一种利用羊角月牙藻检测水中全氟辛烷磺酸毒性的方法与流程

本发明涉及检测技术领域，具体是一种利用羊角月牙藻检测水中全氟辛烷磺酸毒性的方法。

背景技术：

全氟辛酸是一种全氟有机酸，具有疏水和疏油特性，在碳氧化合物表面能使氟化物具有极高的表面活性，且耐高温和耐强氧化剂，化学结构远较其他表面活性剂稳定，因此被广泛用于数百种化学工业、机械工业和日用全氟化工产品中。20世纪50年代伙计、医药品和化妆品，以及电子产品的生产和化学镀膜领域。其大量生产和使用已在全球生态系统中造成了严重的环境累计和持久性污染，成为严重威胁生态环境和人类健康的安全隐患。2005年，美国环境保护书(epa)见pfoa列为可以致癌物质。由于该类物质的极性和迁移性使其可以在不降解情况下进入海洋或地下水中，对水体中生物体构成威胁。

急性毒性数据显示，pfoa类物质半致死浓度远高于环境中的实际含量。因此，关于pfoa的低剂量、长期慢性毒性研究更具有现实意义。目前，人类对pfoa等全氟化合物有机化合物对水体重的生物体的毒性影响主要集中在大型植物、两栖动物、鱼类、蚌类和大型溞类。这些模式和非模式的生物生长周期均在两周以上，试验周期长，浪费资源。羊角月牙藻因其生长迅速，易于实验室培养，国内外均已将羊角月牙藻作为化学品、农药登记中环境试验的模式生物，广泛应用于生命科学、毒理学、环境科学和农业科学等领域。

技术实现要素：

针对上述现有技术中的不足之处，本发明旨在提供一种简便、灵敏、系统的利用羊角月牙藻检测水中全氟辛烷磺酸毒性的方法，该方法方便、快速、成本低廉。

为解决上述技术问题，本发明一种利用羊角月牙藻检测水中全氟辛烷磺酸毒性的方法，包括以下步骤：

1)羊角月牙藻的培养

羊角月牙藻用l9培养基进行培养，每2～4天转接一次，至少连续转接三次，确保其处于对数生长期，在23±1℃、4440～8880lux持续光照条件下培养；

2)生长抑制试验

将全氟辛烷磺酸设为5个浓度梯度，分别为2.0、4.0、8.0、16.0、32.0、64.0及128.0mg/l，每个梯度设置3个平行，另设1个空白对照组，在每个三角瓶中分别加入50ml配制好的2倍试验液浓度及50ml浓度为4×107cells/l的藻液，试验在23±1℃，持续光照条件下进行，采用概率单位法分别计算72herc50值；

3)不同浓度全氟辛烷磺酸对羊角月牙藻增长率的影响

利用72h生长率抑制百分率评价不同浓度全氟辛烷磺酸对羊角月牙藻生长抑制的影响，72h后，观察每个处理下羊角月牙藻藻细胞浓度，处理组，藻类生长率的抑制百分率的计算公式为：

ir是处理组藻类生长抑制百分率，μc是空白组生长率的平均值，μt是处理组生长率的平均值，

其中μ的计算公式为：

μj-i是在时间点j到时间点i之间的平均生长率，xi是在时间点i时的藻生物量，用细胞数表示为个/ml，xj是在时间点j时的藻生物量，用细胞数表示为个/ml。

优选的，在步骤3)中所述浓度为8.0、16.0及32.0mg/l。

本发明的利用羊角月牙藻检测水中全氟辛烷磺酸毒性的方法克服了目前测定水中pfoa生物毒性中周期长、操作复杂的困难，提供了一个简便、灵敏、系统的检测水中全氟辛烷磺酸(pfoa)毒性的方法，该方法方便、快速、成本低廉。

附图说明

图1为本发明中不同浓度的全氟辛烷磺酸对羊角月牙藻生长率的影响。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。

实施例1

本发明的利用羊角月牙藻检测水中全氟辛烷磺酸毒性的方法，包括以下步骤：

1)羊角月牙藻的培养

羊角月牙藻用l9培养基进行培养，每2～4天转接一次，至少连续转接三次，确保其处于对数生长期，在23±1℃、4440～8880lux持续光照条件下培养；

2)生长抑制试验

将全氟辛烷磺酸设为5个浓度梯度，分别为2.0、4.0、8.0、16.0、32.0、64.0及128.0mg/l，每个梯度设置3个平行，另设1个空白对照组，在每个三角瓶中分别加入50ml配制好的2倍试验液浓度及50ml浓度为4×107cells/l的藻液，试验在23±1℃，持续光照条件下进行，采用概率单位法分别计算72herc50值；

3)不同浓度全氟辛烷磺酸对羊角月牙藻增长率的影响

利用72h生长率抑制百分率评价不同浓度全氟辛烷磺酸对羊角月牙藻生长抑制的影响，72h后，观察每个处理下羊角月牙藻藻细胞浓度，处理组，藻类生长率的抑制百分率的计算公式为：

ir是处理组藻类生长抑制百分率，μc是空白组生长率的平均值，μt是处理组生长率的平均值，

其中μ的计算公式为：

μj-i是在时间点j到时间点i之间的平均生长率，xi是在时间点i时的藻生物量，用细胞数表示为个/ml，xj是在时间点j时的藻生物量，用细胞数表示为个/ml。

由急性致死实验筛选合适的处理剂量，结果得知：全氟辛烷磺酸(pfoa)半数抑制浓度为54.0mg/l，无可观察效应浓度noec为8.0mg/l，可观察效应浓度loec值为16.0mg/l，选择72h-ec50值以下noec值以上考察不同pfoa浓度对羊角月牙藻生长抑制率的影响。

实施例2

以浓度为16.0mg/l的全氟辛烷磺酸(pfoa)溶液来代替实施例1中的步骤3中8.0mg/l的全氟辛烷磺酸(pfoa)溶液，其他条件同实施例1；试验表明，与对照相比，16.0mg/l得全氟辛烷磺酸(pfoa)藻细胞浓度增长量稍低于空白对照组。

实施例3

以浓度为32.0mg/l的全氟辛烷磺酸(pfoa)溶液来代替实施例1中的步骤3中16.0mg/l的全氟辛烷磺酸(pfoa)溶液，其他条件同实施例1；试验表明，与对照相比，32.0mg/l得全氟辛烷磺酸(pfoa)藻细胞浓度增长量显著于空白对照组。

显然，所描述的实施例仅仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。