基于荧光标记的o1群小川型霍乱弧菌免疫层析试纸条的制作方法
【专利摘要】本发明涉及一种基于低噪声激发式荧光标记的O1群小川型霍乱弧菌免疫层析检测试纸条及制备方法与应用，本发明采用低噪声激发式荧光染料作为标记，采用免疫层析技术，制备靶向于O1群小川型霍乱弧菌的免疫层析试纸条，检测时，采用专用便携式低噪声激发式荧光扫描仪分别扫描质控线和检测线，以检测线荧光强度检测值实现样本的定性及定量检测，该试纸条适用于食品及病理样本中O1群小川型霍乱弧菌即时检测，本发明具有快速、高敏、兼顾定性及精准定量及便携的特点。
【专利说明】基于黄光标巧的01群小川型霍乱弧菌免疫层析试纸条
【技术领域】
[0001] 本发明属于医学、食品安全检测领域，具体地说设及一种基于低噪声激发式巧光 染料标记的01群小川型霍乱弧菌免疫层析试纸条及其制备方法与应用。
【背景技术】
[0002] 01群小川型霍乱弧菌作为致病菌检测的一项重要指标，在公共卫生、食品卫生、畜 牧兽医和出入境检验检疫中均有重要的意义，同时也对01群小川型霍乱弧菌的快速及高 精度的定量检测提出了更高的要求。为探求快速、准确、高灵敏度、易操作且能够定量的检 测方法，世界各国学者进行了大量研究，从W传统方法为基础发展到W免疫学、分子生物学 为基础的快速检测方法，并在实践中不断取得新进展。
[0003] 免疫层析技术是一项有效结合了层析法卓越分离能力和免疫反应高度特异性的 新型免疫检测技术，当前在疾病快速诊断、环境污染物分析及致病生物因子检定等领域得 到广泛应用。其原理是将特异抗原或抗体固定于硝酸纤维素膜的某一区带，当该干燥的硝 酸纤维素膜一端浸入样品后，由于毛细管作用，样品将沿着该膜向前移动，当迁移至交联标 记抗体的特定区域时，样品中相应的抗原即与该抗体发生特异性结合形成抗原-标记抗体 复合物，经标记物的显色、发光或电化学反应而使该区域显示一定的信号，从而实现特异性 免疫诊断。常用的标记物包括生色型探针（包括胶体金、胶体碳、着色微球等）和巧光分子 (如有机巧光染料、量子点、稀±元素配合物、上转磯光颗粒等）。
[0004] 然而上述的标记物却存在灵敏度有限且无法实现精确定量检测等缺陷，进而限制 了免疫层析技术的广泛应用。如现有技术中常见的利用酶标记催化生色底物的酶促反应 而显色，可用于抗原或抗体的直接检测，将该方法应用于食品中01群小川型霍乱弧菌的检 巧。，通过单克隆抗体捕捉特异性蛋白可W大大降低假阳性率，但是该方法的灵敏度较分子 生物学方法低，且必须经过增菌筛选纯培养步骤，因此难W在短时间内得到检测结果。
[0005] 对于现有的胶体金免疫层析技术，通过胶体金等纳米颗粒的聚集反应而显色，从 而实现结果判定。虽然该种方法具有便捷、快速、准确和无污染等特点被广泛应用于医学 检测和临床诊断，在病原体检测方面，其敏感性、特异性具有其他免疫学方法无可比拟的优 势，且无需特殊仪器设备，对检测人员的专业要求低，有良好的基层应用开发前景。但该种 方法中存在标记物的稳定性较差，颜色单一，灵敏度较低，受基质的背景干扰大等缺陷，且 只能定性检测，不能做到精确定量检测，上述标记灵敏度有限且无法实现精确定量，限制了 免疫层析技术的应用。
[0006] 另外，现有免疫层析技术一直主要用于对蛋白类的检测，对于微生物的检测则所 见甚少，同时更难W实现微生物的定量检测，对于快速检测致病菌而言，其应用受到极大的 限制。
【发明内容】
[0007] 为此，本发明所要解决的技术问题在于现有技术中难于快速定性或定量检测01 群小川型霍乱弧菌的问题，进而提供一种基于低噪声激发式巧光标记的01群小川型霍乱 弧菌免疫层析试纸条，并进一步公开了其应用。
[000引为解决上述技术问题，本发明提供的一种基于低噪声激发式巧光标记的01群小 川型霍乱弧菌免疫层析试纸条，包括：
[0009] 底板W及沿所述底板的长度方向上依次粘附在所述底板上的样品垫、结合垫、抗 体承载膜和吸水垫，且所述样品垫、结合垫、抗体承载膜和吸水垫之间，依次与且仅与相邻 部位相接触且部分重叠；所述抗体承载膜粘附于所述底板的中间部位，其上设置有相间隔 的检测线和质控线，所述检测线靠近所述结合垫，所述质控线靠近所述吸水垫；
[0010] 所述结合垫上喷涂有低噪声激发式巧光染料标记的与01群小川型霍乱弧菌特异 性结合的单克隆抗体；
[0011] 所述检测线由可与所述01群小川型霍乱弧菌特异性结合的多克隆抗体涂层形 成；所述质控线由与所述01群小川型霍乱弧菌W及所述可与01群小川型霍乱弧菌特异性 结合的多克隆抗体均无关的抗体涂层形成。
[0012] 所述的基于低噪声激发式巧光标记的01群小川型霍乱弧菌免疫层析试纸条，所 述结合垫上所述的可与01群小川型霍乱弧菌特异性结合的单克隆抗体为鼠抗01群小川型 霍乱弧菌单克隆抗体（购自Abeam公司）。
[0013] 所述的基于低噪声激发式巧光标记的01群小川型霍乱弧菌免疫层析试纸条，所 述检测线上的所述可与01群小川型霍乱弧菌特异性结合的多克隆抗体为兔抗01群小川型 霍乱弧菌（购自Abeam公司）。
[0014] 所述的基于低噪声激发式巧光标记的01群小川型霍乱弧菌免疫层析试纸条，形 成所述质控线的抗体为羊抗鼠IgG多克隆抗体（购自北京华大蛋白质公司）。
[0015] 所述的基于低噪声激发式巧光标记的01群小川型霍乱弧菌免疫层析试纸条，所 述的低噪声激发式巧光染料为发射波长为650-1100nm。优选的，所述的基于低噪声激发式 巧光标记的染料为发射波长为777nm，发射光波长为790nm的巧光分子。
[0016] 所述的基于低噪声激发式巧光标记的01群小川型霍乱弧菌免疫层析试纸条，所 述的基于低噪声激发式巧光标记的染料为DyLi曲巧00 (购自Thermofisher公司）。
[0017] 所述的基于低噪声激发式巧光标记的01群小川型霍乱弧菌免疫层析试纸条，所 述质控线与所述检测线平行设置，所述检测线和所述质控线间距0. 5cm。
[001引本发明提供了一种制备所述的基于低噪声激发式巧光标记的01群小川型霍乱弧 菌免疫层析试纸条的方法，包括如下步骤：
[0019] A)取WPBS(PH为7. 4)缓冲液稀释10倍的所述低噪声激发式巧光染料，所述染料 与01群小川型霍乱弧菌单克隆抗体按1:2质量比混合均匀，室温条件下避光反应2小时， 随后将所得的标记产物放入含有PBS缓冲液的透析袋中，4°C透析4小时，向所述标记好的 标记产物中添加终浓度为1. 5% BSA、0. 15% Tween20和0. 15%。叠氮化钢，4°C保存，备用；
[0020] B)在所述结合垫上喷涂W层析缓冲液稀释1000倍后的上述步骤A)中的所述标记 产物，然后室温风干，备用；
[002U C)使用PH为7. 4的含5% BSA，0. 1 % Tween 20的PBS缓冲液喷涂在所述样品垫 上，室温风干后，备用；
[0022] D)分别取所述01群小川型霍乱弧菌多克隆抗体和所述与01群小川型霍乱弧菌W 及可与01群小川型霍乱弧菌特异性结合的多克隆抗体均无关的抗体用划线机在所述抗体 承载膜上划所述检测线和所述质控线，室温风干，备用；
[0023] 巧将上述步骤获得的所述样品垫、所述结合垫、所述抗体承载膜和所述吸水垫沿 所述底板的长度方向上依次粘附，然后切割成试纸条，即得；
[0024] 本发明提供了一种由上述的制备方法制得的基于低噪声激发式巧光标记的01群 小川型霍乱弧菌免疫层析试纸条在定性及定量检测01群小川型霍乱弧菌领域中的用途。
[0025] 本发明提供了一种利用所述的基于低噪声激发式巧光标记的01群小川型霍乱弧 菌免疫层析试纸条定性检测01群小川型霍乱弧菌的方法，包括如下步骤：
[0026] a) W含5% BSA，0. 1 % Tween 20的PBS (抑为7. 4)缓冲液稀释处理待测样品，取 洗脱液超声破菌后作为待检样，用所述的试纸条进行免疫层析；
[0027] b)巧光扫描所述检测线和所述质控线，分别测定所述检测线和所述质控线区域的 巧光强度，若所述质控线区域出现巧光发射峰，则表明该试纸条有效，反之则无效；若所述 检测线区域同时出现巧光发射峰则为阳性结果，反之则为阴性。
[002引所述的检测01群小川型霍乱弧菌的方法，还包括制备标准曲线及定量检测的步 骤；其中：
[0029] 所述制备标准曲线的步骤包括：取01群小川型霍乱弧菌菌株（实验室分离株）配 制成1-100倍梯度浓度的系列标准品；并将上述浓度系列标准品超声破菌后分别用所述的 试纸条进行免疫层析，巧光扫描所述检测线和所述质控线，分别测定所述检测线和所述质 控线区域的巧光强度，制作抗原浓度与巧光强度比之间关系的标准曲线，并拟合方程；
[0030] 所述定量检测的步骤包括；取待测样品W所述的试纸条进行免疫层析检测，利用 上述标准曲线及工作方程求得所述01群小川型霍乱弧菌浓度。
[0031] 本发明的上述技术方案相比现有技术具有W下优点：
[0032] (1)本发明所述的基于低噪声激发式巧光标记的01群小川型霍乱弧菌免疫层析 试纸条，其发射光谱位于低噪声激发式区域（波长为650-1100nm)的低噪声激发式巧光探 针具有较高的信噪比，并由此保障了其高检测灵敏度，同时由于生物基体极少在低噪声激 发式光谱区自发巧光，使得基于此类探针标记的分析检测免受背景巧光干扰；因散射光强 度与波长的四次方成反比，发射光位于长波区的低噪声激发式巧光探针受其干扰小。与常 用的胶体金免疫层析试纸条相比，基于低噪声激发式巧光染料标记的免疫层析体系对祀标 菌的灵敏度提高约10倍；如01群小川型霍乱弧菌胶体金免疫层析试纸条的最低检出限为 l*10 4CFU/mU而本发明中基于低噪声激发式巧光染料标记的01群小川型霍乱弧菌免疫层 析试纸条的最低检出限为l*l〇3CFU/mL ;
[0033] (2)本发明所述的基于低噪声激发式巧光标记的01群小川型霍乱弧菌免疫层析 试纸条定性检测01群小川型霍乱弧菌的方法具有便携的优势，适用于现场、即时、快速检 巧。，本方法所设的免疫层析试纸条及低噪声激发式巧光扫描仪均属于便携可移动装置，且 整个检测过程可在45min内完成，适用于现场、即时、快速检测，相对于传统培养法5-6天的 检测周期及繁琐的培养基配制等过程具有显著的时效性优势；相对于PCR及实时巧光定量 PCR法等分子生物学方法则在仪器的检测速度、便携性及现场适用性上呈现明显优势；
[0034] (3)本发明所述的基于低噪声激发式巧光标记的01群小川型霍乱弧菌免疫层析 试纸条定量检测01群小川型霍乱弧菌的方法可对所述01群小川型霍乱弧菌进行定量检 ，传统的免疫层析法依赖胶体金颗粒的聚集效应而生色w判读结果，其颜色深浅虽与样 品中祀标菌的浓度存在一定的数量关系，但无法进行准确定量，而本发明将低噪声激发式 巧光染料标记于特异性抗体上，检测线的巧光强度直接体现了与捕获分子相结合的祀标菌 的量，加之质控线不随样本改变的巧光强度作为内参，通过扫描检测线及质控线上的巧光 强度、计算比值，并与标准曲线比较即可得出检样中祀标菌的浓度。
【专利附图】
【附图说明】
[0035] 为了使本发明的内容更容易被清楚的理解，下面根据本发明的具体实施例并结合 附图，对本发明作进一步详细的说明，其中
[0036] 图1是实施例1中所述的基于低噪声激发式巧光标记的01群小川型霍乱弧菌免 疫层析试纸条的示意图；
[0037] 图2是实施例2中所述的01群小川型霍乱弧菌低噪声激发式巧光检测图；
[003引图3是实施例3中所述的01群小川型霍乱弧菌的标准曲线。
[0039] 图中附图标记表示为；1-样品垫，2-结合垫，3-硝酸纤维素膜，4-检测线，5-质控 线，6-吸水垫，7-底板。
【具体实施方式】
[0040] 实施例1
[0041] 本实施例所述的基于低噪声激发式巧光标记的01群小川型霍乱弧菌免疫层析试 纸条如图1所示，其包括，底板7 W及沿所述底板7的长度方向上依次粘附在所述底板上的 样品垫1、结合垫2、抗体承载膜3和吸水垫6 ;且所述样品垫1、结合垫2、抗体承载膜3和 吸水垫6之间，依次与且仅与相邻部位相接触且部分重叠；所述抗体承载膜3上粘附于所述 底板7的中间部位，其上设置有相间隔的检测线4的质控线5,所述检测线4靠近所述结合 垫2,所述质控线5靠近所述吸水垫6 ;所述质控线4与所述检测线5平行设置，所述检测线 5和所述质控线4间距0. 5畑1。
[0042] 所述结合垫2上喷涂有低噪声激发式巧光染料标记的可与01群小川型霍乱弧菌 特异性结合的单克隆抗体为鼠抗01群小川型霍乱弧菌单克隆抗体；所述检测线4由可与所 述01群小川型霍乱弧菌特异性结合的多克隆抗体兔抗01群小川型霍乱弧菌多克隆抗体涂 层形成；所述质控线5由与所述01群小川型霍乱弧菌W及所述可与01群小川型霍乱弧菌 特异性结合的多克隆抗体均无关的羊抗鼠IgG多克隆抗体（购自北京华大蛋白质公司）涂 层形成。
[0043] 所述的基于低噪声激发式巧光标记的染料为发射波长为777nm，发射光波长为 790nm的巧光分子的N服活化的低噪声激发式巧光染料DyLi曲巧00作为巧光分子。
[0044] 上述的基于低噪声激发式巧光标记的01群小川型霍乱弧菌免疫层析试纸条的制 备方法，包括如下步骤：
[0045] A)取W PBS (PH为7. 4)缓冲液稀释10倍的所述低噪声激发式巧光染料，所述染料 与01群小川型霍乱弧菌单克隆抗体按1:2质量比混合均匀，室温条件下避光反应2小时， 随后将所得的标记产物放入含有PBS缓冲液的透析袋中，4°C透析4小时，向所述标记好的 标记产物中添加终浓度为1. 5% BSA、0. 15% Tween20和0. 15%。叠氮化钢，4°C保存，备用；
[0046] B)在所述结合垫2上喷涂W层析缓冲液稀释1000倍后的上述步骤A)中的所述标 记产物，然后室温风干，备用；
[0047] C)使用PH为7. 4的含5% BSA，0. 1 % Tween 20的PBS缓冲液喷涂在所述样品垫 1上，室温风干后，备用；
[0048] D)分别取所述01群小川型霍乱弧菌多克隆抗体和所述与01群小川型霍乱弧菌W 及可与01群小川型霍乱弧菌特异性结合的多克隆抗体均无关的抗体用划线机在所述抗体 承载膜3上划所述检测线4和所述质控线5,室温风干，备用；
[0049] 巧将上述步骤获得的所述样品垫1、所述结合垫2、所述抗体承载膜3和所述吸水 垫6沿所述底板7的长度方向上依次粘附，具体为在底板7中间先铺设抗体承载膜3,然后 在抗体承载膜3的与质控线5相临近的一端铺吸水垫6,使吸水垫6与抗体承载膜3部分重 叠，然后在抗体承载膜3的与所述检测线4相临近的一端铺所述结合垫2,使所述抗体承载 膜3与所述结合垫2的一端部分重叠，随后在所述结合垫2的另一端再部分重叠的铺设所 述样品垫1，最后切割成0. 5cm宽，即得试纸条。
[0050] 实施例2
[0化1] 本实施例提供了一种利用上述的基于低噪声激发式巧光标记的01群小川型霍乱 弧菌免疫层析试纸条进行定性检测01群小川型霍乱弧菌的方法，包括如下步骤：
[005引 a)取海颇样品25g，用225血含5% BSA，0. 1 % Tween 20的PBS (抑为7. 4)缓冲 液稀释样品，取上清液1ml，超声破菌，直径3mm探头，工作5s，休息5s，40 %能量（由宁波先 倡电子科技有限公司提供的超声细胞粉碎机，型号为XC-CD型），共计30次循环，吸取所述 处理后的样品50 y L滴加到样品垫1上，待吸收干后再滴加50 y L上述PBS缓冲液；
[0化3] b)室温放置lOmin后，用便携式低噪声激发式巧光扫描仪（购自北京博润福得科 技发展有限公司）分别测定所述检测线4和所述质控线5区域的巧光强度，若所述质控线 5区域出现巧光发射峰，则表明该试纸条有效，反之则无效；若所述检测线4区域和质控线 5区域同时出现巧光发射峰则为阳性结果，反之则为阴性，附图2给出了对上述样品的定性 检测结果。可见，本发明所述试纸条可有效对所述01群小川型霍乱弧菌进行定性的检测。
[0054] 实施例3
[0055] 本实施例还提供了一种利用所述的基于低噪声激发式巧光标记的01群小川型霍 乱弧菌免疫层析试纸条定量检测01群小川型霍乱弧菌的方法：
[0056] 制备标准曲线：取l*l〇6CFU/mL的01群小川型霍乱弧菌纯菌（本实验室分离株）， 用含5% BSA，0. 1% Tween 20的PBS (抑7. 4)稀释液将所述纯菌进行倍数系列稀释，制成 0. 5*l〇6CFU/mL、l*l〇5c即/mL、0. 5*l〇5CFU/mL、l*l〇4c即/mL、0. 5*l〇4CFU/mL、l*l〇3CFU/mL、 l*102CFU/mL的样品，超声破菌，直径3mm探头，工作5s，休息5s，40%能量（由宁波先倡电 子科技有限公司提供的超声细胞粉碎机，型号为XC-CD型），共计30次循环，吸取所述处理 后的样品50 y L滴加到样品垫1上，待吸收干后再滴加50 y L上述PBS缓冲液；室温静置10 分钟，将上述试纸条放入便携式低噪声激发式巧光扫描仪（由北京博润福得科技发展有限 公司提供）中读数。
[0化7] 上述系列稀释的01群小川型霍乱弧菌标准品分别进行检测，扫描获得检测线4 和质控线5的巧光值，同时出现检测区域巧光峰和质控区域巧光峰方表明反应正常。每个 稀释度样本平行测量两次，取平均值作为测量值，检测结果见表1，W该值对相应的样品浓 度制作标准工作曲线，如图3所示，并拟合得适用的标准曲线，y = 1.0247X+2.9584, R2 = 0.9745。
[0化引表1 ;不同浓度01群小川型霍乱弧菌标准品对应检测结果
[0059]
【权利要求】
1. 一种基于低噪声激发式荧光标记的01群小川型霍乱弧菌免疫层析试纸条，其特征 在于，包括： 底板（7)以及沿所述底板（7)的长度方向上依次粘附在所述底板上的样品垫（1)、结合 垫（2)、抗体承载膜（3)和吸水垫（6)，且所述样品垫（1)、结合垫（2)、抗体承载膜（3)和吸 水垫（6)之间，依次与且仅与相邻部位相接触且部分重叠；所述抗体承载膜（3)粘附于所述 底板（7)的中间部位，其上设置有相间隔的检测线（4)和质控线（5)，所述检测线（4)靠近 所述结合垫（2)，所述质控线（5)靠近所述吸水垫（6); 所述结合垫（2)上喷涂有低噪声激发式荧光染料标记的可与所述01群小川型霍乱弧 菌特异性结合的单克隆抗体； 所述检测线（4)由可与所述01群小川型霍乱弧菌特异性结合的多克隆抗体涂层形成； 所述质控线（5)由与所述01群小川型霍乱弧菌以及所述可与01群小川型霍乱弧菌特异性 结合的多克隆抗体均无关的抗体涂层形成。
2. 根据权利要求1所述的基于低噪声激发式荧光标记的01群小川型霍乱弧菌免疫层 析试纸条，其特征在于，所述结合垫（2)上喷涂的所述可与01群小川型霍乱弧菌特异性结 合的单克隆抗体为鼠抗01群小川型霍乱弧菌单克隆抗体。
3. 根据权利要求1或2所述的基于低噪声激发式荧光标记的01群小川型霍乱弧菌免 疫层析试纸条，其特征在于，形成所述检测线（4)的所述可与01群小川型霍乱弧菌特异性 结合的多克隆抗体为兔抗01群小川型霍乱弧菌。
4. 根据权利要求1-3任一所述的基于低噪声激发式荧光标记的01群小川型霍乱弧菌 免疫层析试纸条，其特征在于，形成所述质控线（5)的抗体为羊抗鼠 IgG多克隆抗体。
5. 根据权利要求1-4任一所述的基于低噪声激发式荧光标记的01群小川型霍乱弧菌 免疫层析试纸条，其特征在于，所述的基于低噪声激发式荧光的染料为激发波长为777nm， 发射波长为790nm的焚光分子。
6. 根据权利要求5所述的基于低噪声激发式荧光标记的01群小川型霍乱弧菌免疫层 析试纸条，其特征在于，所述的低噪声激发式荧光染料为NHS活化的低噪声激发式荧光染 料 DyLight800。
7. -种制备权利要求1-6任一所述的基于低噪声激发式荧光标记的01群小川型霍乱 弧菌免疫层析试纸条的方法，其特征在于，包括如下步骤： A) 取以PH为7. 4的PBS缓冲液稀释10倍的所述低噪声激发式荧光染料，所述染料与 01群小川型霍乱弧菌单克隆抗体按1:2质量比混合均匀，室温条件下避光反应2小时，随后 将所得的标记产物放入含有PBS缓冲液的透析袋中，4°C透析4小时，向所述标记好的标记 产物中添加终浓度为1. 5% BSA、0. 15% Tween20和0. 15%。叠氮化钠，4°C保存，备用； B) 在所述结合垫（2)上喷涂以层析缓冲液稀释1000倍后的上述步骤A)中的所述标记 产物，然后室温风干，备用； C) 使用PH为7. 4的含5% BSA，0. 1% Tween 20的PBS缓冲液喷涂在所述样品垫（1) 上，室温风干后，备用； D) 分别取所述01群小川型霍乱弧菌多克隆抗体和所述与01群小川型霍乱弧菌以及可 与01群小川型霍乱弧菌特异性结合的多克隆抗体均无关的抗体用划线机在所述抗体承载 膜（3)上划所述检测线（4)和所述质控线（5)，室温风干，备用； E)将上述步骤获得的所述样品垫（1)、所述结合垫（2)、所述抗体承载膜（3)和所述吸 水垫（6)沿所述底板（7)的长度方向上依次粘附，然后切割成试纸条，即得。
8. 权利要求1-6任一所述的基于低噪声激发式荧光标记的01群小川型霍乱弧菌免疫 层析试纸条在定性及定量检测01群小川型霍乱弧菌领域中的用途。
9. 一种利用权利要求1-6任一所述的基于低噪声激发式荧光标记的01群小川型霍乱 弧菌免疫层析试纸条检测01群小川型霍乱弧菌的方法，其特征在于，包括如下步骤： a) 以pH为7. 4的含5 % BSA，0. 1 % Tween 20的PBS缓冲液稀释处理待测样品，取洗脱 液超声破菌后作为待检样，以利用权利要求1-6任一所述的试纸条进行免疫层析检测； b) 荧光扫描所述检测线（4)和所述质控线（5)，分别测定所述检测线（4)和所述质控 线（5)区域的荧光强度，若所述质控线（5)区域出现荧光发射峰，则表明该试纸条有效，反 之则无效；若所述检测线（4)区域同时出现荧光发射峰则为阳性结果，反之则为阴性。
10. 根据权利要求9所述的检测01群小川型霍乱弧菌的方法，其特征在于，还包括制备 标准曲线及定量检测的步骤：其中 所述制备标准曲线的步骤包括：取01群小川型霍乱弧菌菌株（本实验室分离株）配制 成1-100倍梯度浓度的系列标准品；并将上述浓度系列标准品超声破菌后分别用所述的试 纸条进行免疫层析，荧光扫描所述检测线（4)和所述质控线（5)，分别测定所述检测线（4) 和所述质控线（5)区域的荧光强度，制作抗原浓度与荧光强度比之间关系的标准曲线，并 拟合方程； 所述定量检测的步骤包括：取待测样品超声破菌后以所述的试纸条进行免疫层析检 测，利用上述标准曲线及方程计算得到所述01群小川型霍乱弧菌浓度。
【文档编号】G01N33/577GK104502598SQ201410815561
【公开日】2015年4月8日 申请日期:2014年12月23日 优先权日:2014年12月23日
【发明者】张捷, 高静, 张雷, 李莉, 刘洁, 尚士进, 张晓光, 舒咬根, 陈广全 申请人:北京出入境检验检疫局检验检疫技术中心, 厦门市产品质量监督检验院, 中国检验检疫科学研究院