本发明属于烟草化学分析技术领域，具体提供一种卷烟主流烟气中杀菌剂迁移量的气相色谱-串联质谱检测方法。
背景技术：
杀菌剂是用于防治由各种病原微生物引起的植物病害的一类农药，一般指杀真菌剂。但国际上，通常是作为防治各类病原微生物的药剂的总称。从控制作物病害的角度来说，目前杀菌剂有着其他物质无法替代的作用，杀菌剂的总体需求在持续增加，全球杀菌剂增长速度达到近8％，三唑类杀菌剂仍将是主角。为了防止烟叶为病虫害侵噬，保证烟叶产量，在烟叶的种植过程中也不可避免地使用了杀菌剂。
目前，烟草中农药残留的问题已经越来越引起烟草界和全社会的关注。烟草作为一种特殊的消费品，是通过烟支燃烧形成烟气后进入人体消费，在此过程烟丝中的农药残留以一定的迁移率转移到了烟气中。因此，单纯以烟叶中的农药残留限量来判断卷烟烟气的农药残留安全性是不准确的，必须明确烟叶中农药残留向主流烟气中的迁移情况，才能更准确评价卷烟烟气农药残留的安全性。因此，建立一种卷烟主流烟气中杀菌剂迁移量的检测方法，对研究卷烟抽吸过程中杀菌剂向主流烟气中的迁移量和迁移率有着重要意义。
目前，在烟草中使用的杀菌剂常见的测定方法有气相色谱法、液相色谱法或者气质、气相色谱电子捕获检测器和质谱联用检测法、气相色谱火焰光度检测器检测法、液质联用法等，但评价的准确性有待提高。
技术实现要素：
本发明采用剑桥滤片捕集烟气粒相物，经基质分散固相萃取净化，用气相色谱-串联质谱联用法测定烟气粒相物中杀菌剂的迁移量。经文献搜索，未发现与本发明内容相同文献的公开报道。
本发明的目的在于提供一种卷烟主流烟气中杀菌剂迁移量的气相色谱-串联质谱检测方法，以研究烟叶中农药残留向主流烟气粒相物中的迁移情况。
本发明的一种卷烟主流烟气中杀菌剂迁移量的气相色谱-串联质谱检测方法，包括以下步骤：
(1)在吸烟机对卷烟进行抽吸，用剑桥滤片捕集主流烟气总粒相物；
(2)取下步骤(1)的剑桥滤片，将剑桥滤片剪碎后放入离心管中，加入乙腈和内标液，振荡使至样品浸润；
(3)加入固相萃取试剂，振荡后离心分离；
(4)取步骤(3)离心后的上层清液至净化离心管中，振荡后离心分离；
(5)取步骤(4)离心后的上层清液采用气相色谱-串联质谱检测进行分析；
(6)步骤(5)所述气相色谱-串联质谱检测的条件为：色谱柱：毛细管色谱柱，固定相为50wt％苯基–甲基聚硅氧烷，规格为长30mm×宽0.25mm×厚0.25μm；PTV进样口，初始温度70℃，进样后以4℃/s升至280℃；进样量1μL，不分流进样；载气：氦气，恒流模式，流速为1.2mL/min；柱温箱升温程序：初始温度为90℃，初始时间为5min，以25℃/min速率由90℃升至180℃，保持15min，然后以5℃/min升至280℃，保持6.5min，然后以40℃/min升至300℃，保持5min；EI电离模式，电离能70eV；离子源温度250℃，传输线温度280℃；Q2碰撞气：氩气，1.2mTorr；扫描方式：多反应监测；溶剂延迟：5min。
优选地，步骤(2)所述的内标液为体积比1:1的2ug/1000mL的莠去津的甲苯溶液和2ug/1000mL的磷酸三苯酯的甲苯溶液。
优选地，步骤(2)、(3)和(4)所述振荡的频率2500r/min，时间为6min。
优选地，步骤(3)和(4)所述离心分离的转速为4000r/min，离心时间为10min。
优选地，步骤(3)所述固相萃取试剂为质量比为2:1:8:2的柠檬酸钠、柠檬酸氢二钠、无水硫酸镁和氯化钠的混合物。
优选地，步骤(4)所述净化离心管中含有质量比为1:1:2的N-丙基乙二胺、石墨化碳和无水硫酸镁混合物。
本发明的优点在于：用分散固相萃取净化剑桥滤片上的总粒相物的提取液，采用气相色谱-串联质谱联用法进行分析，实现烟气总粒相物中杀菌剂迁移量的检测。从而为考察不同卷烟在燃烧过程中杀菌剂向卷烟主流烟气中的迁移量和迁移率打下基础。评价的准确性有所提高。
附图说明
无。
具体实施方式：
本发明的卷烟主流烟气中杀菌剂迁移量的检测方法，具体步骤如下：
a.在吸烟机上装上待测卷烟，参照中华人民共和国国家标准GB/T 19609-2004《卷烟用常规分析用吸烟机测定总粒相物和焦油》，抽吸20支卷烟，用剑桥滤片捕集主流烟气总粒相物；
b.卷烟抽吸完毕后，取下捕集有主流烟气总粒相物的剑桥滤片，并将其撕碎，放入50mL离心管中，加乙腈15mL，100uL内标液，2500r/min振荡6min至样品被乙腈充分浸润；
c.加入固相萃取试剂包，萃取试剂包中含1.0g柠檬酸钠、0.5g柠檬酸氢二钠、4.0g无水硫酸镁、1.0g氯化钠；置于漩涡混合振荡仪上以2500r/min振荡6min充分混合，然后以4000r/min离心10min；
d.移取离心上清液2mL至净化离心管，净化离心管中含50mg的N-丙基乙二胺、50mg石墨化碳、100mg无水硫酸镁中，置于漩涡混合振荡仪上以2500r/min振荡6min，然后以10000r/min离心2min，取上清液1mL经0.22μm滤膜过滤，之后采用气相色谱-串联质谱法进行分析。
e.所述气相色谱-串联质谱检测的条件为：色谱柱：毛细管色谱柱，固定相为50wt％苯基–甲基聚硅氧烷，规格为长30mm×宽0.25mm×厚0.25μm；PTV进样口，初始温度70℃，进样后以4℃/s升至280℃；进样量1μL，不分流进样；载气：氦气，恒流模式，流速为1.2mL/min；柱温箱升温程序：初始温度为90℃，初始时间为5min，以25℃/min速率由90℃升至180℃，保持15min，然后以5℃/min升至280℃，保持6.5min，然后以40℃/min升至300℃，保持5min；EI电离模式，电离能70eV；离子源温度250℃，传输线温度280℃；Q2碰撞气：氩气，1.2mTorr；扫描方式：多反应监测(MRM)；溶剂延迟：5min。
仪器与试剂
Waters Quattro Micro气相色谱-串联质谱仪(美国Waters公司)，Talboys多管旋涡混合仪(美国Talboys公司)，Millipore超纯水机(美国Millipore公司)，Eppendorf 5804台式离心机(德国Eppendorf公司)，SM450直线型吸烟机(英国斯茹林公司)。
乙腈、甲苯：色谱级，购自美国Tiade公司；农药标准物质莠去津、磷酸三苯酯购自Dr.Ehrenstorfer公司；基质分散固相萃取试剂盒：提取试剂包含1.0g柠檬酸钠、0.5g柠檬酸氢二钠、4.0g无水硫酸镁、1.0g氯化钠；净化离心管含50mg PSA、50mg石墨化碳、100mg无水硫酸镁购自美国Agilent公司。
具体实验步骤
样品提取：将待测市售卷烟，在GB/T 16447-2004规定的烟草及烟草制品调节和测试的大气环境条件下平衡48h，经分选后，用符合ISO 30008要求的吸烟机，在常规分析用吸烟机标准条件(1puff/min，2s/puff，35.0mL/puff)下抽吸。.卷烟抽吸完毕后，取下捕集有主流烟气总粒相物的剑桥滤片，并将其撕碎，放入50mL离心管中，加乙腈15mL，100uL内标液，2500r/min振荡6min至样品被乙腈充分浸润；
样品净化：加入固相萃取试剂为1.0g柠檬酸钠、0.5g柠檬酸氢二钠、4.0g无水硫酸镁、1.0g氯化钠，然后置于漩涡混合振荡仪上以2500r/min振荡6min充分混合，然后以4000r/min离心10min；移取离心上清液2mL至净化离心管，净化离心管中含50mg的N-丙基乙二胺、50mg石墨化碳、100mg无水硫酸镁(美国Agilent公司产品)中，置于漩涡混合振荡仪上以2500r/min振荡6min，然后以4000r/min离心10min，取上清液1mL经0.22μm滤膜过滤，之后采用气相色谱-串联质谱法进行分析。
测定条件
以下分析条件可供参考，采用其他条件应验证其适用性。
——色谱柱：毛细管色谱柱，固定相为(50％苯基)–甲基聚硅氧烷，规格为[30m(长度)×0.25mm(内径)×0.25μm(膜厚)]；
——PTV进样口，初始温度70℃，进样后以4℃/s升至280℃；
——进样量1μL，不分流进样；
——载气：氦气，恒流模式，流速为1.2mL/min；
——柱温箱升温程序：初始温度为90℃，初始时间为5min；以25℃/min速率由90℃升至180℃，保持15min；然后以5℃/min升至280℃，保持6.5min；然后以40℃/min升至300℃，保持5min；
——EI电离模式，电离能70eV；离子源温度250℃，传输线温度280℃；
——Q2碰撞气：氩气，1.2mTorr；
——扫描方式：多反应监测(MRM)；
——溶剂延迟：5min。
标准工作曲线制作
对基质配标标准工作溶液进行气相色谱-串联质谱分析，得到每个农药目标化合物与内标的峰面积之比，以每个农药目标化合物的浓度为纵坐标，该农药目标化合物与内标的峰面积之比为横坐标，绘制标准工作曲线，通过线性拟合检查质谱检测器的响应是否呈线性，相关系数R2＞0.99。
每次试验均应制作标准工作曲线，每进样20次后应加入一个中等浓度的混合标准工作溶液，如果测得的值与原值相差超过10％，则应重新进行混合标准工作曲线的制作。
样品测定，对试样萃取液进行分析，由标准工作曲线得到测定值。每个样品平行测定两次。
实施例1
选取市售国内卷烟样品，按照上述测试方法进行卷烟主流烟气中杀菌剂迁移量的测定，结果见表1。结果显示卷烟主流烟气中没检出三唑酮、三唑醇、稻瘟灵、甲霜灵等杀菌剂残留。其中：杀菌剂迁移率(wt％)＝(主流烟气粒相物中检出量/卷烟抽吸燃烧前烟丝中残留量)×wt100％。
表1卷烟主流烟气中杀菌剂迁移量的检测结果
注：表中/表示未检出。
实施例2
由于市售卷烟主流烟气中没检出杀菌剂，采用外加注射不同浓度的杀菌剂(三唑酮和稻瘟灵)，分别注射1ug/20支、4ug/20支、20ug/20支和80ug/20支到烟支中，抽吸后按照上述测试方法对卷烟主流烟气中三唑酮和稻瘟灵进行测定。
结果显示：外加到烟支中的三唑酮量在1.0ug/20支和4.0ug/20支时，在卷烟主流烟气粒相物中未检测到三唑酮和其代谢物三唑醇；外加到烟支中的三唑酮量在20ug/20支和80ug/20支时，在卷烟卷烟主流烟气粒相物中检测到三唑酮和其代谢物三唑醇，并且随着外加量的增加烟气粒相物中三唑酮和三唑醇的迁移量、迁移率升高。外加到烟支中的稻瘟灵量在1.0ug/20支和4.0ug/20支时，在卷烟主流烟气粒相物中未检测到稻瘟灵；外加到烟支中的稻瘟灵量在20ug/20支和80ug/20支时，在卷烟主流烟气粒相物中检测到稻瘟灵，并且随着外加量的增加烟气粒相物中稻瘟灵迁移量、迁移率升高。结果见表2。其中：杀菌剂迁移率(wt％)＝(主流烟气粒相物中检出量/卷烟抽吸燃烧前烟丝中残留量)×wt100％。
因此该方法可以用来检测卷烟主流烟气粒相物中杀菌剂的迁移量。
表2外加三唑酮和稻瘟灵后卷烟粒相物中的迁移量/率检测结果
注：表中/表示未检出。