一种食品中玉米赤霉醇的检测试剂盒的制作方法

文档序号:11110020阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种食品中玉米赤霉醇的检测试剂盒,其特征在于,包括酶标板、玉米赤霉醇标准品、玉米赤霉醇抗体工作液、玉米赤霉醇酶标二抗工作液、底物A液、底物B液、终止液、浓缩稀释液和浓缩洗涤液;所述的玉米赤霉醇抗原的制备,是通过玉米赤霉醇半抗原与兔血清白蛋白偶联得到,具体步骤为:取0.05mmol玉米赤霉醇半抗原与兔血清白蛋白按6:1的结合比混合在0.06mol/L的pH值9.0的碳酸盐缓冲液中,然后加入0.12mmol碳化二亚胺,搅拌置于室温条件下反应20h,再于0.16~0.18mol/L的pH值7.2~7.4的磷酸盐缓冲液中透析两天,除去未反应的半抗原,将得到的蛋白质偶联物溶液于-20℃保存,得玉米赤霉醇抗原。

2.根据权利要求1所述的食品中玉米赤霉醇的检测试剂盒,其特征在于,所述的玉米赤霉醇半抗原是采用混合酸酐法将玉米赤霉醇与鸡卵清白蛋白偶联得到,具体步骤为:将0.5mmol玉米赤霉醇溶于12~15ml无水乙醇中,加入0.5mmol戊二酸酐,室温下反应2.5~3.0h,离心,将下层固体溶于14~16ml的N,N-二甲基甲酰胺,加入0.5mmol三正丁胺和0.5mmol氯甲酸异丁酯,继续反应2.0~2.5h;将上述反应液加入到12~14ml含有6~8mg/ml鸡卵清白蛋白的磷酸缓冲液中,室温反应过夜;将上述反应液用磷酸缓冲液透析4~5次,冷冻干燥,得到玉米赤霉醇半抗原。

3.根据权利要求1所述的食品中玉米赤霉醇的检测试剂盒,其特征在于,所述的酶标板的制备,步骤为:用0.055~0.058mol/L的pH值9.2~9.4的碳酸盐缓冲液作为包被液,将玉米赤霉醇抗原稀释成1:60000比例,100μL/孔,37℃孵育2h,取出酶标板甩掉板内液体,加入稀释后的浓缩洗涤液300μL/孔,洗板2次,30s/次,然后加入0.5wt.%兔血清白蛋白封闭液,150μL/孔,37℃放置2h,弃去封闭液直接拍干,拍干后的酶标板置于常温条件下晾干,抽检合格后将酶标板真空密封于4℃条件下保存。

4.根据权利要求1所述的食品中玉米赤霉醇的检测试剂盒,其特征在于,所述的玉米赤霉醇标准品的的浓度分别为0ng/mL、0.01ng/mL、0.02ng/mL、0.04ng/mL、0.08ng/mL、0.16ng/mL、0.32ng/mL、0.64ng/mL、1.28ng/mL、2.56ng/mL。

5.根据权利要求1所述的食品中玉米赤霉醇的检测试剂盒,其特征在于,所述的底物A液为含有0.60~0.65mmol/L的过氧化氢的磷酸氢二钠-磷酸二氢钾缓冲液;所述的底物B液为四甲基联苯二胺溶液。

6.根据权利要求1所述的食品中玉米赤霉醇的检测试剂盒,其特征在于,所述的终止液为2mol/L的盐酸溶液。

7.根据权利要求1所述的食品中玉米赤霉醇的检测试剂盒,其特征在于,所述的浓缩稀释液是10倍浓缩稀释液,其为0.06~0.08mol/L的pH值7.3~7.4的磷酸盐缓冲液;所述的浓缩洗涤液是10倍浓缩洗涤液,其为含0.6~0.7wt.%吐温-20、0.012~0.15mol/L的pH值7.2~7.4的磷酸盐缓冲液。

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