〖技术领域〗
本发明属于医学检测技术领域，具体涉及用于结核杆菌等抗酸性菌的染色方法。
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背景技术：
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抗酸菌染色是检查结核杆菌等抗酸菌的常用方法，ziehl-neelsen染色法(萋尼氏法)是一个古老和经典的抗酸菌染色法，效果很好，但是操作比较复杂。对于某些长期服用胺硫脲的患者，其分枝杆菌的抗酸性被破坏，因此在抗酸染色中为阴性结果，但是抗酸菌的荧光性仍保留，因此在荧光染色中呈现阳性，这也是荧光染色法阳性率高的原因之一。荧光染料常用金胺o或金胺o和罗丹明b联合使用，传统的荧光染色为三步法，分别为初染、脱色、复染。
传统三步法的缺点主要在于：①染色时间长，步骤复杂：完成一个染色需要长达20分钟，需三个步骤。金胺o染色液至少要染15分钟，脱色要2分钟，高锰酸钾溶液复染需3～4分钟；②完成染色所需试剂多：初染、脱色、复染三个步骤意味着需搭配三种试剂；③特异性差：高锰酸钾溶液对细胞和阴性菌不着色，通过覆盖细胞和阴性菌以达到遮光作用，有时甚至会覆盖部分阳性菌的荧光；复染完了之后的外观颜色很浅，特别是薄片标本时，肉眼看上去容易让人误判片子没有染上色。
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技术实现要素：
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本发明旨在提供一种染色耗时短、特异性好的抗酸性菌染色方法。
本发明采用的技术方案如下：一种抗酸性菌染色方法，包括步骤初染、脱色和复染，所述初染采用了染色液，所述脱色和复染采用了脱色复染液；
所述染色液包括成分重量比为2-4g/l的金胺o原染料、0.2-0.4％的渗透剂、40-50％的乙醇和50-60％的纯水；改良后的染色液只需初染5分钟即可达到传统三步法初染15分钟的同等效果。
所述脱色复染液包括成分重量比为30-50％的纯水、50-70％的乙醇、0.1-0.3％的表面活性剂、3-5g/l的盐酸和1-3g/l的台盼蓝染料。简化操作步骤，将三步法中的脱色液和复染液合二为一，全程染色只需二个步骤即可完成；脱色和复染合并染色只需2-3分钟，全程染色时间只需7分钟。
进一步的，所述染色液和脱色复染液制取时采用0.1g精度的电子秤称取原料，按配方需求投料后使用半自动电机搅拌1-2小时；对搅拌的溶液采用聚丙烯材质滤网过滤，最后用黑色遮光pe瓶分装储存。
本方法当中的复染染料采用了台盼蓝染料，可对细胞和阴性菌染色，同时又不会遮挡到阳性菌的荧光显色。肉眼观察时可初步判定染色是否成功，而镜下观察时阴阳分明，一目了然。
进一步的，所述染色液包括成分重量比为2g/l的金胺o原染料、0.2％的渗透剂、40％的乙醇和60％的纯水；所述脱色复染液包括成分重量比为30％的纯水、70％的乙醇、0.1％的表面活性剂、3g/l的盐酸和1g/l的台盼蓝染料。
进一步的，所述染色液包括成分重量比为4g/l的金胺o原染料、0.4％的渗透剂、50％的乙醇和50％的纯水；所述脱色复染液包括成分重量比为50％的纯水、50％的乙醇、0.3％的表面活性剂、5g/l的盐酸和3g/l的台盼蓝染料。
进一步的，所述染色液包括成分重量比为3g/l的金胺o原染料、0.3％的渗透剂、45％的乙醇和55％的纯水；所述脱色复染液包括成分重量比为40％的纯水、60％的乙醇、0.2％的表面活性剂、4g/l的盐酸和2g/l的台盼蓝染料。
本方法通过在染色液中添加了渗透剂以加强其着色力，使其上色迅速而牢固；脱色复染液中使用了乙醇作为溶剂，盐酸起到脱色作用，台盼蓝染料可对细胞和阴性菌等背景物质染色，并起到遮光作用，其中添加了一些表面活性剂，使各组分稳定储存且不影响各自的作用；实现在一种试剂上脱色复染同时进行的功能。
进一步的，所述步骤初染是指将需要染色的涂片固定后加入染色液，室温染色5分钟，用清水清洗。
进一步的，所述步骤脱色和复染是指用脱色复染液作用2分钟，用清水清洗。
进一步的，所述抗酸性菌染色方法还包括步骤检测，所述检测是指涂片晾干后，用含有紫外光源的荧光显微镜检查。
进一步的，所述紫外光源为波长为350-490nm的紫蓝光激发滤光片组。
本发明提供的抗酸性菌染色方法的有益效果在于：本方法当中染色液的改良以及脱色复染液的研究有效地提高了结果的准确性，同时缩短了整个染色的步骤和时间，大大减少了一线工作人员的工作量，对于更高效更高质量地发现传染源、确定诊断和化疗方案、考核疗效、评价防治效果等均具有重要意义。
〖具体实施方式〗
本说明书中公开的所有特征，或公开的所有方法或过程中的步骤，除了互相排斥的特征和/或步骤以外，均可以以任何方式组合。
本说明书(包括任何附加权利要求、摘要)中公开的任一特征，除非特别叙述，均可被其他等效或具有类似目的的替代特征加以替换。即，除非特别叙述，每个特征只是一系列等效或类似特征中的一个例子而已。
实施例1
一种抗酸性菌染色方法，包括步骤初染、脱色和复染，所述初染采用了染色液，所述脱色和复染采用了脱色复染液；所述染色液包括成分重量比为2g/l的金胺o原染料、0.2％的渗透剂、40％的乙醇和60％的纯水；所述脱色复染液包括成分重量比为30％的纯水、70％的乙醇、0.1％的表面活性剂、3g/l的盐酸和1g/l的台盼蓝染料。
所述染色液和脱色复染液制取时采用0.1g精度的电子秤称取原料，按配方需求投料后使用半自动电机搅拌1小时；对搅拌的溶液采用聚丙烯材质滤网过滤，最后用黑色遮光pe瓶分装储存。
抗酸性菌染色方法的具体步骤，
初染:将需要染色的涂片固定后加入染色液，室温染色5分钟，用清水清洗。
脱色和复染:用脱色复染液作用2分钟，用清水清洗。
检测：涂片晾干后，用含有紫外光源的荧光显微镜检查，所述紫外光源为波长为350-490nm的紫蓝光激发滤光片组。
实施例2
一种抗酸性菌染色方法，包括步骤初染、脱色和复染，所述初染采用了染色液，所述脱色和复染采用了脱色复染液；所述染色液包括成分重量比为4g/l的金胺o原染料、0.4％的渗透剂、50％的乙醇和50％的纯水；所述脱色复染液包括成分重量比为50％的纯水、50％的乙醇、0.3％的表面活性剂、5g/l的盐酸和3g/l的台盼蓝染料。
所述染色液和脱色复染液制取时采用0.1g精度的电子秤称取原料，按配方需求投料后使用半自动电机搅拌2小时；对搅拌的溶液采用聚丙烯材质滤网过滤，最后用黑色遮光pe瓶分装储存。
抗酸性菌染色方法的具体步骤同实施例1。
实施例3
一种抗酸性菌染色方法，包括步骤初染、脱色和复染，所述初染采用了染色液，所述脱色和复染采用了脱色复染液；所述染色液包括成分重量比为3g/l的金胺o原染料、0.3％的渗透剂、45％的乙醇和55％的纯水；所述脱色复染液包括成分重量比为40％的纯水、60％的乙醇、0.2％的表面活性剂、4g/l的盐酸和2g/l的盐基染料。
所述染色液和脱色复染液制取时采用0.1g精度的电子秤称取原料，按配方需求投料后使用半自动电机搅拌1.5小时；对搅拌的溶液采用聚丙烯材质滤网过滤，最后用黑色遮光pe瓶分装储存。
抗酸性菌染色方法的具体步骤同实施例1。
实施例4
一种抗酸性菌染色方法，包括步骤初染、脱色和复染，所述初染采用了染色液，所述脱色和复染采用了脱色复染液；所述染色液包括成分重量比为2g/l的金胺o原染料、0.2％的渗透剂、48％的乙醇和52％的纯水；所述脱色复染液包括成分重量比为35％的纯水、65％的乙醇、0.2％的表面活性剂、5g/l的盐酸和2g/l的台盼蓝染料。
所述染色液和脱色复染液制取时采用0.1g精度的电子秤称取原料，按配方需求投料后使用半自动电机搅拌1小时；对搅拌的溶液采用聚丙烯材质滤网过滤，最后用黑色遮光pe瓶分装储存。
抗酸性菌染色方法的具体步骤同实施例1。
实施例5
一种抗酸性菌染色方法，包括步骤初染、脱色和复染，所述初染采用了染色液，所述脱色和复染采用了脱色复染液；所述染色液包括成分重量比为3g/l的金胺o原染料、0.4％的渗透剂、42％的乙醇和58％的纯水；所述脱色复染液包括成分重量比为45％的纯水、55％的乙醇、0.3％的表面活性剂、3g/l的盐酸和3g/l的台盼蓝染料。
所述染色液和脱色复染液制取时采用0.1g精度的电子秤称取原料，按配方需求投料后使用半自动电机搅拌2小时；对搅拌的溶液采用聚丙烯材质滤网过滤，最后用黑色遮光pe瓶分装储存。
抗酸性菌染色方法的具体步骤同实施例1。
以上实施例仅为充分公开而非限制本发明，凡基于本发明的创作主旨、未经创造性劳动的等效技术特征的替换，应当视为本申请揭露的范围。