本发明涉及生物技术领域，且特别涉及一种基于非血性细胞样本的细胞蜡块的制备方法及细胞蜡块。
背景技术：
脱落细胞学检查是肿瘤诊断有效手段之一，普通涂片制作过程中吸取的少量胸腹水不能代表整个胸腹水的状况，且制作完毕之后剩余的胸腹水往往被遗弃，而细胞蜡块可以收集送检胸腹水中的绝大部分细胞，以便观察大部分细胞的形态，且细胞蜡块易于保存，大大提高了细胞病理学诊断的敏感性和特异性，弥补了常规细胞涂片制作有限而不够作多种染色的不足之处，可进行进一步研究和前瞻性研究。
但现有的细胞蜡块制作中固定时间长，细胞丢失明显，影响诊断结果。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种细胞蜡块，其可永久保存，细胞成分多，细胞结构完整，高倍背景清晰，有效提高诊断的准确率。
本发明的另一目的在于提供一种基于非血性细胞样本的细胞蜡块的制备方法，其制备效率高，操作简便，有效解决上述问题。
本发明解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的。
本发明提出一种基于非血性细胞样本的细胞蜡块的制备方法，其包括：
将非血性细胞样本在2900-3100r/min的条件下第一次离心5-6min后，收集第一沉淀样本以及距离第一沉淀样本1cm以内的上清液，第二次离心，得第二沉淀样本。
于第二沉淀样本中加入固定液，混合均匀后，第三次离心，得第三沉淀样本，将第三沉淀样本脱水、透明、浸蜡以及包埋。
本发明提出一种由上述制备方法制得的细胞蜡块。
本发明实施例的基于非血性细胞样本的细胞蜡块的制备方法及细胞蜡块的有益效果是：
通过在将非血性细胞样本经在2900-3100r/min的条件下第一次离心5-6min后，收集第一沉淀样本以及距离第一沉淀样本1cm以内的上清液，第二次离心，有效富集有形细胞，去除残缺的细胞的同时防止有形细胞的破损，同时细胞成分多，有效提高诊断的准确率。
通过与固定液的配合，有效固定有形的所需细胞，防止细胞的自溶，有效提高蜡块细胞的完整性。
由上述方式制得的细胞蜡块，其可永久保存，细胞成分多，细胞结构完整，高倍背景清晰，有效提高诊断的准确率。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
下面对本发明实施例的基于非血性细胞样本的细胞蜡块的制备方法及细胞蜡块进行具体说明。
本发明提供一种细胞蜡块，其细胞成分多，细胞结构完整，高倍背景清晰，有效提高诊断的准确率，用于应用于病理学的检测研究等，其由以下方法制得：
S1.将非血性细胞样本在2900-3100r/min的条件下第一次离心5-6min后，收集第一沉淀样本以及距离第一沉淀样本1-1.5cm的上清液，第二次离心，得第二沉淀样本。
优选地，本发明较佳的实施例中，第一次离心为在2900-3100r/min的条件下离心5-6min，有效使有形细胞沉淀，去除破碎的细胞等，收集第一沉淀样本，同时，在该离心范围内有效防止所需要的有形细胞破裂。
具体地，收集第一次离心后的上清液，在上述条件下进行离心，将离心所得的沉淀并入第一沉淀样本，但该方式收集效率较低，优选地，第一次离心后，静置5-10min后，收集沉淀以及距离第一沉淀样本1cm以内的上清液，进行第二次离心，有效避免细胞的浪费，同时有效提高第二沉淀样本的积累量，提高非血性细胞样本的利用率。此处的距离第一沉淀样本1cm以内的上清液是指距离第一沉淀样本在0.1-1cm以内的上清液。
需要说明的是，在第二次离心前，将第一沉淀样本可轻轻打散，进一步去除第一沉淀样本中掺杂的破碎的细胞，同时收集完整的细胞。
可选地，在第一次离心前，将非血性细胞样本静置，例如静置2-5h或静置过夜等，使细胞沉积于底部，进行细胞的富集，取底部样本进行制备，有效提高基于非血性细胞样本的细胞蜡块的制备方法的制作效率。
本发明较佳的实施例中，在2900-3100r/min的条件下第二次离心5-6min，有效使细胞沉淀，去除破碎的细胞，收集第二沉淀样本，同时，在该离心范围内有效防止所需要的有形细胞破裂。
S2.于第二沉淀样本中加入固定液，混合均匀后，第三次离心，得第三沉淀样本。
其中，固定液为浓度为3.5-4.3wt％的中性缓冲甲醛液。因甲醛能与蛋白质的氨基结合，使蛋白质凝固，进而有效固定细胞，防止细胞自溶，影响细胞蜡块的质量。需要说明的是，第二沉淀样本与固定液混合均匀，需要先将第二沉淀样本轻轻打散。
为了进一步降低固定时细胞的收缩率，使得到的细胞蜡块中的细胞更贴近实际的状态，以防止收缩过度，可选地，中性缓冲甲醛液的温度为3-5℃，即提前预冷中性缓冲甲醛液。
但是由于中性缓冲甲醛液对于环境具有一定的污染，因此优选地，固定液还可以为体积分数为93-96％的乙醇溶液。更优选为体积分数为95％的乙醇溶液，其中，体积分数为95％的乙醇溶液可以有效固定细胞的同时对环境无害，同时可对细胞进行一定的脱水。
需要说明的是，当固定液为乙醇溶液时，由于其可析出蛋白质，可选地，收集第二沉淀样本以及距离第二沉淀样本1-1.5cm的上清液，与固定液混合均匀后，第三次离心。
可选地，第三次离心于2800-3100r/min的条件下离心5-6min，有效使细胞沉淀，去除上清液，收集第三沉淀样本，同时，在该离心范围内有效防止细胞破裂。其中，第三沉淀样本的收集，例如可以为，使用尖头硬签挑出第三沉淀样本，采用滤纸包好。
S3.将第三沉淀样本脱水、透明、浸蜡以及包埋。
其中，脱水包括：在44-46℃，于体积分数为90-96％的乙醇溶液中脱水110-125min，接着在无水乙醇中脱水1-2次，每次脱水85-120min。在脱水前进行固定，使第三沉淀样本更容易形成细胞块。
透明包括：在45-47℃的条件下，采用二甲苯对脱水后的第三沉淀样本进行连续浸泡1-2次，每次进行20-30min。上述时间以及次数范围内，透明处理效果佳，细胞结构佳，可有效防止因浸泡时间过长导致的细胞变脆，不利于后期进行切片的问题。
本发明较佳的实施例中，于58-65℃的条件下浸蜡，可有效促进浸蜡的效率。
浸蜡包括：将透明后的第三沉淀涂敷于表面熔融状的蜡后，将第三沉淀样本快速压平于蜡的表面，快速冷却至20-25℃，静置5-20min后于60-65℃烘烤4-6min。
采用上述方法浸蜡，细胞蜡块位于蜡块顶部，一方面容易切片,同时光镜下细胞结构较完整，细胞与背景清晰，厚薄均匀，间皮、肿瘤及炎细胞染色鲜艳，细胞清晰，核浆染色对比明显，细胞形态与常规组织制作石蜡切片HE近似，容易鉴别，便于观察分析，另一方面石蜡块可以长期保存。
浸蜡还可以为在58-65℃第一次浸蜡30-35min后，保温10-20min后，接着在58-65℃第二次浸蜡进行110-130min。有效提高浸蜡的效率。
可选地，还包括将包埋后的非血性细胞样本切至厚度为3-6um的薄片，有效解决因切片太厚导致的细胞结构不清楚的问题，同时也便于后续进行常规或免疫组化染色、检测等，在此不做赘述。
采用上述方法可收集非血性细胞样本中的几乎所有细胞，有效避免浪费。
以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。
实施例1
一种细胞蜡块，其由以下制备方法制得：
将非血性细胞样本10ml在3000r/min的条件下第一次离心5min后，收集第一沉淀样本以及距离第一沉淀样本1cm以内的上清液，在3000r/min的条件下第二次离心5min后，得第二沉淀样本。
于第二沉淀样本中加入固定液，混合均匀后，在3100r/min的条件下第三次离心5min后，得第三沉淀样本，将第三沉淀样本脱水、透明、浸蜡以及包埋，将包埋后的非血性细胞样本切至厚度为4um的薄片。
其中，固定液为温度为4℃的浓度为4wt％的中性缓冲甲醛液。
脱水包括：在45℃，于体积分数为95％的乙醇溶液中脱水120min，接着在无水乙醇中脱水120min。
透明包括：在46℃的条件下，采用二甲苯对脱水后的第三沉淀样本进行连续浸泡30min。
浸蜡包括于65℃的条件下第一次浸蜡35min后，保温20min，于58℃的条件下第二次浸蜡120min。
实施例2
一种细胞蜡块，其由以下制备方法制得：
将非血性细胞样本在3100r/min的条件下第一次离心5min后，收集第一沉淀样本以及距离第一沉淀样本0.5cm以内的上清液，在3000r/min的条件下第二次离心6min后，收集第二沉淀样本以及距离第二沉淀样本1cm的上清液。
于第二沉淀样本以及距离第一沉淀样本1cm的上清液中加入固定液，混合均匀后，在3000r/min的条件下第三次离心5min后，得第三沉淀样本，将第三沉淀样本脱水、透明、浸蜡以及包埋，将包埋后的非血性细胞样本切至厚度为3-5um的薄片。
其中，固定液为体积分数为95％的乙醇。
脱水包括：在46℃，于体积分数为90％的乙醇溶液中脱水110min，接着在无水乙醇中脱水2次，每次脱水85min。
透明包括：在45℃的条件下，采用二甲苯对脱水后的第三沉淀样本进行连续浸泡2次，每次进行21min。
浸蜡包括于60℃的条件下第一次浸蜡30min后，保温10min，于60℃的条件下第二次浸蜡120min。
实施例3
一种细胞蜡块，其由以下制备方法制得：
将非血性细胞样本在2900r/min的条件下第一次离心5min后，收集第一沉淀样本以及距离第一沉淀样本1cm以内的上清液，在3000r/min的条件下第二次离心6min后，收集第二沉淀样本以及距离第一沉淀样本1cm的上清液。
于第二沉淀样本以及距离第一沉淀样本1cm的上清液中加入固定液，混合均匀后，在3100r/min的条件下第三次离心5min后，得第三沉淀样本，将第三沉淀样本脱水、透明、浸蜡以及包埋，将包埋后的非血性细胞样本切至厚度为3-5um的薄片。
其中，固定液为体积分数为95％的乙醇。
脱水包括：在45℃，于体积分数为90％的乙醇溶液中脱水110min，接着在无水乙醇中脱水2次，每次脱水90min。
透明包括：在45℃的条件下，采用二甲苯对脱水后的第三沉淀样本进行连续浸泡2次，每次进行20min。
浸蜡包括于65℃的条件下，将透明处理后的第三沉淀样本涂敷于表面熔融状的蜡后，将第三沉淀样本快速压平于蜡的表面，快速冷却至25℃，静置5min后于62℃烘烤5min。
实施例4
一种细胞蜡块，其由以下制备方法制得：
将非血性细胞样本在2900r/min的条件下第一次离心5min后，收集第一沉淀样本以及距离第一沉淀样本0.7cm以内的上清液，在3000r/min的条件下第二次离心5min后，得第二沉淀样本。
于第二沉淀样本中加入固定液，混合均匀后，在2900r/min的条件下第三次离心6min后，得第三沉淀样本，将第三沉淀样本脱水、透明、浸蜡以及包埋。
其中，固定液为温度为5℃的浓度为4wt％的中性缓冲甲醛液。
脱水包括：在45℃，于体积分数为95％的乙醇溶液中脱水120min，接着在无水乙醇中脱水120min。
透明包括：在45℃的条件下，采用二甲苯对脱水后的第三沉淀样本进行连续浸泡28min。
浸蜡包括于58℃的条件下第一次浸蜡35min后，保温12min，于63℃的条件下第二次浸蜡130min。
实施例5
一种细胞蜡块，其由以下制备方法制得：
将非血性细胞样本在2950r/min的条件下第一次离心5.5min后，收集第一沉淀样本以及距离第一沉淀样本0.5cm以内的上清液，在3000r/min的条件下第二次离心5.5min后，得第二沉淀样本。
于第二沉淀样本中加入固定液，混合均匀后，在3000r/min的条件下第三次离心5min后，得第三沉淀样本，将第三沉淀样本脱水、透明、浸蜡以及包埋，将包埋后的非血性细胞样本切至厚度为3um的薄片。
其中，固定液为体积分数为95％的乙醇溶液。
脱水包括：在44℃，于体积分数为94％的乙醇溶液中脱水110min，接着在无水乙醇中脱水2次，每次脱水90min。
透明包括：在46℃的条件下，采用二甲苯对脱水后的第二沉淀进行连续浸泡2次，每次进行28min。
浸蜡包括于62℃的条件下第一次浸蜡33min后，保温10min，于62℃的条件下第二次浸蜡110min。
综上，本发明实施例的提供的基于非血性细胞样本的细胞蜡块的制备方法，其操作简单便捷，制备效率高，固定时间较短，有效固定样本中的几乎所有的细胞，防止细胞的浪费。由上述方法制得的细胞蜡块，其细胞结构清楚，提高了病理诊断的准确率。
以上所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。本发明的实施例的详细描述并非旨在限制要求保护的本发明的范围，而是仅仅表示本发明的选定实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。