本发明涉及分析化学技术领域，具体涉及一种加热不燃烧卷烟的主流烟气中1，2-丙二醇、丙三醇和薄荷醇的检测方法；一种加热不燃烧卷烟的主流烟气中酚类化合物的检测方法；一种加热不燃烧卷烟的主流烟气中游离烟碱的检测方法。
背景技术：
加热不燃烧烟草制品(hnb)，是指通过加热不燃烧烟草制品进行抽吸，烟支中的化学成分汽化产生烟气，从而满足人的抽烟需求。由于加热不燃烧烟草制品产品仅仅是加热(不燃烧)而使烟支的物质汽化或裂解，因此加热不燃烧烟草制品的主流烟气中有害物质较少。其中，1，2-丙二醇、丙三醇等多元醇类化合物能够保持烟草制品的水分，能够减少加工过程中的造碎，同时还有降低刺激性和改善口味的作用，是烟草制品中常用的保润剂；同时，丙二醇和丙三醇能够作为加热不燃烧烟气的载体，协助原料中的成分挥发出来；而薄荷醇作为薄荷型卷烟的必备添加剂，在大部分不燃烧卷烟中存在。因此，需要对1，2-丙二醇、丙三醇和薄荷醇等目标物进行准确测定。
现有技术中未见同时测定加热不燃烧烟气中丙二醇、丙三醇和薄荷醇的含量的报道。加热不燃烧烟气中的丙二醇和丙三醇的含量不同于电子烟气溶胶，其主流烟气基质和常规燃烧卷烟以及电子烟基质具有较大差异，并且含水量较高；其中的薄荷醇含量也会高于电子烟气溶胶，因此如何准确地同时测定加热不燃烧烟气中丙二醇、丙三醇和薄荷醇的含量，并消除高水分含量对气相色谱分析的影响，是一个需要解决的问题。
酚类化合物是卷烟主流烟气中的一类重要有害成分，被列入加拿大政府46种有害成分名单和who“烟草制品管制研究小组”建议的管制成分清单，因而准确测定卷烟烟气中的挥发酚类化合物对于卷烟危害性评价有重要意义。
加热不燃烧烟草制品(hnb)，由一根烟草棒(又称“加热棒”)组成，长度大约是普通卷烟的一半，通过对加热不燃烧烟草制品进行抽吸，烟支中的化学成分汽化产生烟气，从而满足人的抽烟需求。由于加热不燃烧烟草制品产品不进行燃烧，仅仅是加热使烟支的物质汽化或裂解，因此加热不燃烧烟草制品的主流烟气中有害物质较少，同时由于产品中含有大量丙三醇，其主流烟气基质和常规燃烧卷烟基质具有较大差异，并且含水量较高。在测定加热不燃烧烟草制品主流烟气中的酚类化合物时单纯靠增加烟支抽吸支数来提高方法检测灵敏度时基质浓度也有提高，会影响目标物的分离。
目前，国内有关卷烟主流烟气中酚类化合物的检测普遍采用《yc/t255-2008》所规定的高效液相色谱法，此方法采用剑桥滤片捕集主流烟气中的酚类化合物，然后加入萃取溶剂超声萃取滤片上的酚类化合物，超声时间长达40min，同时不同超声波超声功率的不同也影响了测试结果的重复性，因此如何准确地同时测定加热不燃烧烟气中酚类化合物的含量，并消除高水分含量对气相色谱分析的影响，是一个需要解决的问题。
卷烟的劲头与主流烟气中的烟碱含量有关，特别是与其中的游离态烟碱有着更为密切的关系。但由于烟碱与有机酸结合所形成的盐类为弱酸弱碱盐，极易解离，使得准确测定烟气中游离态烟碱的绝对含量有一定的难度。
加热不燃烧烟草制品(hnb)，由一根烟草棒(又称“加热棒”)组成，长度大约是普通卷烟的一半，通过对加热不燃烧烟草制品进行抽吸，烟支中的化学成分汽化产生烟气，从而满足人的抽烟需求。由于加热不燃烧烟草制品不进行燃烧，仅仅是加热使烟支的物质汽化或裂解，因此加热不燃烧烟草制品的主流烟气中有害物质较少，同时由于产品中含有大量丙三醇，其主流烟气基质和常规燃烧卷烟基质具有较大差异，并且含水量较高。在测定加热不燃烧烟草制品主流烟气中的游离烟碱时单纯靠增加烟支抽吸支数来提高方法检测灵敏度时基质浓度也有提高，会影响目标物的分离。因此，准确测定加热不燃烧烟草制品主流烟气中游离烟碱含量，对加热不燃烧烟草制品吸食品质控制具有重要的理论意义和实用价值。
目前，卷烟主流烟气中游离烟碱检测普遍采用剑桥滤片捕集主流烟气中的烟碱，然后加入水和三氯甲烷萃取滤片上的烟碱，由于烟气粒相物富集在剑桥滤片上，采用水萃取时不能将目标物完全萃取，而采用三氯甲烷则检测数据偏高；此外，水和三氯甲烷液液萃取时耗时较长，长达2-4小时，效率不高，因此如何准确测定加热不燃烧烟气中游离烟碱的含量是一个需要解决的问题。
技术实现要素：
为解决如何同时测定加热不燃烧烟气中丙二醇、丙三醇和薄荷醇的含量的问题，本发明提供一种使用滤片捕集、溶剂萃取并经气相色谱仪同时检测卷烟主流烟气中主要醇类化合物(1，2-丙二醇、丙三醇和薄荷醇)的方法。
本发明为了准确测定加热不燃烧卷烟主流烟气中主要酚类化合物，提供了一种捕集溶液来捕集主流烟气中主要酚类化合物的方法，能够快速、高效、准确的测定加热不燃烧卷烟主流烟气中的酚类化合物，有利于提高对酚类化合物检测的效率和准确性。
本发明为了准确测定加热不燃烧卷烟主流烟气中游离烟碱，提供了一种捕集溶液来捕集主流烟气中主要游离烟碱的方法，能够快速、高效、准确的测定加热不燃烧卷烟主流烟气中的游离烟碱，有利于提高对游离烟碱检测的效率和准确性。
本发明所述方法能够准确、高效、环保地检测卷烟主流烟气中主要醇类化合物(1，2-丙二醇、丙三醇和薄荷醇)的含量。
本发明的目的是采用如下技术方案来实现的。
本发明提供一种加热不燃烧卷烟的主流烟气中醇类化合物的检测方法，该检测方法包括以下步骤：
(1)制备供试品溶液，其包括从所述加热不燃烧卷烟的主流烟气的总粒相物中获取醇类化合物；
(2)制备标准溶液；
(3)采用气相色谱法测定所述加热不燃烧卷烟的主流烟气中醇类化合物的含量；其中，所述气相色谱条件包括：
色谱柱：cp-1301硅胶柱毛细管柱；
优选地，所述醇类化合物为1，2-丙二醇、丙三醇和薄荷醇。
优选地，所述步骤(1)中，所述制备供试品溶液包括：
使用滤片于iso抽吸模式下捕集卷烟的总粒相物，后将滤片放入有机溶剂振荡，过滤；
优选地，所述滤片为剑桥滤片；
优选地，所述卷烟的数量为3-7支，优选5支；
优选地，所述有机溶剂为异丙醇；
优选地，所述振荡时间为20-35min，优选30min；
优选地，所述过滤为使用无水硫酸钠针头过滤器进行过滤；
优选地，所述步骤(1)中，所述制备供试品溶液包括：
使用剑桥滤片于iso抽吸模式下收集5支卷烟的总粒相物，后将剑桥滤片放入100ml容器中的20ml的异丙醇中，室温下振荡30min，移取2ml萃取溶液，经无水硫酸钠针头过滤器进行过滤。
优选地，所述步骤(2)中，所述制备标准溶液包括：分别取1g的1，2-丙二醇、丙三醇和薄荷醇，经有机溶剂定容；
优选地，所述有机溶剂为异丙醇；
优选地，所述步骤(2)中，所述制备标准溶液包括：
分别称取1g的1，2-丙二醇、丙三醇和薄荷醇至100ml容器中，经异丙醇定容，摇匀，将所得溶液分别于4℃条件下保存；分别移取0.2ml、0.5ml、2.5ml、5ml、7.5ml、10ml、15ml、20ml上述溶液至100ml容器中，分别得到浓度为0.02mg/ml、0.05mg/ml、0.25mg/ml、0.50mg/ml、0.75mg/ml、1.00mg/ml、1.50mg/ml、2.00mg/ml的标准溶液。
优选地，所述气相色谱条件还包括：
所述cp-1301硅胶柱毛细管柱柱长30m，柱内径0.32mm，膜厚1μm；
进样温度：250℃；
检测器温度：275℃；
进样量1μl；
分流进样的分流比：50∶1；
载气：氦气，流速为0.7ml/min；
尾吹气：氦气，流速为30ml/min；
氢气：流速为40ml/min；
空气：流速为400ml/min；
优选地，所述初始温度110℃，保持1min，以10℃/min速率由110℃升至150℃，保持3min，再以30℃/min速率由150℃升至220℃，保持5min。
优选地，所述加热不燃烧卷烟的主流烟气中醇类化合物的检测方法包括以下步骤：
(1)制备供试品溶液：
使用剑桥滤片于iso抽吸模式下收集5支卷烟的总粒相物，后将剑桥滤片放入100ml容器中，加入20ml的异丙醇，室温下振荡30min，移取2ml溶液，经无水硫酸钠针头过滤器过滤；
(2)制备标准溶液：
分别称取1g的1，2-丙二醇、丙三醇和薄荷醇至100ml容器中，经异丙醇定容，摇匀，将所得溶液分别于4℃条件下保存；分别准确移取0.2ml、0.5ml、2.5ml、5ml、7.5ml、10ml、15ml、20ml上述溶液至100ml容器中，分别得到浓度为0.02mg/ml、0.05mg/ml、0.25mg/ml、0.50mg/ml、0.75mg/ml、1.00mg/ml、1.5.mg/ml、2.00mg/ml的标准溶液；
(3)采用气相色谱法测定所述加热不燃烧卷烟的主流烟气中醇类化合物的含量：
取标准溶液和供试品溶液注入气相色谱仪进行测定，所述气相色谱仪条件包括：
色谱柱：cp-1301硅胶柱毛细管柱；优选地，所述cp-1301硅胶柱毛细管柱柱长30m，柱内径0.32mm，膜厚1μm；
进样温度：250℃；
检测器温度：275℃；
进样量1μl；
分流进样的分流比：50∶1；
载气：氦气，流速为0.7ml/min；
尾吹气：氦气或氮气，流速为30ml/min；
氢气：流速为40ml/min；
空气：流速为400ml/min；
优选地，所述初始温度110℃，保持1min，以10℃/min速率由110℃升至150℃，保持3min，再以30℃/min速率由150℃升至220℃，保持5min。
与现有技术相比，本发明提供的检测所述醇类化合物含量的方法具有以下有益效果：
(1)本发明所述方法的检测效率高，通过一次性捕集主流烟气中主要醇类化合物(1，2-丙二醇、丙三醇和薄荷醇)，并使用气相色谱同时检测待测样品中三种醇类的含量，提高了工作效率；本发明采用无水硫酸钠过滤器达到了明显的效果，消除了样品中高水分对气相色谱检测的影响；
(2)本发明所述检测方法节省了大量有机试剂的消耗，在降低成本的同时，减少了检测工作对于环境和检测人员健康的危害；
(3)本发明所述检测方法具有灵敏度高、重复性和回收率好的优点。
本发明提供一种加热不燃烧卷烟的主流烟气中酚类化合物的检测方法，该检测方法包括以下步骤：
(1)制备供试品溶液；其包括从所述加热不燃烧卷烟的主流烟气的总粒相物中获取酚类化合物；
(2)制备标准溶液；
(3)采用高效液相色谱法测定所述加热不燃烧卷烟的主流烟气中醇类化合物的含量；其中，所述高效液相色谱条件包括：
色谱柱：
流动相：乙腈-水溶液；
优选地，所述酚类化合物为邻-苯二酚、对-苯二酚、苯酚、邻-甲酚、间-甲酚、对-甲酚、间-苯二酚。
优选地，所述步骤(1)中，所述制备供试品溶液包括：
使用捕集溶液于iso抽吸模式下捕集卷烟的总粒相物，后将得到的溶液振荡，过滤；其中，所述捕集溶液为浓度为4％；
优选地，所述卷烟的数量为3-7支，优选5支；
优选地，所述振荡时间为2-7min，优选5min；
优选地，所述过滤是指使用水相滤膜过滤，优选使用0.22μm的水相滤膜；
优选地，所述步骤(1)中，所述制备供试品溶液包括：
使用捕集溶液于iso抽吸模式下捕集5支卷烟的总粒相物，后将得到的溶液在室温下振荡5min，经0.22μm所述水相滤膜过滤；
优选地，所述卷烟的数量与捕集溶液的比例为5支：25ml；
优选地，所述步骤(1)中，所述制备供试品溶液包括：
使用含有25ml捕集溶液的两个串联捕集瓶在iso抽吸模式下捕集5支卷烟的总粒相物，后将所述两个串联捕集瓶中的溶液于室温下振荡5min后，移取上述得到的溶液2ml，经0.22μm的水相滤膜过滤。
优选地，所述步骤(2)中，所述制备标准溶液包括：分别取邻-苯二酚、对-苯二酚，苯酚，邻-甲酚、间-甲酚、对-甲酚、间-苯二酚，加入有机溶剂至完全溶解，后经有机溶剂稀释；
优选地，所述有机溶剂为浓度为4％的乙酸水溶液；
优选地，所述步骤(2)中，所述制备标准溶液包括：
分别取100mg的邻-苯二酚、100mg的对-苯二酚，100mg的苯酚，50mg的邻-甲酚、50mg的间-甲酚、50mg的对-甲酚、20mg的间-苯二酚加入至50ml容器中，加入30ml的有机溶剂至完全溶解后，后转移到100ml容器中经有机溶剂定容；
优选地，所述步骤(2)中，所述制备标准溶液包括：
分别取100mg的邻-苯二酚、100mg的对-苯二酚，100mg的苯酚，50mg的邻-甲酚、50mg的间-甲酚、50mg的对-甲酚、20mg的间-苯二酚加入至50ml容器中，加入30ml的有机溶剂至完全溶解后，后转移到100ml容器中，经有机溶剂定容，后取所述得到的溶液10ml至100ml容器中，经有机溶剂定容作为一级标准溶液；后取所述一级标准溶液10ml至100ml容器中，经有机溶剂定容作为二级标准溶液；分别取上述得到的二级标准溶液1、2、5ml以及一级标准溶液1、2ml至50ml容器中，经有机溶剂定容；分别得到浓度为0.25gμg/ml、0.50μg/ml、1.25μg/ml、2.51μg/ml、5.02μg/ml、12.54μg/ml的对-苯二酚标准溶液；浓度为0.07μg/ml、0.13μg/ml、0.34μg/ml、0.67μg/ml、1.34μg/ml、3.35μg/ml的间-苯二酚标准溶液；浓度为0.36μg/ml、0.71μg/ml、1.78μg/ml、3.57μg/ml、7.13μg/ml、17.83μg/ml的邻-苯二酚标准溶液；浓度为0.26μg/ml、0.53μg/ml、1.32μg/ml、2.64μg/ml、5.28μg/ml、13.19μg/ml的苯酚标准溶液；浓度为0.14μg/ml、0.28μg/ml、0.71μg/ml、1.42μg/ml、2.83μg/ml、7.08μg/ml的间-甲酚标准溶液；浓度为0.24μg/ml、0.48μg/ml、1.21μg/ml、2.42μg/ml、4.85μg/ml、12.12μg/ml的邻-甲酚标准溶液。
优选地，所述高效液相色谱条件还包括：
所述色谱柱柱内径250mm×4.6mm，
优选地，所述填充剂的粒径为5μm；
优选地，所述色谱柱柱温：20-40℃，优选为30℃；
优选地，所述色谱柱柱流量为1.0ml/min；
优选地，所述进样体积：10μl；
优选地，所述水和乙腈的体积比为50∶50。
优选地，所述加热不燃烧卷烟的主流烟气中酚类化合物的检测方法包括以下步骤：
(1)制备供试品溶液：
使用含有25ml捕集溶液的两个串联捕集瓶在iso抽吸模式下捕集5支卷烟的总粒相物，后将所述两个串联捕集瓶中的溶液于室温下振荡5min后，移取上述得到的溶液2ml，经0.22μm的水相滤膜过滤；
(2)制备标准溶液：
分别取100mg的邻-苯二酚、100mg的对-苯二酚，100mg的苯酚，50mg的邻-甲酚、50mg的间-甲酚、50mg的对-甲酚、20mg的间-苯二酚加入至50ml容器中，加入30ml的有机溶剂至完全溶解后，后转移到100ml容器中，经有机溶剂定容，后取所述得到的溶液10ml至100ml容器中，经有机溶剂定容作为一级标准溶液；后取所述一级标准溶液10ml至100ml容器中，经有机溶剂定容作为二级标准溶液；分别取上述得到的二级标准溶液1、2、5ml以及一级标准溶液1、2ml至50ml容器中，经有机溶剂定容；分别得到浓度为0.25gμg/ml、0.50μg/ml、1.25μg/ml、2.51μg/ml、5.02μg/ml、12.54μg/ml的对-苯二酚标准溶液；浓度为0.07μg/ml、0.13μg/ml、0.34μg/ml、0.67μg/ml、1.34μg/ml、3.35μg/ml的间-苯二酚标准溶液；浓度为0.36μg/ml、0.71μg/ml、1.78μg/ml、3.57μg/ml、7.13μg/ml、17.83μg/ml的邻-苯二酚标准溶液；浓度为0.26μg/ml、0.53μg/ml、1.32μg/ml、2.64μg/ml、5.28μg/ml、13.19μg/ml的苯酚标准溶液；浓度为0.14μg/ml、0.28μg/ml、0.71μg/ml、1.42μg/ml、2.83μg/ml、7.08μg/ml的间-甲酚标准溶液；浓度为0.24μg/ml、0.48μg/ml、1.21μg/ml、2.42μg/ml、4.85μg/ml、12.12μg/ml的邻-甲酚标准溶液；
(3)采用高效液相色谱法测定所述加热不燃烧卷烟的主流烟气中醇类化合物的含量：
取标准溶液和供试品溶液注入高效液相色谱仪进行测定，所述高效液相色谱仪条件包括：
色谱柱：
流动相：乙腈-水溶液；
优选地，所述色谱柱柱内径250mm×4.6mm，
优选地，所述填充剂的粒径为5μm；
优选地，所述色谱柱柱温：20-40℃，优选为30℃；
优选地，所述色谱柱柱流量为1.0ml/min；
优选地，所述进样体积：10μl；
优选地，所述水和乙腈溶液体积比为50∶50。
与现有技术相比，本发明提供的检测酚类含量的方法具有以下有益效果：
(1)本发明所述方法检测时间短，测定卷烟主流烟气中主要酚类化合物周期仅需要10分钟左右；
(2)相对于现有方法(《yc/t255-2008》)，本发明所述方法节省了大量有机试剂的消耗，在降低成本的同时，减少了检测工作对于环境和检测人员健康的危害；
(3)本发明具有操作准确、灵敏度高及重复性好的优点。
本发明提供一种加热不燃烧卷烟的主流烟气中游离烟碱的检测方法，该检测方法包括以下步骤：
(1)制备供试品溶液；其包括从所述加热不燃烧卷烟的主流烟气的总粒相物中获取游离烟碱；
(2)制备标准溶液；
(3)采用气相色谱法测定所述加热不燃烧卷烟的主流烟气中游离烟碱的含量；其中，所述气相色谱条件包括：
色谱柱：cp-1301硅胶柱毛细管柱；
柱体积：30m×0.32mm×1.0μm。
优选地，所述步骤(1)中，所述制备供试品溶液包括：
使用捕集溶液于iso抽吸模式下捕集卷烟的总粒相物，后将得到的溶液振荡，过滤；
其中，所述捕集溶液为水和三氯甲烷的混合溶液，所述水和三氯甲烷的体积比为1∶1；
优选地，所述卷烟的数量为3-7支，优选5支；
优选地，所述振荡时间为2-7min，优选5min；
优选地，所述过滤为使用无水硫酸钠针头过滤器进行过滤；
优选地，所述步骤(1)中，所述制备供试品溶液包括：
使用捕集溶液于iso抽吸模式捕集5支卷烟的总粒相物，后将得到的溶液在室温下振荡5min，经无水硫酸钠针头过滤器过滤；
优选地，所述卷烟的数量与捕集溶液的比例为5支：25ml；
优选地，所述步骤(1)中，所述制备供试品溶液包括：
使用含有25ml捕集溶液的两个串联捕集瓶在iso抽吸模式下捕集5支卷烟的总粒相物，后将所述两个串联捕集瓶中的溶液于室温下振荡5min后，移取上述得到的溶液2ml，经无水硫酸钠针头过滤器过滤。
优选地，所述步骤(2)中，所述制备标准溶液包括：取100mg烟碱标准品，经有机溶剂定容；
优选地，所述有机溶剂为三氯甲烷；
优选地，所述步骤(2)中，所述制备标准溶液包括：
分别称取约100mg的烟碱标准品至50ml容器中，经100ml的三氯甲烷定容；移取上述溶液经三氯甲烷稀释，得到浓度分别为0.05mg/ml、0.10mg/ml、0.50mg/ml、1.00mg/ml、2.00mg/ml、5.00mg/ml的标准溶液。
优选地，所述气相色谱条件还包括：
进样温度：250℃；
检测器温度：275℃；
进样量1μl；
分流进样的分流比：20∶1；
载气：氦气，优选流速为1.2ml/min；
优选地，所述尾吹气流速为10ml/min；
优选地，所述隔垫吹扫流速为10ml/min；
优选地，所述初始温度100℃，保持0.5min，以20℃/min速率由100℃升至200℃，保持1.5min。
优选地，所述加热不燃烧卷烟的主流烟气中游离烟碱的检测方法包括以下步骤：
(1)制备供试品溶液：
使用含有25ml捕集溶液的两个串联捕集瓶在iso抽吸模式下捕集5支卷烟的总粒相物，后将所述两个串联捕集瓶中的溶液于室温下振荡5min后，移取上述得到的溶液2ml，经无水硫酸钠针头过滤器过滤；
(2)制备标准溶液：
分别称取约100mg的烟碱标准品至50ml容器中，经100ml的三氯甲烷定容；移取上述溶液经三氯甲烷稀释，得到浓度分别为0.05mg/ml、0.10mg/ml、0.50mg/ml、1.00mg/ml、2.00mg/ml、5.00mg/ml的标准溶液；
(3)采用气相色谱法测定所述加热不燃烧卷烟的主流烟气中游离烟碱的含量：
取标准溶液和供试品溶液注入气相色谱仪进行测定，所述气相色谱仪条件包括：
色谱柱：cp-1301硅胶柱毛细管柱；
柱体积：30m×0.32mm×1.0μm；
优选地，进样温度：250℃；
检测器温度：275℃；
进样量1μl；
分流进样的分流比：20∶1；
载气：氦气，流速为1.2ml/min；
优选地，所述尾吹气流速为10ml/min；
优选地，所述隔垫吹扫流速为10ml/min；
优选地，所述初始温度100℃，保持0.5min，以20℃/min速率由100℃升至200℃，保持1.5min。
与现有技术相比，本发明提供的检测游离烟碱含量的方法具有以下有益效果：
(1)本发明提供的检测方法时间短，检测加热不燃烧卷烟的主流烟气中的游离烟碱周期仅需要9分钟左右；
(2)本发明提供的检测方法节省了滤片捕集后震荡萃取以及液液萃取的过程，避免了滤片法萃取不完全、液液萃取重复性差的问题；本发明一步法实现烟气捕集和游离烟碱在有机相和水相分配的过程，卷烟每抽吸一口便是一次游离烟碱的分配过程；本发明还节省了待测样品的前处理时间，现有方法的待测样品前处理过程需要3-4小时，本发明只需10min；
(3)本发明所述检测方法具有操作准确、灵敏度高及重复性好的优点。
附图说明
以下，结合附图来详细说明本发明的实施方案，其中：
图1为本发明所述检测方法流程图；
图2为本发明所述检测醇类方法中标准溶液色谱图；
图3为本发明所述检测醇类方法中供试品溶液色谱图；
图4为本发明所述检测醇类方法所述步骤(1)中对卷烟数量的选择；
图5为本发明所述检测醇类方法所述步骤(1)中对异丙醇使用量的选择；
图6为本发明所述检测醇类方法所述步骤(1)中对振荡时间的选择；
图7为本发明所述检测酚类的方法流程图；
图8为本发明所述检测酚类方法中标准溶液色谱图；
图9为本发明所述检测酚类方法中供试品溶液色谱图；
图10为本发明所述检测酚类方法中所述的串联捕集瓶；
图11为本发明所述检测酚类方法中两个捕集瓶效果串联效果
图12为本发明所述检测酚类方法中滤片和吸收瓶串联效果；
图13为本发明所述检测游离烟碱方法流程图；
图14为本发明所述检测游离烟碱方法中标准溶液色谱图；
图15为本发明所述检测游离烟碱方法中供试品溶液色谱图；
图16为本发明所述检测游离烟碱方法中所述的串联捕集瓶；
图17为本发明所述检测游离烟碱方法所述步骤(1)中对卷烟数量的选择；
图18为本发明所述检测游离烟碱方法所述步骤(1)中对捕集溶液使用量的选择。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。
下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的药材原料、试剂材料等，如无特殊说明，均为市售购买产品。
以下各实施例中所使用的试剂与仪器：
标准品：1，2-丙二醇、丙三醇、薄荷醇，dr.ehrenstorfer公司，德国；
试剂：异丙醇，色谱纯，韩国duksanpurechemicals公司；
实验用水为milli-q纯水系统的去离子水；
仪器：气相色谱仪-fid检测器，安捷伦公司；
sm450直线型吸烟机(英国cerulean公司)；
电子分析天平，感量：0.0001g，瑞士mettler公司；
hy-6双层调速振荡器，国华电器有限公司；
无水硫酸钠针式滤器，13mm×0.22μm，上海安谱科学仪器有限公司。
邻-苯二酚、对-苯二酚、苯酚、邻-甲酚、间-甲酚、对-甲酚、间-苯二酚，德国dr公司；
乙腈溶液，hplc纯，德国cnw公司；
乙酸溶液，hplc纯，德国默克公司；
所有实验用水均为超纯水仪处理后的去离子水；
仪器：sm450，20通道直线型吸烟机；
高效液相色谱仪，安捷伦公司；
荧光检测器，fld；
ae163电子天平，感量0.0001g，瑞士mettler公司。
实施例1
(1)制备供试品溶液：
使用剑桥滤片于iso抽吸模式下收集5支卷烟的总粒相物，后将剑桥滤片放入100ml容器中，加入20ml的异丙醇，室温下振荡30min，移取2ml溶液，经无水硫酸钠针头过滤器过滤；
(2)制备标准溶液：
分别称取约1g的1，2-丙二醇、丙三醇和薄荷醇至100ml容器中，精确至0.0001g，经异丙醇定容，摇匀，将所得溶液分别于4℃条件下保存；分别准确移取0.2ml、0.5ml、2.5ml、5ml、7.5ml、10ml、15ml、20ml上述溶液至100ml容器中，分别得到浓度为0.02mg/ml、0.05mg/ml、0.25mg/ml、0.50mg/ml、0.75mg/ml、1.00mg/ml、1.5mg/ml、2.00mg/ml的标准溶液；见表1；
表1：本发明所述检测方法中的标准溶液的浓度(mg/ml)
(3)气相色谱仪测定：
色谱条件如下：
色谱柱：熔融硅胶柱毛细管柱cp-1301，柱长30m，柱内径0.32mm，膜厚1μm；
进样温度：250℃；
检测器温度：275℃；
进样量1μl；
分流进样的分流比：50∶1；
载气：氦气，优选流速为0.7ml/min；
尾吹气：氦气或氮气，流速为30ml/min；氢气：流速为40ml/min；空气：流速为400ml/min；
所述初始温度110℃，保持1min，以10℃/min速率由110℃升至150℃，保持3min，再以30℃/min速率由150℃升至220℃，保持5min。
(4)标准曲线的建立：
采用气相色谱仪测定所得到的标准溶液，得到目标化合物(1，2-丙二醇、丙三醇和薄荷醇)的积分峰面积，将目标化合物的积分面积作为纵坐标，将目标化合物的浓度作为横坐标，建立目标化合物的标准曲线。采用峰面积定量，以峰面积(积分值)对质量浓度(mg/ml)求得线性回归方程，验证标准曲线方程和相关系数，r2应不小于0.99。各化合物的标准曲线及检测限见表2；
表2：本发明所述检测方法中的标准曲线和检测限
注：所述检出限以3倍信噪比(s/n＝3)计算
(5)本发明所述检测方法的方法学考察
对本发明样品进行低、中、高不同浓度水平的标准溶液加标回收率试验，每个样品分别测定3次，计算本发明所述检测方法中主要醇类化合物(1，2-丙二醇、丙三醇和薄荷醇)的回收率及加标后测定值的相对标准偏差，结果见表3；可以看出，在3个加标水平上，利用本发明所述检测方法检测主流烟气中主要醇类化合物(1，2-丙二醇、丙三醇和薄荷醇)的平均回收率为90.6-101.0％；样品测试结果的平均相对偏差＜3.2％；说明本发明所述检测方法的回收率较高，重复性较好。
表3：加标回收率考察(n＝3)
(6)检测待测样品
采用气相色谱仪测定所得到的待测样品的供试品溶液，测得各化合物(1，2-丙二醇、丙三醇和薄荷醇)的色谱峰面积，将其代入上述标准曲线，分别得到待测样品中的主要醇类化合物(1，2-丙二醇、丙三醇和薄荷醇)的含量，见表4；
表4：加热不燃烧卷烟主流烟气中丙二醇、丙三醇和薄荷醇的检测结果
实施例2
(1)制备供试品溶液(同实施例1)；
(2)制备标准溶液(同实施例1)；
(3)气相色谱仪测定(同实施例1)；
(4)标准曲线的建立(同实施例1)；
(5)本发明所述检测方法的方法学考察(同实施例1)；
(6)检测待测样品
采用气相色谱仪测定所得到的待测样品的供试品溶液，测得各化合物(1，2-丙二醇、丙三醇和薄荷醇)的色谱峰面积，将其代入上述标准曲线，分别得到待测样品中的主要醇类化合物(1，2-丙二醇、丙三醇和薄荷醇)的含量，见表5；
表5：加热不燃烧卷烟主流烟气中丙二醇、丙三醇和薄荷醇的检测结果
实施例3
(1)制备供试品溶液(同实施例1)；
(2)制备标准溶液(同实施例1)；
(3)气相色谱仪测定(同实施例1)；
(4)标准曲线的建立(同实施例1)；
(5)本发明所述检测方法的方法学考察(同实施例1)；
(6)检测待测样品
采用气相色谱仪测定所得到的待测样品的供试品溶液，测得各化合物(1，2-丙二醇、丙三醇和薄荷醇)的色谱峰面积，将其代入上述标准曲线，分别得到待测样品中的主要醇类化合物(1，2-丙二醇、丙三醇和薄荷醇)的含量，见表6；
表6：加热不燃烧卷烟主流烟气中丙二醇、丙三醇和薄荷醇的检测结果
实施例4
(1)制备供试品溶液(同实施例1)；
(2)制备标准溶液(同实施例1)；
(3)气相色谱仪测定(同实施例1)；
(4)标准曲线的建立(同实施例1)；
(5)本发明所述检测方法的方法学考察(同实施例1)；
(6)检测待测样品
采用气相色谱仪测定所得到的待测样品的供试品溶液，测得各化合物(1，2-丙二醇、丙三醇和薄荷醇)的色谱峰面积，将其代入上述标准曲线，分别得到待测样品中的主要醇类化合物(1，2-丙二醇、丙三醇和薄荷醇)的含量，见表7；
表7：加热不燃烧卷烟主流烟气中丙二醇、丙三醇和薄荷醇的检测结果
实施例5：本发明所述检测方法中对卷烟数量的选择
从图4可以看出，本发明所述检测方法的步骤(1)中所述卷烟的数量为3-7支，优选5支。
实施例6：本发明所述检测方法所述步骤(1)中对异丙醇使用量的选择
从图5可以看出，本发明所述检测方法的步骤(1)中所述异丙醇的使用量为20ml。
实施例7：本发明所述检测方法所述步骤(1)中对振荡时间的选择
从图6可以看出，本发明所述检测方法的步骤(1)中所述振荡时间为20-35min，优选30min。
实施例8
(1)制备供试品溶液：
使用含有25ml捕集溶液的两个串联捕集瓶在iso抽吸模式下捕集5支卷烟的总粒相物，后将所述两个串联捕集瓶中的溶液于室温下振荡5min后，移取上述得到的溶液2ml，经0.22μm的水相滤膜过滤；
图11显示了本发明所述检测方法中两个捕集瓶效果串联效果；图12显示了本发明所述检测方法中滤片和吸收瓶串联效果，结果表明，采用两个捕集瓶串联效果要好于采用滤片捕集加吸收瓶的效果。
(2)制备标准溶液：
分别取100mg的邻-苯二酚、100mg的对-苯二酚，100mg的苯酚，50mg的邻-甲酚、50mg的间-甲酚、50mg的对-甲酚、20mg的间-苯二酚加入至50ml容器中，加入30ml的有机溶剂至完全溶解后，后转移到100ml容器中，经有机溶剂定容，后取所述得到的溶液10ml至100ml容器中，经有机溶剂定容作为一级标准溶液；后取所述一级标准溶液10ml至100ml容器中，经有机溶剂定容作为二级标准溶液；分别取上述得到的二级标准溶液1、2、5ml以及一级标准溶液1、2ml至50ml容器中，经有机溶剂定容；分别得到浓度为0.25gμg/ml、0.50μg/ml、1.25μg/ml、2.51μg/ml、5.02μg/ml、12.54μg/ml的对-苯二酚标准溶液；浓度为0.07μg/ml、0.13μg/ml、0.34μg/ml、0.67μg/ml、1.34μg/ml、3.35μg/ml的间-苯二酚标准溶液；浓度为0.36μg/ml、0.71μg/ml、1.78μg/ml、3.57μg/ml、7.13μg/ml、17.83μg/ml的邻-苯二酚标准溶液；浓度为0.26μg/ml、0.53μg/ml、1.32μg/ml、2.64μg/ml、5.28μg/ml、13.19μg/ml的苯酚标准溶液；浓度为0.14μg/ml、0.28μg/ml、0.71μg/ml、1.42μg/ml、2.83μg/ml、7.08μg/ml的间-甲酚标准溶液；浓度为0.24μg/ml、0.48μg/ml、1.21μg/ml、2.42μg/ml、4.85μg/ml、12.12μg/ml的邻-甲酚标准溶液；
(3)采用高效液相色谱法测定所述加热不燃烧卷烟的主流烟气中酚类化合物的含量：
取标准溶液和供试品溶液注入高效液相色谱仪进行测定，所述高效液相色谱仪条件包括：
色谱柱：
流动相：乙腈-水溶液；
所述色谱柱柱内径250mm×4.6mm，
所述填充剂的粒径为5μm；
所述色谱柱柱温：20-40℃，优选为30℃；
所述色谱柱柱流量为1.0ml/min；
所述进样体积：10μl；
所述水和乙腈溶液体积比为50∶50。
(4)标准曲线的建立：
以邻-苯二酚、对-苯二酚，苯酚，邻-甲酚、间-甲酚、对-甲酚、间-苯二酚为检测指标，配制6种酚类化合物的标准溶液，经高效液相色谱分析，以酚类化合物目标物的色谱峰面积对其相应浓度进行回归分析，得到标准曲线及其回归方程、相关系数，利用最低浓度标液信噪比为3来计算出检测限。由表8可知，所采用的色谱条件使所述6种酚类有化合物色谱峰都分离较好，并且均具有较好的相关性，检测限在0.005μg/cig～0.021μg/cig之间。
表8：所述酚类化合物的标准曲线和检测限
注：检测限以3倍信噪比(s/n＝3)计算。
(5)加热不燃烧卷烟主流烟气中酚类化合物测定结果的计算
以外标法进行酚类化合物的定量分析，即以目标酚类化合物的色谱峰面积对其相应浓度进行回归分析，得到标准曲线。对待测样品进行测定，测得检出目标酚类化合物的色谱峰面积，代入标准曲线，分别得到待测样品中的邻-苯二酚、对-苯二酚，苯酚，邻-甲酚、间、对-甲酚、间-苯二酚的含量。
其中，所述间-甲酚和对-甲酚采用目前的技术手段不能得到完全分离，在色谱图上以一个色谱峰的形势出现，因此以上两种化合物测定其总和，不单独进行测定。
计算结果，卷烟主流烟气中酚类化合物的计算公式为：
式中：
m-每支卷烟主流烟气中酚类成分的传输量，单位为微克每支(μg/cig)；
a-萃取样品中酚类化合物的浓度(μg/ml)；
50-萃取溶液体积(ml)；
n-每次测试抽吸卷烟的支数(cig)；
(6)本发明所述检测方法的方法学考察
对本发明所述的样品进行高、中、低(2μg/cig、1μg/cig、0.5μg/cig)不同浓度水平的标准溶液加标回收率试验，每个样品分别测定5次，计算本方法各种卷烟主流烟气中主要酚类化合物的回收率及加标后测定值的相对标准偏差，结果见表9；由表9可以看出，在3个加标水平上，利用本发明所述方法检测卷烟主流烟气中主要酚类化合物的平均回收率在91.5-103.9％之间；该测试结果的平均相对偏差小于3.2％，说明本发明所述方法的回收率较高，重复性较好
表9：加标回收率考察(n＝5)
(7)检测待测样品
以酚类化合物目标物的色谱峰面积对其相应浓度进行回归分析，得到标准曲线；对制备好的待测样品进行测定，测得检出酚类化合物目标物的色谱峰面积，代入标准曲线，分别得到待测样品中的邻-苯二酚、对-苯二酚，苯酚，邻-甲酚、间、对-甲酚、间-苯二酚的含量，结果见表10。
表10：加热不燃烧卷烟主流烟气中酚类化合物的检测结果
实施例9
(1)制备供试品溶液(同实施例8)；
(2)制备标准溶液(同实施例8)；
(3)高效液相色谱仪测定(同实施例8)；
(4)标准曲线的建立(同实施例8)；
(5)加热不燃烧卷烟主流烟气中酚类化合物测定结果的计算(同实施例8)；
(6)本发明所述检测方法的方法学考察(同实施例8)；
(7)检测待测样品
以酚类化合物目标物的色谱峰面积对其相应浓度进行回归分析，得到标准曲线；对制备好的待测样品进行测定，测得检出酚类化合物目标物的色谱峰面积，代入标准曲线，分别得到待测样品中的邻-苯二酚、对-苯二酚，苯酚，邻-甲酚、间、对-甲酚、间-苯二酚的含量，结果见表11。
表11：加热不燃烧卷烟主流烟气中酚类化合物的检测结果
实施例10
(1)制备供试品溶液(同实施例8)；
(2)制备标准溶液(同实施例8)；
(3)气相色谱仪测定(同实施例8)；
(4)标准曲线的建立(同实施例8)；
(5)加热不燃烧卷烟主流烟气中酚类化合物测定结果的计算(同实施例8)；
(6)本发明所述检测方法的方法学考察(同实施例8)；
(7)检测待测样品
以酚类化合物目标物的色谱峰面积对其相应浓度进行回归分析，得到标准曲线；对制备好的待测样品进行测定，测得检出酚类化合物目标物的色谱峰面积，代入标准曲线，分别得到待测样品中的邻-苯二酚、对-苯二酚，苯酚，邻-甲酚、间、对-甲酚、间-苯二酚的含量，结果见表12。
表12：加热不燃烧卷烟主流烟气中酚类化合物的检测结果
实施例11
(1)制备供试品溶液(同实施例8)；
(2)制备标准溶液(同实施例8)；
(3)气相色谱仪测定(同实施例8)；
(4)标准曲线的建立(同实施例8)；
(5)加热不燃烧卷烟主流烟气中酚类化合物测定结果的计算(同实施例8)；
(6)本发明所述检测方法的方法学考察(同实施例8)；
(7)检测待测样品
以酚类化合物目标物的色谱峰面积对其相应浓度进行回归分析，得到标准曲线；对制备好的待测样品进行测定，测得检出酚类化合物目标物的色谱峰面积，代入标准曲线，分别得到待测样品中的邻-苯二酚、对-苯二酚，苯酚，邻-甲酚、间、对-甲酚、间-苯二酚的含量，结果见表13。
表13：加热不燃烧卷烟主流烟气中酚类化合物的检测结果
实施例12
(1)制备供试品溶液：
使用含有25ml捕集溶液的两个串联捕集瓶在iso抽吸模式下捕集5支卷烟的总粒相物，后将所述两个串联捕集瓶中的溶液于室温下振荡5min后，移取上述得到的溶液2ml，经无水硫酸钠针头过滤器过滤；
(2)制备标准溶液：
分别称取约100mg的烟碱标准品至50ml容器中，经三氯甲烷定容；移取上述溶液经三氯甲烷稀释，得到浓度分别为0.05mg/ml、0.10mg/ml、0.50mg/ml、1.00mg/ml、2.00mg/ml、5.00mg/ml的标准溶液；
(3)采用气相色谱法测定所述加热不燃烧卷烟的主流烟气中游离烟碱的含量：
取标准溶液和供试品溶液注入气相色谱仪进行测定，所述气相色谱仪条件包括：
色谱柱：cp-1301硅胶柱毛细管柱；
柱体积：30m×0.32mm×1.0μm；
进样温度：250℃；
检测器温度：275℃；
进样量1μl；
分流进样的分流比：20∶1；
载气：氦气，流速为1.2ml/min；
所述尾吹气流速为10ml/min；
所述隔垫吹扫流速为10ml/min；
所述初始温度100℃，保持0.5min，以20℃/min速率由100℃升至200℃，保持1.5min。
(4)加热不燃烧卷烟主流烟气中游离烟碱测定结果的计算
以外标法进行游离烟碱的定量分析，即以目标游离烟碱的色谱峰面积对其相应浓度进行回归分析，得到标准曲线。对制备好的的待测样品进行测定，测得检出目标游离烟碱的色谱峰面积，代入标准曲线，分别得到样品中的游离烟碱含量。
计算结果，加热不燃烧卷烟主流烟气中游离烟碱的计算公式为：
式中：
m-每支卷烟主流烟气中游离烟碱的含量，单位为微克每支(μg/cig)；
a-萃取样品中游离烟碱的浓度(μg/ml)；
50-萃取溶液体积(ml)；
n-每次测试抽吸卷烟的支数(cig)；
(4)标准曲线的建立：
以烟碱为检测指标，配制工作标准溶液，经气相色谱分析，以目标物色谱峰面积对其相应浓度进行回归分析，得到标准曲线及其回归方程、相关系数，利用最低浓度标液信噪比为3时计算出检测限。由表14可知，所采用的色谱条件使游离烟碱色谱峰分离较好，并且均具有较好的相关性，检测限为5μg/cig。
表14：本发明所述检测方法中的标准曲线和检测限
注：所述检出限以3倍信噪比(s/n＝3)计算
(5)加热不燃烧卷烟主流烟气中游离烟碱测定结果的计算
以外标法进行游离烟碱的定量分析，即以目标游离烟碱的色谱峰面积对其相应浓度进行回归分析，得到标准曲线。对制备好的的待测样品进行测定，测得检出目标游离烟碱的色谱峰面积，代入标准曲线，分别得到样品中的游离烟碱含量。
计算结果，加热不燃烧卷烟主流烟气中游离烟碱的计算公式为：
式中：
m-每支卷烟主流烟气中游离烟碱的含量，单位为微克每支(μg/cig)；
a-萃取样品中游离烟碱的浓度(μg/ml)；
50-萃取溶液体积(ml)；
n-每次测试抽吸卷烟的支数(cig)；
(6)本发明所述检测方法的方法学考察
对样品进行高、中、低(0.20mg/cig、0.10mg/cig、0.05mg/cig)不同浓度水平的标准溶液加标回收率试验，每个样品分别测定5次，计算本方法各种卷烟主流烟气中游离烟碱的的回收率及加标后测定值的相对标准偏差，结果见表15。由表15可以看出，在3个加标水平上，利用此方法检测卷烟主流烟气中游离烟碱的平均回收率在98.3％～99.7％之间。样品测试结果的平均相对偏差小于3.1％；说明本法的回收率较高，重复性较好。
表15：加标回收率考察(n＝5)
(7)检测待测样品
以目标化合物的色谱峰面积对其相应浓度进行回归分析，得到标准曲线。对制备好的待测样品a进行测定，测得检出目标化合物的色谱峰面积，代入标准曲线，分别得到待测样品中游离烟碱的含量，结果见表16
表16：加热不燃烧卷烟(待测样品a)主流烟气中游离烟碱的检测结果
实施例13
(1)制备供试品溶液(同实施例12)；
(2)制备标准溶液(同实施例12)；
(3)高效液相色谱仪测定(同实施例12)；
(4)标准曲线的建立(同实施例12)；
(5)加热不燃烧卷烟主流烟气中游离烟碱测定结果的计算(同实施例12)；
(6)本发明所述检测方法的方法学考察(同实施例12)；
(7)检测待测样品
以目标化合物的色谱峰面积对其相应浓度进行回归分析，得到标准曲线。对制备好的另一牌号加热不燃烧卷烟的待测样品b进行测定，测得检出目标化合物的色谱峰面积，代入标准曲线，分别得到待测样品中游离烟碱的含量，结果见表17；
表17：加热不燃烧卷烟(待测样品b)主流烟气中游离烟碱的检测结果
实施例14
(1)制备供试品溶液(同实施例12)；
(2)制备标准溶液(同实施例12)；
(3)高效液相色谱仪测定(同实施例12)；
(4)标准曲线的建立(同实施例12)；
(5)加热不燃烧卷烟主流烟气中游离烟碱测定结果的计算(同实施例12)；
(6)本发明所述检测方法的方法学考察(同实施例12)；
(7)检测待测样品
以目标化合物的色谱峰面积对其相应浓度进行回归分析，得到标准曲线。对制备好的另一牌号加热不燃烧卷烟的待测样品c进行测定，测得检出目标化合物的色谱峰面积，代入标准曲线，分别得到待测样品中游离烟碱的含量，结果见表18；
表18：加热不燃烧卷烟(待测样品c)主流烟气中游离烟碱的检测结果
实施例15
(1)制备供试品溶液(同实施例12)；
(2)制备标准溶液(同实施例12)；
(3)高效液相色谱仪测定(同实施例12)；
(4)标准曲线的建立(同实施例12)；
(5)加热不燃烧卷烟主流烟气中游离烟碱测定结果的计算(同实施例12)；
(6)本发明所述检测方法的方法学考察(同实施例12)；
(7)检测待测样品
以目标化合物的色谱峰面积对其相应浓度进行回归分析，得到标准曲线。对制备好的另一牌号加热不燃烧卷烟的待测样品d进行测定，测得检出目标化合物的色谱峰面积，代入标准曲线，分别得到待测样品中游离烟碱的含量，结果见表19；
表19：加热不燃烧卷烟(待测样品d)主流烟气中游离烟碱的检测结果
实施例16：本发明所述检测方法中对卷烟数量的选择
从图17可以看出，本发明所述检测方法的所述步骤(1)中，所述卷烟的数量为3-7支，优选5支。
实施例17：本发明所述检测方法所述步骤(1)中对捕集溶液使用量的选择
从图18可以看出，本发明所述检测方法的所述步骤(1)中捕集溶液的使用量为25ml。
总之，以上对本发明具体实施方式的描述并不限制本发明，本领域技术人员可以根据本发明作出各种改变或变形，只要不脱离本发明的精神，均应属于本发明所附权利要求的范围。