一种基于组织自荧光强度减少作为检测恶性实体瘤标志的检测方法及其应用与流程

本发明涉及检测组织的生物自荧光，具体是基于检测组织特定波长自荧光强度的减少，作为检测恶性实体瘤的标志的检测方法及其应用。

背景技术：

恶性肿瘤是造成中国以及全世界死亡的最主要原因之一。对于这些重大疾病的诊断的研究，具有极其重大的科学价值和社会经济意义。尽管前几十年的生物医学研究使我们对于重大疾病机制的认识有了重大的发展，但是我们对于诊断和的把握还十分缺乏。以肝癌举例，对于需要手术切除的患者，对于癌症病灶部位的判断不是特别准确，时效长等缺点。从而导致病灶切除不完全，或者切除过多的正常组织。

因此，发明一种简便、实时、无创的恶性实体瘤检测方法，具有重大的社会经济意义以及临床价值。

技术实现要素：

本发明人的目的是突破现有技术的难题，提出一种可以用于活体实时检测恶性实体瘤的新型检测方法和应用。

本发明发现恶性实体瘤的组织自荧光的光强度显著低于相应正常组织的自荧光，以此作为检测组织中哪些部分为恶性实体瘤。本方法发现组织特定波长自荧光的减少作为恶性实体瘤的标志。

基于本发现，也可以建立在临床上快速诊断恶性实体瘤位置和大小的检测方法和仪器。

本发明的具体技术方案是：

一种基于组织自荧光强度减少作为检测恶性实体瘤标志的检测方法，包括以下步骤：

(1)运用单光子400-700nm激发光或者双光子700-1000nm激发光照射被检测者组织，以激发出该组织的自荧光。

(2)检测组织发出的波长在420-800nm范围内的自荧光强度；

(3)比较步骤(1)中该组织各个部位的自荧光强度；

(4)并将步骤(1)的自荧光强度与已知的该部位的恶性实体瘤、非实体瘤组织自荧光强度结果进行对比；

(5)根据上述对比结果，完成基于组织自荧光强度作为检测恶性实体瘤的生物标志物的检测方法。组织所发出的波长为420-800nm自荧光光强度，与该部位组织是恶性实体瘤的可能性呈负相关关系：自荧光光强度较高的区域为正常组织，而自荧光光强度越低的部分是恶性实体瘤的可能性越大。

进一步的，所述利用激发光激发肺部组织自荧光的方式包括使用普通的连续光输出进行激发的方式、使用电调制进行调制激发的方式或者使用脉冲激光进行激发的方式中的至少一种。

所述组织包含胸腺、淋巴结、肾、肝、前列腺等器官和组织。优选的组织和器官是：胸腺、淋巴结。

进一步的，所述肺部组织可以活体直接检测，也可以对离体样本检测。

进一步的，本发明的检测方法中，激发光的波长优选为420-680nm的范围内，更优选为460-643nm的范围内。

进一步的本发明的检测方法中，所检测的自发荧光的波长优选为440-750nm的范围内，更优选为450-741nm的范围内。

本发明还提供了一种基于组织自荧光强度减少作为检测恶性实体瘤标志的应用。

本发明利用组织自荧光强度，检测患者恶性实体瘤发病以及恶性实体瘤区域，为临床检测恶性实体瘤建立基础，可以极大的降低恶性实体瘤的检测时间，使医生可以在手术时更准确的判断恶性实体瘤区域，同时比传统染色的诊断方法更快高效的诊断实体瘤，使病人可以得到及时治疗。同时，本发明提供了检测方法，作为一种快速、简易的恶性实体瘤检测方法。

附图说明

图1：激发光488nm激发样本淋巴结自荧光，接受波长范围500-530nm的接受光。自荧光改变图。

图2：激发光635nm激发样本淋巴结自荧光，接受波长范围645-700nm的接受光。自荧光改变图。

图3：激发光488nm激发样本胸腺上皮组织自荧光，接受波长范围500-530nm的接受光。自荧光改变图。

图4：激发光635nm激发样本胸腺上皮组织自荧光，接受波长范围645-700nm的接受光。自荧光改变图。

具体实施方式

下面将通过具体描述，对本发明作进一步的说明。

除非另有限定，本文中所使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属技术领域的普通技术人员通常理解相同的含义。

本发明中使用的术语“自荧光”，其含义为生物分子在受到适当波长的激发光照射时，吸收激发光的能量进入激发态，再退出激发态从而发射出比激发光波长更长的光的现象中，所述波长比激发光波长更长的光。

本发明中使用的术语“激发光”，其含义为能够激发生物分子发生自发荧光现象的光，其波长应比自发荧光短

发明人进行了一系列实验，确定了组织自荧光强度与恶性实体瘤之间的负相关关系。

一、实验方法：

取同一患者，恶性实体瘤或者非实体瘤部位的组织，使用激光共聚焦显微镜对组织样本进行实时成像。

二、实验结果和讨论

图1：激发光488nm激发样本淋巴结组织自荧光，接受波长范围500-530nm的接受光。淋巴瘤区域的自荧光显著低于淋巴结组织。

图2：激发光635nm激发样本肺部组织自荧光，接受波长范围645-700nm的接受光。淋巴瘤区域的自荧光显著低于淋巴结组织。

图3：激发光488nm激发样本胸腺上皮组织自荧光，接受波长范围500-530nm的接受光。胸腺上皮肿瘤区域的自荧光显著低于正常胸腺上皮组织。

图4：激发光635nm激发样本胸腺上皮组织自荧光，接受波长范围645-700nm的接受光。胸腺上皮肿瘤区域的自荧光显著低于正常胸腺上皮组织。

由以上实验可以得出，恶性实体瘤的自荧光显著低于相应正常组织。

本发明基于这一发现，建立了一种活体实时检测恶性实体瘤的方法。方法包括以下步骤：

(1)运用单光子400-700nm激发光或者双光子700-1000nm激发光照射被检测者组织，以激发出该组织的自荧光。

(2)检测组织发出的波长在420-800nm范围内的自荧光强度；

(3)比较步骤(1)中该组织各个部位的自荧光强度；

(4)并将步骤(1)的自荧光强度与已知的该部位的恶性实体瘤、非恶性实体瘤组织自荧光强度结果进行对比；

(5)根据上述对比结果，完成基于组织自荧光强度作为检测恶性实体瘤的生物标志物的检测方法。组织所发出的波长为420-800nm自荧光光强度，与该部位组织是恶性实体瘤的可能性呈负相关关系：自荧光光强度较高的区域为正常组织，而自荧光光强度越低的部分是恶性实体瘤的可能性越大。

本发明的利用激发光激发皮下自发荧光的方式包括使用普通的连续光输出进行激发的方式、使用电调制进行调制激发的方式或者使用脉冲激光进行激发的方式中的至少一种。

本发明的利用激发光激发肺部组织自荧光的方式包括使用普通的连续光输出进行激发的方式、使用电调制进行调制激发的方式或者使用脉冲激光进行激发的方式中的至少一种。

所述组织包含胸腺、淋巴结、肾、肝、前列腺等器官和组织。优选的组织和器官是：胸腺、淋巴结。

本发明的方法可以活体直接检测，也可以对离体样本检测。

本发明的的检测方法中，激发光的波长优选为420-680nm的范围内，更优选为460-643nm的范围内。

进一步的本发明的检测方法中，所检测的自发荧光的波长优选为440-750nm的范围内，更优选为450-741nm的范围内。

本发明的活体实时检测恶性实体瘤的方法，根据组织自荧光的变化程度与相应恶性实体瘤发病呈负相关的规律，检测被实验对象的恶性实体瘤情况。

应该理解的是，本发明的活体实时检测恶性实体瘤的方法的实施并不依赖于检测设备。可以使用任何能够发出激发光并且能够对自荧光进行检测的设备来实施本发明的活体实时检测恶性实体瘤的方法。

本领域的技术人员应当明了，尽管为了举例说明的目的，本文描述了本发明的具体实施方式，但可以对其进行各种修改而不偏离本发明的精神和范围。因此，本发明的具体实施方式和实施例不应当视为限制本发明的范围。本发明仅受所附权利要求的限制。本申请中引用的所有文献均完整地并入本文作为参考。

本发明公开了一种基于检测组织自荧光水平作为检测恶性实体瘤发病的生物标志物的检测方法及其应用。恶性实体瘤区域的特定波长范围的自荧光强度显著低于相应正常组织。本发明首次提出用组织自荧光强度来检测实体瘤的方法和应用。该检测恶性实体瘤发病的方法简便、实时、可以在临床使用，解决了目前诊断恶性实体瘤只能在医院病理科用染色方法的局限性，为恶性实体瘤诊断提供了很大的便利。