一种基于液质联用的中成药快速鉴别方法与流程

本发明涉及药品监督检验技术领域，具体涉及一种基于液质联用的中成药快速鉴别方法。

背景技术：

中成药是以中药材为原料，在中医药理论指导下，为了预防及治疗疾病的需要，按规定的处方和制剂工艺，将中药材加工、提取或精制而成的制剂。然而由于生产企业众多，价格竞争激烈，有些厂家在利益驱动下，制剂过程中以次充好，偷工减料，添加勾兑的现象也相对增多，有些中成药的价格低于成本价，导致劣币驱逐良币，正规生产企业意见颇大，并且生产的药品的质量和药效得不到保证，还可能会危害人们的身体健康。

对中成药的监督检验一直是药品监督的重要内容，在监督过程中，执法人员仅凭外观根本无法辨别质量的好坏，目前中成药的鉴别方法主要采用薄层色谱法，其不足之处是中成药处方中的每种药材需要单独检测，样品处理比较繁琐，所用有机溶剂多，结果容易出现干扰，专属性不强，同时需要对照品或对照药材。目前少数中成药有液相色谱指纹图谱，由于中成药成分较多，完全靠色谱完成分离还难度较大，不同成分吸收波长不一样，甚至有些成分没有紫外吸收，因此用液相色谱指纹图谱来鉴别中成药具有一定的局限性。

鉴于此，迫切需要一种快速筛查方法，以提高中成药监督检查、抽样、检验的目标性。

技术实现要素：

液质联用(LCMS)是将HPLC的高分离效能与MS的强大结构测定功能组合起来的技术，既有液相色谱对复杂样品较强分析能力的特性，又具有质谱的高灵敏度、高选择性以及提供相对分子质量和丰富结构信息的特性。

本发明的目的在于提供一种基于液质联用的中成药快速鉴别方法，所述方法包括以下步骤：

1)预设数据库；

2)配制供试品溶液

取供试品，加入溶剂，进行超声提取，微孔滤膜滤过，制得供试品溶液；

3)测定

取供试品溶液注入液质联用仪，进行液质联用检测，得到色谱-质谱图并记录测试结果；

4)结果判断

将测试结果同数据库中的信息进行比对，若色谱-质谱图中出现与数据库匹配的峰，则表明供试品中含有目标成分。

进一步地，对所述鉴别方法进行验证，

配制正规样品溶液，在相同的测定条件下，将正规样品溶液注入液质联用仪进行检测，在正规样品的色谱-质谱图中同样检出上述匹配的峰，其中，正规样品是指合格药材按标准规定的工艺生产的样品。

验证的目的是为了进一步证明上述快速鉴别方法的有效性。

进一步地，所述数据库包括：

中药材品种名称、所述中药材包含的一种或多种成分、以及与所述一种或多种成分相对应的分子式、准确分子量、准分子离子质量数、碎片离子质量数、保留时间的信息。

进一步地，中药材品种名称、所述中药材包含的一种或多种成分、以及与所述一种或多种成分相对应的分子式、准确分子量的信息通过查阅文献获得；

准分子离子质量数、碎片离子质量数、保留时间的信息通过对对照品或对照药材进行测试获得。

进一步地，步骤2)中，对供试品的取样量、提取溶剂、提取时间进行优化，使得供试品成分能最大程度提取出来，并能够检出，所述提取溶剂包括甲醇、乙醇、异丙醇、乙酸乙酯、丙酮中任一种。

进一步地，步骤3)中，对色谱条件和质谱条件进行优化，

色谱条件和质谱条件包括色谱柱型号的选择、柱温、流动性组成及比例、质谱的检测器类型、扫描方式、质量采集范围中的一种或几种。

本发明具有如下优点：

1、本发明公开的鉴别方法适用于大部分中成药(矿物药及易挥发性中药除外)；多种中药成分在适合的条件下可以同时分析，鉴别效率高；灵敏度高，样品用量少，仅需简单处理即可进行检测；专属性强，药材所含有的一种或多种成分不仅可以通过液相色谱的保留时间进行分离、定性，当多个成分在同一保留时间均出峰时，还可以通过不同成分的不同分子量进行质谱分离、定性，大大减少假阳性的发生几率；所使用的有机溶剂少，环保高效。

2、方法建立后，即使没有对照品或者对照药材也可以对供试品进行鉴别，通过将供试品的液相色谱质谱数据与数据库进行匹配，以确证供试品中是否含有目标成分，本鉴别方法在实际工作检测分析中大大节省了分析时间。

附图说明

图1是甘草苷的液质保留时间图；图2是甘草苷的一级质谱图；图3是甘草苷的二级质谱图。

图4是甘草酸的液质保留时间图；图5是甘草酸的一级质谱图；图6是甘草酸的二级质谱图。

图7是精氨酸的液质保留时间图；图8是精氨酸的一级质谱图；图9是精氨酸的二级质谱图。

图10是琥珀酸的液质保留时间图；图11是琥珀酸的一级质谱图。

图12是五味子甲素的液质保留时间图；图13是五味子甲素的一级质谱图；图14是五味子甲素的二级质谱图。

图15是五味子醇甲的液质保留时间图；图16是五味子醇甲的一级质谱图；图17是五味子醇甲的二级质谱图。

图18是盐酸麻黄碱/盐酸伪麻黄碱的液质保留时间图；图19是盐酸麻黄碱/盐酸伪麻黄碱的一级质谱图；图20是盐酸麻黄碱/盐酸伪麻黄碱的二级质谱图。

图21是芍药苷的液质保留时间图；图22是芍药苷的一级质谱图；图23是芍药苷的二级质谱图。

图24是6-姜辣素的液质保留时间图；图25是6-姜辣素的一级质谱图；图26是6-姜辣素的二级质谱图。

图27是桂皮醛的液质保留时间图；图28是桂皮醛的一级质谱图。

图29是细辛脂素的液质保留时间图；图30是细辛脂素的一级质谱图；图31是细辛脂素的二级质谱图。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

实施例1

一种基于液质联用的中成药快速鉴别方法，包括以下步骤：

1)预设数据库；

数据库包括：中药材品种名称、中药材所包含的一种或多种成分、与上述一种或多种成分相对应的分子式、准确分子量、准分子离子质量数、碎片离子质量数、保留时间的信息。

其中，中药材品种名称、所述中药材包含的一种或多种成分、以及与所述一种或多种成分相对应的分子式、准确分子量的信息通过查阅文献获得；准分子离子质量数、碎片离子质量数、保留时间的信息通过对对照品或对照药材进行测试获得。

2)配制供试品溶液

取供试品，加入溶剂，进行超声提取，微孔滤膜滤过，制得供试品溶液；

对供试品的取样量、提取溶剂、提取时间进行优化，使得供试品成分能最大程度提取出来，并能够检出。

3)测定

取供试品溶液注入液质联用仪，进行液质联用检测，得到色谱-质谱图并记录测试结果；

4)结果判断

将测试结果同数据库中的信息进行比对，若色谱-质谱图中出现与数据库匹配的峰，则表明供试品中含有目标成分。

具体地，在匹配时，若供试品色谱-质谱图中，出现与数据库保留时间一致的质谱峰且准分子离子质量数、碎片离子质量数均一致，则表明供试品中含有目标成分。

实施例2

为了证明本发明的快速鉴别方法的有效性，对实施例1的鉴别方法进行验证。

配制正规样品(正规样品是指合格药材按标准规定的工艺生产的样品)溶液，在相同的测定条件下，将正规样品溶液注入液质联用仪进行检测，在正规样品的色谱-质谱图中同样检出实施例1步骤4)中匹配的峰，则表明此鉴别方法，包括选定的目标成分及色谱条件、质谱条件，具有有效性，为同一中成药的其他厂家生产的产品的快速鉴别奠定基础。

实施例3

收载在中国药典2015年版，小青龙颗粒，具有解表化饮，止咳平喘之功效，主治风寒水饮，恶寒发热，无汗，喘咳痰稀。小青龙颗粒处方由炙甘草、法半夏、五味子、麻黄、白芍、干姜、桂枝、细辛八味药材组成。

本实施例采用AB LC-Q-TOF预实验。

样品处理：取供试品试验适量(约1g，研细)，加甲醇50ml超声处理10分钟，过滤，即得供试品溶液。

液相条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相为甲醇，0.1％甲酸梯度洗脱，柱温45℃。

质谱条件：正负离子全扫描，质量采集范围100-1500。

进样量1ul；仪器分析时间25分钟。

测试完后，测试结果同数据库中的信息进行比对，若色谱-质谱图中出现与数据库保留时间一致的质谱峰且准分子离子质量数与碎片离子质量数同时也一致，则表明供试品中含有目标成分，结果参见表1。

表1

上述检测方法通过正规样品溶液进行验证，确保该方法的有效性。从输出结果可以清楚地看到供试品中是否含有目的成分，从而得出供试品是否为合格产品的结论。

虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施例对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。