次用甲醇,丙酮,乙醚小心清洗,去除未反应物质,氮气吹干;

(2-5)取2-3.0mmol/L克伦特罗溶液、7.0-8.0mmol/L丙烯酰胺溶液/2.0-3.0mmol/L4-羟基扁桃酸溶液、7.0-8.0mmol/L克伦特罗溶液/2.0-3.0mmol/L对氨基马尿酸溶液、12.0-13.0mmol/L克伦特罗溶液溶于乙腈溶液中,超声脱气10min,加入乙二醇二甲基丙烯酸脂,放入金电极,氮气保护条件下65℃回流反应12h。

4.根据权利要求1所述的基于分子印迹膜的快速检测猪尿液中克伦特罗方法,其特征在于,步骤(3)中的声波传感器检测系统包括

置于流动池内的分子印迹膜-石英晶体微天平系统,

与分子印迹膜-石英晶体微天平系统连接的一体化矢量网络分析仪,

经管道与流动池连接待测液盛装装置及废液收集装置。

5.根据权利要求4所述的基于分子印迹膜的快速检测猪尿液中克伦特罗方法,其特征在于,所述的管道上连接有蠕动泵。

6.根据权利要求1所述的基于分子印迹膜的快速检测猪尿液中克伦特罗方法,其特征在于,步骤(4)中MIP-QCM单一性能测试采用以下步骤:

绘制标准曲线,即配置梯度浓度的CL乙醇溶液,将其通过相应的以CL为分子模板制备的MIP-QCM,使用矢量网络分析仪进行检测。每次测试后用依次用洗脱液(甲酸/乙酸,9:1,v/v)和去离子水清洗电极和管道至QCM频率接近初始数值;

MIP-QCM与NIP-QCM对比试验,将克伦特罗乙醇溶液依次通过基于CL制备的MIP-QCM和NIP-QCM,使用矢量网络分析仪进行测试每分钟记录下相应的声波频率数值,持续10min;

MIP-QCM使用次数测试,1×10-3mmol/L的克伦特罗乙醇溶液重复通过同一个基于CL制备的MIP-QCM,使用矢量网络分析仪进行测试,检测使用次数对传感器的影响。记录下10min时的声波频率数值;

配置克伦特罗、对氨基马尿酸和4-羟基扁桃酸的乙醇溶液,依次使用这三种模板分子制备的MIP-QCM分别测量三种溶液,每分钟记录下相应的声波频率数值,持续10min;

声波传感器阵列性能测试,将三种分子模板制备的MIP-QCM三种传感器组成阵列,分别使克伦特罗、对氨基马尿酸和4-羟基扁桃酸的乙醇溶液通过该阵列,同时记录下三种声波传感器的响应数值,每一种溶液重复进样5次,使用主成分分析的方法对三种溶液通过传感器阵列时的响应数据进行分析。

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