本发明涉及一种农药残留方法的检测，具体涉及一种叶类蔬菜中恶霉灵农药残留检测前处理方法。
背景技术：
恶霉灵俗称绿亨一号、土菌消、土菌克或绿佳宝，是一种高效广谱杀菌剂，恶霉灵对各种植物真菌的病害防治效果较好，毒性较低，因此在我国应用广泛。目前，随着人们对健康安全关注度的增加，植物中恶霉灵农药残留对人体的毒害作用也逐渐受到关注，有资料显示恶霉灵农药残留不仅会损害人体的肠胃、肾脏器官，而且在人体代谢过程中恶霉灵转变成的亚硝基化合物容易诱发癌症等疾病。据此，需要对植物中，特别是水果蔬菜中的恶霉灵农药残留进行检测，以及早做出防治准备。
现有针对恶霉灵农残检测报道不多，特别是叶类蔬菜，报道较少，且检测中的回收率低，检测方法选择性不好，容易造成假阳性判断，误差较大。
技术实现要素：
本发明要解决的技术方案是克服现有技术的缺陷，提供一种叶类蔬菜中恶霉灵农药残留检测前处理方法，该方法回收率高，检测准确度高、重复性好。
为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：
一种叶类蔬菜中恶霉灵农药残留检测前处理方法，包括步骤：
（1）将叶类蔬菜洗净，置于烘箱内烘干；
（2）研磨成粉末，加入乙醇浸润，然后再加入碱性溶液，搅拌后冷藏0.5-1h；
（3）冷藏后加入乙酸乙酯涡旋振荡，得到初提液；
（4）将初提液与氯化钠、醋酸钠、硫酸镁和柠檬酸钠混合均匀，静置，取上清液。
优选的，步骤（1）中烘干分两段，第一段是初步烘干，将叶类蔬菜在碱性氛围下烘至少1h，第二段是深度烘干，撤去碱性氛围，烘干至含水率小于10%。
优选的，所述碱性氛围为含有氨水的空间。优选的操作方法包括：将叶类蔬菜置于装有氨水的容器中或容器上部，叶类蔬菜不与氨水接触，如采用支架或金属网垫隔开，然后容器上盖，留有气体溢出的出口，烘箱在不高于90℃的温度下，进一步优选在60-80℃下烘0.5-1h后，撤去盛有氨水的容器，正常烘干至含水率小于10%。
优选的，所述碱性溶液为氢氧化钠、氢氧化钾或碳酸钾、碳酸钠溶液。
优选的，步骤（4）得到的上清液中加有吸附剂。吸附剂包括现不限于活性炭、硅藻土、psa吸附剂等中的一种或一种以上的混合物。
优选的，以质量计，氯化钠用量是烘干后叶类蔬菜重量的0.1-0.5倍，醋酸钠用量是烘干后叶类蔬菜重量的0.5-1.0倍，硫酸镁用量是烘干后叶类蔬菜重量的4.0-5.0倍，柠檬酸钠用量是烘干后叶类蔬菜重量的0.1-0.5倍。
优选的，步骤（2）中乙醇浸提时间为0.5-1h，冷藏温度为-4-0℃。
优选的，步骤（3）中涡旋振荡的速率为1500-2000r/min，时间为1-5min。
优选的，采用液相色谱-串联质谱对上清液进行检测。
本发明所达到的有益效果：
本发明检测方法所用溶剂及试剂为常用试剂，毒性低，处理新鲜叶类蔬菜时在碱性条件下烘干能帮助释放叶类蔬菜中的农残，后续的碱溶液处理能进一步将叶类蔬菜中的农残充分的提取出来，随后加入乙酸乙酯、氯化钠、醋酸钠、硫酸镁和柠檬酸钠等步骤在进一步将水果中农残释放出来同时，还进一步将水相中农残向乙酸乙酯中转移，从而提高恶霉灵的提取率。吸附剂对上清液的处理能进一步减少后续测量的干扰，提高检测的准确度。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步描述。以下实施例仅用于更加清楚地说明本发明的技术方案，而不能以此来限制本发明的保护范围。
实施例1
一种叶类蔬菜中恶霉灵农药残留检测前处理方法，包括步骤：
将叶类蔬菜洗净，置于烘箱内烘干；具体烘干做法是：将叶类蔬菜置于装有氨水的容器中，叶类蔬菜不与氨水接触，可采用金属网垫隔开，然后容器上盖，留有气体溢出的出口，烘箱在78℃的温度下烘0.5h后，撤去盛有氨水的容器，然后再正常烘干至含水率小于10%。随后研磨成粉末，取5g加入乙醇10ml浸润1h，然后再加入ph为12的氢氧化钠溶液10ml，搅拌后-1℃冷藏0.5h；冷藏后加入乙酸乙酯15ml涡旋振荡，涡旋振荡速率2000r/min，时间2min，得到初提液；随后将初提液与氯化钠、醋酸钠、硫酸镁和柠檬酸钠的混合物混合均匀，静置，取上清液。以质量计，氯化钠用量是烘干后叶类蔬菜重量的0.1倍，醋酸钠用量是烘干后叶类蔬菜重量的0.6倍，硫酸镁用量是烘干后叶类蔬菜重量的4.2倍，柠檬酸钠用量是烘干后叶类蔬菜重量的0.1倍。
向上述得到的上清液中加有吸附剂psa。然后用液相色谱-串联质谱对上清液进行检测。
取5µl上清液进样至超高效液相色谱-质谱联用仪（美国agilent公司生产的agilent1290型号高效液相色谱仪和美国absciex公司生产的ap15500质谱仪连用）中平行测定三次，测定条件参考如下：
色谱条件：色谱柱agilentzorbax300sb-c8(规格为2.1×100mm，1.8μm)；流动相：a：甲醇，b：水；梯度洗脱程序：0-2min甲醇：水＝3:7，2-4min甲醇：水＝12:1，4-10min甲醇：水＝10:1，10-15min甲醇：水＝4：7，流速：250μl/min，柱温：40℃。
质谱条件：电喷雾离子源，喷雾电压（is）：2.6v；离子化温度350℃，雾化器流量1000l/hr；锥孔气流量50l/hr；碰撞气流量为0.15ml/min，碰撞气氮气，驻留时间100ms。
随后配标准溶液，线性回归，计算恶霉灵含量及加标回收率。经检测，本实施例中恶霉灵加标回收率为98.1%，rsd值为2.0%。
对比例
本对比例中，在烘干新鲜叶类蔬菜时，不在碱性氛围下烘干，而是在烘箱内直接烘干至含水量小于10%，其余各步骤均与实施例1相同，测定结果：恶霉灵加标回收率为91.1%，rsd值为1.8%。可见，对比例中虽然回收率较高，但烘干条件的差异还是对恶霉灵回收率较大影响。
实施例2
将叶类蔬菜洗净，置于烘箱内烘干；具体烘干做法是：将叶类蔬菜置于装有氨水的容器中，叶类蔬菜不与氨水接触，可采用金属网垫隔开，然后容器上盖，留有气体溢出的出口，烘箱在60℃的温度下烘1h后，撤去盛有氨水的容器，然后再正常烘干至含水率小于10%。随后研磨成粉末，取5g加入乙醇10ml浸润40min，然后再加入ph为12的氢氧化钾溶液10ml，搅拌后0℃冷藏40min；冷藏后加入乙酸乙酯12ml涡旋振荡，涡旋振荡速率2000r/min，时间4min，得到初提液；随后将初提液与氯化钠、醋酸钠、硫酸镁和柠檬酸钠的混合物混合均匀，静置，取上清液。以质量计，氯化钠用量是烘干后叶类蔬菜重量的0.3倍，醋酸钠用量是烘干后叶类蔬菜重量的0.8倍，硫酸镁用量是烘干后叶类蔬菜重量的5.0倍，柠檬酸钠用量是烘干后叶类蔬菜重量的0.3倍。
向上述得到的上清液中加有吸附剂活性炭。然后用液相色谱-串联质谱对上清液进行检测。测定条件参加实施例1，必要时需做不付出创造性的参数调整：
计算恶霉灵含量及加标回收率。经检测，本实施例中恶霉灵加标回收率为97.9%，rsd值为2.6%。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和变形，这些改进和变形也应视为本发明的保护范围。