一种阿齐沙坦原料及其制剂中有关物质的分析方法与流程

本发明涉及化学药物分析方法技术领域，尤其涉及一种阿齐沙坦原料及其制剂中有关物质的分析方法。

背景技术：

阿齐沙坦，化学名为2-乙氧基-1-[[2’-(4,5-二氢-5-氧代-1,2,4-噁二唑-3-基)联苯基-4-基]甲基]-1H-苯并咪唑-7-羧酸，其分子式为C₂₅H₂₀N₄O₅，分子量为456.45，CAS号为147403-03-0，其结构式如下：

阿齐沙坦是由日本武田制药研发，于2012年1月18日获PMDA批准，商品名为是新一代选择性AT1亚型血管紧张素II受体拮抗剂(ARBs)类抗高血压药。与血管紧张素转化酶抑制剂(ACEI)类降压药物相比，本品具有平稳降压、不会引起干咳的优点。尽管现已上市多个ARBs类抗高血压药，但对于许多患者来说，仅通过抑制肾素-醛固酮系统(RAS)活性并不足以控制血压和降低心血管疾病及糖尿病的风险。研究显示，阿齐沙坦作为新一代双重功能ARBs，不仅拮抗血管紧张素II的1型受体(AT1受体)，还可能通过多种机制降低心血管疾病及糖尿病的风险。临床试验证明，本品具有较好疗效，且不良反应发生率较低，依从性较好的特点。

为了保证药物的安全有效，需要对药物原料及其制剂中的有关物质进行研究、检测和监控。专利CN 103743826 B公开了一种阿齐沙坦的高效液相色谱分析方法，可以对阿齐沙坦和其有关物质进行有效检测。

本发明人通过对阿齐沙坦进行研究，确立了新的合成工艺，通过研究发现按照本发明人确立的合成工艺制备得到的阿齐沙坦可能含有如下杂质：

其中，杂质9为起始原料，杂质10、11为反应中间体。杂质2、3、5、9、11分别与专利CN 103743826 B中的杂质F、A、G、D、J相同，剩余6个杂质并不相同。

由于药品的合成工艺不同，药品的杂质谱也会发生变化，专利CN 103743826 B所提供的分析方法，并不能适用于所有阿齐沙坦有关物质的检测，因此需要根据不同的合成工艺建立合适的分析方法，达到对阿齐沙坦有关物质准确、有效的检测和监控。

技术实现要素：

基本背景技术存在的技术问题，本发明提出了一种阿齐沙坦原料及其制剂中有关物质的分析方法，本发明分析时间较短，专属性好，灵敏度高，本发明能快速、有效、准确的对阿齐沙坦原料及其制剂中的有关物质进行定量分析。

本发明提出的一种阿齐沙坦原料及其制剂中有关物质的分析方法，采用高效液相色谱法，其色谱条件包括：色谱柱的填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶，以pH＝2-2.4磷酸水溶液为流动相A，以pH＝2-2.4磷酸水溶液和乙腈的体积比为10-14：90-86的混合溶液为流动相B，进行梯度洗脱；

所述梯度洗脱过程为：0-5min内，流动相A和流动相B的体积比为70：30；5-25min内，流动相A和流动相B的体积比从70：30匀速渐变至50：50；25-50min内，流动相A和流动相B的体积比从50：50匀速渐变至40：60；50-60min内，流动相A和流动相B的体积比从40：60匀速渐变至30：70；60.01-70min内，流动相A和流动相B的体积比为70：30；

所述有关物质为：

优选地，色谱柱的长度为250mm，直径为4.6mm，填充剂粒径为5μm。

优选地，以pH＝2.2磷酸水溶液为流动相A，以pH＝2.2磷酸水溶液和乙腈的体积比为12：88的混合溶液为流动相B。

优选地，检测波长为248-252nm。

优选地，检测波长可以为248.5、249、249.5、250、250.5、251或251.5nm。

优选地，流速为0.95-1.05ml/min。

优选地，流速可以为0.96、0.97、0.98、0.99、1.0、1.01、1.02、1.03或1.04ml/min。

优选地，柱温为30-40℃。

优选地，柱温可以为31、32、33、34、35、36、37、38或39℃。

优选地，进样量为1-20μl。

优选地，进样量可以为2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18或19μl。

本发明人对浓度均为15μ/ml的阿齐沙坦甲醇溶液和浓度均为10μ/ml的上述11个杂质对照品的甲醇溶液进行紫外吸收光谱扫描，结果见表1：

表1阿齐沙坦和各杂质的紫外吸收波长

由上表可以看出，除杂质8和9外，阿齐沙坦及各杂质均在250±2nm处有最大吸收，杂质8和9在250nm波长处有较大吸收，因此选择250nm波长作为阿齐沙坦原料及其制剂有关物质检查的波长。

本发明人通过筛选优化合适组分和比例的流动相对阿齐沙坦以及上述11个杂质进行色谱分析，确定了本发明的分析方法，通过对起始原料、反应中间体、阿齐沙坦的峰定位试验，干扰性试验和阿齐沙坦的降解试验对本发明进行专属性验证，结果见表2和图1：

表2专属性验证结果

由上表可以看出，各杂质峰之间、阿齐沙坦主峰及其相邻杂质峰之间的分离度均大于1.5，阿齐沙坦主峰的理论板数不小于3000，本发明的专属性好。

本发明人还选用市场上常用的制备阿齐沙坦制剂的药用辅料对本发明进行了研究，发现常用的药用辅料对本发明没有干扰。

本发明人对阿齐沙坦和各杂质的检测限、定量限、线性、校正因子进行检测，进行灵敏度和定量分析验证，结果见表3：

表3阿齐沙坦和各杂质的灵敏度和定量分析验证结果

上述报告限度是指超出此限度的杂质均应在检测报告中报告，并应报告具体的检测数据。

由上表可以看出，本发明阿齐沙坦和各杂质检测灵敏度均较高，其检测限和定量限均小于报告限度，并且各杂质在极低浓度范围内线性关系良好，因此本发明能准确定量控制各杂质含量。

本发明分析时间较短；各杂质峰之间、阿齐沙坦主峰及其相邻杂质峰之间的分离度均大于1.5，阿齐沙坦主峰的理论板数不小于3000，杂质和主峰可以有效分离，本发明的专属性好；本发明检测限、定量限均较小，本发明的灵敏度好；本发明通过加校正因子的主成分自身对照法对上述11个杂质进行定量分析，增加本发明有关物质检测的准确性；本发明能快速、有效、准确的对阿齐沙坦原料和制剂中的有关物质进行定量分析。

附图说明

图1为系统适用性溶液色谱图。

图2为阿齐沙坦有关物质色谱图。

图3为阿齐沙坦制剂有关物质色谱图。

具体实施方式

下面，通过具体实施例对本发明的技术方案进行详细说明。

实施例1

高效液相色谱条件：

十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱(250×4.6mm，5μm)，以pH＝2.2磷酸水溶液为流动相A，以pH＝2.2磷酸水溶液和乙腈的体积比为12：88的混合溶液为流动相B，进行梯度洗脱，流速为1.0ml/min，检测波长为250nm，柱温为35℃；

所述梯度洗脱过程为：0-5min内，流动相A和流动相B的体积比为70：30；5-25min内，流动相A和流动相B的体积比从70：30匀速渐变至50：50；25-50min内，流动相A和流动相B的体积比从50：50匀速渐变至40：60；50-60min内，流动相A和流动相B的体积比从40：60匀速渐变至30：70；60.01-70min内，流动相A和流动相B的体积比为70：30。

样品配制：

系统适用性溶液：分别取杂质1、3、5、6、7、8、10和11对照品约12.5mg，精密称定，置25ml量瓶中，加甲醇适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为杂质对照品贮备液一；另取杂质2对照品约12.5mg，精密称定，置25ml量瓶中，加DMF10ml使溶解，再加甲醇稀释至刻度，作为杂质对照品贮备液二；另取杂质4对照品约12.5mg，精密称定，置25ml量瓶中，加DMF2.5ml使溶解，再加甲醇稀释至刻度，作为杂质对照品贮备液三；另取杂质9对照品约12.5mg，精密称定，置25ml量瓶中，加乙腈10ml超声使溶解，再加甲醇稀释至刻度，作为杂质对照品贮备液四；另取阿齐沙坦对照品约50mg，精密称定，置50ml量瓶中，加甲醇适量使溶解，精密量取各杂质对照品贮备液0.5ml，置同一量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为系统适用性溶液。

试验操作：取系统适用性溶液10μl进样，记录色谱图。

典型色谱图见图1，由图1可以看出各杂质峰之间、阿齐沙坦主峰及其相邻杂质峰之间的分离度均大于1.5。

实施例2

十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱(250×4.6mm，5μm)，以pH＝2磷酸水溶液为流动相A，以pH＝2磷酸水溶液和乙腈的体积比为14：86的混合溶液为流动相B，进行梯度洗脱，流速为1.05ml/min，检测波长为248nm，柱温为30℃；所述梯度洗脱过程同实施例1。

样品配制：

供试品溶液：取阿齐沙坦供试品约50mg，精密称定，置50ml量瓶中，加甲醇适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为样品溶液。

试验操作：取供试品溶液10μl进样，记录色谱图。

实施例3

十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱(250×4.6mm，5μm)，以pH＝2.4磷酸水溶液为流动相A，以pH＝2.4磷酸水溶液和乙腈的体积比为10：90的混合溶液为流动相B，进行梯度洗脱，流速为0.95ml/min，检测波长为250nm，柱温为40℃；所述梯度洗脱过程同实施例1。

样品配制：

供试品溶液：取阿齐沙坦供试品约50mg，精密称定，置50ml量瓶中，加甲醇适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为样品溶液。

试验操作：取供试品溶液10μl进样，记录色谱图。

实施例4

十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱(250×4.6mm，5μm)，以pH＝2.2磷酸水溶液为流动相A，以pH＝2.2磷酸水溶液和乙腈的体积比为12：88的混合溶液为流动相B，进行梯度洗脱，流速为1.0ml/min，检测波长为250nm，柱温为35℃；所述梯度洗脱过程同实施例1。

样品配制：

供试品溶液：取阿齐沙坦供试品约50mg，精密称定，置50ml量瓶中，加甲醇适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为样品溶液。

试验操作：取供试品溶液10μl进样，记录色谱图。

典型色谱图见图2。

实施例5

十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱(250×4.6mm，5μm)，以pH＝2.2磷酸水溶液为流动相A，以pH＝2.2磷酸水溶液和乙腈的体积比为12：88的混合溶液为流动相B，进行梯度洗脱，流速为1.0ml/min，检测波长为250nm，柱温为35℃；所述梯度洗脱过程同实施例1。

样品配制：

供试品溶液：取规格为20mg的阿齐沙坦片10片，研碎混匀，取细粉适量(约相当于含阿齐沙坦50mg)，精密称定，置50ml量瓶中，加甲醇适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为样品溶液。

试验操作：取供试品溶液10μl过滤进样，记录色谱图。

典型色谱图见图3。

以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。