HPLC‑CAD同时测定葡萄糖氯化钠注射液中葡萄糖、氯、钠含量的方法与流程

本发明涉及化学检测领域，尤其是一种hplc-cad同时测定葡萄糖氯化钠注射液中葡萄糖、氯、钠含量的方法。

背景技术：

中国药典2010版记载了葡萄糖注射液中葡萄糖测定的方法，其3.6.1节记录采用旋光度法测定注射液中的葡萄糖的含量，该方法对环境温度控制要求高，测定时受环境因素影响较大，其3.6.2节记录采用硝酸银滴定法测定注射液中的氯化钠的含量，该方法对操作人员专业技能要求高，不同测试人员测试结果存在一定的偏差。现有国标中并未记载同时测量葡萄糖氯化钠注射液中葡萄糖、氯、钠含量的测定方法，即使采用传统的hplc的测量方法，其线性率在整个测量范围内并不服从严格的线性分布标准。

电喷雾检测器(cad)是目前通用的检测器，与hplc联用时，hplc洗脱液经雾化器中氮气的作用而雾化,其中较大的液滴在碰撞器的作用下经废液管流出，较小的溶质(分析物)液滴在室温下干燥，形成溶质颗粒。同时，用于载气的氮气分流形成的第二股氮气流经过电晕式装置(含高压铂金丝电极)形成带正电荷的氮气颗粒，与溶质颗粒反向相遇时经碰撞使溶质颗粒带上正电。它不依赖于分析物的结构，也不需要将分析物电离，只要该物质属于半挥发性或非挥发性化合物就可以被检出，且灵敏度可以达到pg级别，重现性良好，是紫外(uv)、质谱(ms)、示差折光(ri)与蒸发光散射(elsd)等常用检测器的有力补充。

技术实现要素：

针对上述不足，本发明旨在提供一种测定准确、操作简单的hplc-cad同时测定葡萄糖氯化钠注射液中葡萄糖、氯、钠含量的方法。

为了解决上述技术问题，本发明提供的技术方案是这样的：一种hplc-cad同时测定葡萄糖氯化钠注射液中葡萄糖、氯、钠含量的方法，依次包括下述步骤：

1)取葡萄糖氯化钠注射液1ml用水定容至1000ml，摇匀，过滤，得供试品溶液；

2)采用高效液相色谱法进行分析，参数设置如下：

色谱柱：thermomixed-modehilic，2.1×150mm，1.3μm；

流速：0.3ml/min；

柱温：40℃；

进样量：10μl；

流动相：50mmol/l醋酸铵-乙腈。

进一步的，所述的高效液相色谱仪的型号为：thermo-u3000高效液相色谱仪，所述的thermo-u3000高效液相色谱仪附带coronaultra电喷雾检测器。

进一步的，所述的流动相中50mmol/l醋酸铵-乙腈的体积比为15～80：20～85。

进一步的，所述的流动相采用梯度洗脱的方法加入，其中具体的参数如下：

洗脱总时间为10分钟；

第0-2分钟，流动相中50mmol/l醋酸铵-乙腈的体积比为15：85；

第4-5分钟，流动相中50mmol/l醋酸铵-乙腈的体积比为80：20；

第6-10分钟，流动相中50mmol/l醋酸铵-乙腈的体积比为15：85。

进一步的，所述的供试品溶液的制备需过0.45μm滤膜。

本发明的有益效果如下：

采用上述方案可以同时测量葡萄糖氯化钠注射液中葡萄糖、氯、钠的浓度，避免了国标测试的人员操作和环境因素影响，同时hplc结合电喷雾检测器(cad)，可以保证在整个浓度范围内符合线性分布的规律，避免了极低浓度下的传统hplc测试方法带来的不准确性。

coronaultra电喷雾检测器(cad)技术的工作原理是将分析物转化成溶质颗粒，颗粒的大小随着被分析物的含量而增加；溶质颗粒与带正电荷的氮气颗粒相撞，电荷随之转移到颗粒上(溶质颗粒越大，带电越多)；溶质颗粒把它们的电荷转移给收集器，通过高灵敏度的静电检测计测出溶质颗粒的带电量，由此产生的信号电流与溶质的含量成正比；检测结果与分析物颗粒有关，信号电流与样品中分析物的质量成正比。

上述测试方法采用梯度洗脱的方式进行洗脱，能够在较宽的范围内实现待测成分的有效分离，同时，采用coronaultra电喷雾检测器能够实现极低浓度时的准确测量，克服了传统测试方法的人工操作带来的不稳定性。

附图说明

图1为超纯水的高效液相色谱图；

图2为葡萄糖氯化钠注射液的高效液相色谱图。

具体实施方法

下面结合具体实施例对权利要求书做进一步说明，但不构成对本发明的任何限制，任何在对本发明做有限次修改所得到的技术方案仍然属于本发明所要保护的范围。

实施例1

1仪器与试剂

thermo-u3000高效液相色谱仪(美国热电公司，附带coronaultra电喷雾检测器)，色谱柱为thermomixed-modehilic(2.1×150mm，1.3μm)。

醋酸铵(分析纯，上海阿拉丁生化科技股份有限公司)；

葡萄糖对照品(批号：e1407051，aladdin，含量≥99.5％)；

氯化钠对照品(批号：gbw(e)060024，中国计量科学研究院，含量＝99.99％)；

250ml葡萄糖氯化钠注射液(批号：e131102k2，湖南科伦制药有限公司)；250ml葡萄糖氯化钠注射液(批号：131228804，安徽双鹤药业有限责任公司)；250ml葡萄糖氯化钠注射液(批号：h13121609，广西裕源药业有限公司)；均由医院提供；

乙腈(色谱纯，美国sigma-aldrich公司)；

提取用水为超纯水。

2.方法

2.1供试品溶液的制备

取葡萄糖氯化钠注射液1ml用水定容至1000ml，摇匀，过滤，滤液过0.45μm滤膜，得供试品溶液。

2.2对照品溶液的制备

参照《中国药典》2015年版二部中葡萄糖氯化钠注射液规格(7)项下配制，取葡萄糖约12.5g和氯化钠约2.25g，精密称定，置于250ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

2.3线性配制

精密移取对照品贮备液1ml置于10ml量瓶中，加超纯水稀释并定容至刻度，摇匀，再精密移取各1ml分别置于100ml、50ml、25ml、10ml、5ml量瓶中，加超纯水稀释并定容至刻度，摇匀，即得。

制成表1所示线性溶液。

表1

2.4色谱条件

流速：0.3ml/min，柱温40℃，进样量10μl，流动相为a(50mmol/l醋酸铵)：b(乙腈)。

所述的流动相采用梯度洗脱的方法加入，其中具体的参数如下：

洗脱总时间为10分钟；

第0-2分钟，流动相中50mmol/l醋酸铵-乙腈的体积比为15：85；

第4-5分钟，流动相中50mmol/l醋酸铵-乙腈的体积比为80：20；

第6-10分钟，流动相中50mmol/l醋酸铵-乙腈的体积比为15：85。

3.结果

3.1专属性试验

取适量超纯水，按“2.4”项下色谱条件上机检测，实验结果如下图1，表明超纯水中clo^-对检测无干扰。

3.2结果及线性关系

按“2.4”项下色谱条件，葡萄糖、cl^-、na⁺分离度良好，且不受溶剂超纯水中杂质clo^-等干扰，色谱图见图1、图2。

精密量取供试品溶液和对照品溶液10μl，注入液相色谱仪，记录峰面积，以对照品浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，进行线性回归。

葡萄糖在0.5～1.0mg/ml范围内与峰面积线性关系良好，回归方程y＝125.8386x+1.2101(r＝0.9993)；氯、钠在0.09～1.80mg/ml范围内与峰面积线性关系良好，回归方程分别为y＝33.6836x+0.6429(r＝0.9999)、y＝17.3087x+0.0395(r＝0.9999)。

3.3精密度试验

精密精取同一对照品溶液，连续进样6次，记录峰面积，分别计算葡萄糖、cl^-和na⁺的rsd，分别为0.25％、0.11％、0.14％。结果表明，仪器精密度良好。

3.4重复性试验

取样品6份，按“2.1”供试品方法制备，测定峰面积。分别计算6份样品中葡萄糖、cl^-和na⁺的平均含量分别为12.51g/250ml、2.25g/250ml、2.25g/250ml，rsd分别为1.50％、0.95％和1.58％。结果表明，本方法重复性良好。

3.5稳定性试验

取样品，在0、4、8、12、16、20、24h内进样7次，测定峰面积，分别计算样品中不同时间点的葡萄糖、cl^-和na⁺含量的rsd为0.93％、0.85％、1.04％。结果表明，供试品溶液在24h内稳定。

3.6回收率试验

取已知含量的样品6份，每份约1ml，精密称定。分别精密加入“2.2”项下对照品储备液1ml，按“2.1”供试品方法制备，测定。结果见表2，葡萄糖氯化钠注射液中葡萄糖、cl^-和na⁺的平均回收率分别为100.4％、99.8％、100.1％，rsd分别为1.11％、1.02％、1.15％。

下表以葡萄糖回收率为例。

表2

4、讨论

4.1由于葡萄糖和氯化钠没有紫外吸收官能团，不能通过常规的高效液相色谱-紫外检测法(hplc-uv)同时进行检测。本文建立了一种准确、快速、简便的高效液相色谱-电喷雾检测器法同时测定葡萄糖氯化钠注射液中葡萄糖、氯和钠的含量。可应用于其质量控制和稳定性研究，对其类似化合物的测定也具有参考价值。可作为医院常用的葡萄糖氯化钠注射液含量检测的一种有效手段。

4.2由于使用了thermomixed-modehilic-13μm2.1×150mm色谱柱，其具有混合模式固定相结合两种反相液相色谱法(rp)和亲水性交互(hilic)属性，使同时测定氯和钠两种阴阳离子成为可能。

4.3电喷雾检测器(cad)是近年来发展起来的一种新型通用检测器，在灵敏度、重现性和线性方面均具有优异的性能，且操作简便。其基于独特的新检测原理，它的检测技术不依赖于化合物的分子结构，可实际应用于任何非挥发或半挥发化合物，使得不具有示差折光检测器和离子色谱的情况下，能完成对葡萄糖和氯化钠2个阴阳离子的检测。

4.4《中国药典》2015年版二部采用的含量测定方法繁琐耗时，分别用旋光度法测定葡萄糖含量，硝酸银滴定法测定氯化钠中氯含量。本发明改用hplc-cad法进行测定，样品用超纯水直接溶解上机，大大节省了前处理时间，同时检测三个成分含量，保证了结果的准确性和耐用性。且葡萄糖、氯和钠的分离效果好，此方法抗干扰能力强。

以上仅为本发明的具体实施例，凡在本发明的精神和原则范围内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。