反相高效液相色谱法检毛花苷C标准物质的检测方法与流程

本发明涉及一种毛花苷c标准物质的检测方法,更具体地说，它涉及一种反相高效液相色谱法检毛花苷c标准物质的检测方法。

背景技术：

毛花苷c又名毛花洋地黄苷c，分子式为：c49h76o20，分子量985.12，cas号为17575-22-3，存在于洋地黄等植物中，属于甾体类成分，其结构如下式：

根据文献报导毛花苷c适用于急性和慢性心力衰竭、心房颤动和阵发性室上性心动过速。但目前未有相关检测方法的文献报道，因此有必要探索出更易操作、准确的毛花苷c含量测定方法。

技术实现要素：

针对现有技术存在的不足，本发明的目的在于提供一种反相高效液相色谱法检毛花苷c标准物质的检测方法。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：一种反相高效液相色谱法检毛花苷c标准物质的检测方法，该方法包括以下步骤：

(1)将样品用甲醇溶解；

(2)使用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的液相色谱柱；

(3)高效液相色谱仪设置如下：以乙腈-甲醇(22：14)为流动相a，水为流动相b，梯度洗脱：0～20min，38％a；20～21min，38％a～52％a；21～45min，52％a；45～46min，52％a～38％a；46～51min，38％a；流速为1.0ml/min；柱温30℃；检测波长220nm；进样量5μl。

作为优选的，步骤(1)中，所用的溶剂为hplc级别甲醇，样品配制浓度为0.1mg/ml～1.0mg/ml。

作为优选的，步骤(2)中，所用的固定相是十八烷基硅烷键合硅胶。

作为优选的，步骤(3)中，所用的流动相a为乙腈-甲醇混合溶液，比例为乙腈:甲醇＝22:14；流动相b为水。

作为优选的，步骤(3)中，所用的流动相比例为梯度洗脱：0～20min，38％a；20～21min，38％a～52％a；21～45min，52％a；45～46min，52％a～38％a；46～51min，38％a。

作为优选的，步骤(3)中，流动相的流速为1.0ml/min。

作为优选的，步骤(3)中，柱温为30℃，也可以为室温。

作为优选的，步骤(3)中，所用检测器可以是vwd检测器或dad检测器，检测波长为220nm。

作为优选的，步骤(3)中，样品的进样量可以是1～20μl之间。

本发明相对现有技术相比具有以下优点：(1)高效液相色谱响应值高，检测误差小，精密度和准确性都较高；(2)方法操作简便、实用性强，适合于毛花苷c的含量测定。

附图说明

图1为本发明反相高效液相色谱法检毛花苷c标准物质的检测方法实施例1的液相色谱图。

具体实施方式

下面结合附图对本发明反相高效液相色谱法检毛花苷c标准物质的检测方法实施例做进一步说明。

实施例1：

色谱条件与系统适应性：色谱柱使用agilentzorbaxsb-c18(4.6×150mm，5μm)；流动相为以乙腈-甲醇(22：14)为流动相a，水为流动相b，梯度洗脱：0～20min，38％a；20～21min，38％a～52％a；21～45min，52％a；45～46min，52％a～38％a；46～51min，38％a；流速1.0ml/min；dad检测器，检测波长220nm；柱温为30℃；进样量5μl；

供试品溶液的制备：精密称定毛花苷c0.8mg，精密加入甲醇1ml溶解，即得。

测定法：精密吸取供试品溶液5μl，注入高效液相色谱仪，测定，即得。

结果：测得毛花苷c的归一化法含量为99.6％，峰形对称。样品和空白对照图谱见图1。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，本发明的保护范围并不仅局限于上述实施例，凡属于本发明思路下的技术方案均属于本发明的保护范围，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理前提下的若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

技术特征：

技术总结
本发明公开了一种反相高效液相色谱法测毛花苷C标准物质含量的检测方法，采用反相高效液相色谱法测定，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的液相色谱柱，以乙腈‑甲醇为流动相A，水为流动相B，梯度洗脱；流速为1ml/min；柱温30℃；在220nm下检测，采用面积归一化法计算样品含量。该方法的优点在于：操作简便、精密度高、重现性好，可用于检测毛花苷C。

技术研发人员：费文静;姜悦;沈君子;钱勇;谢天培
受保护的技术使用者：上海佰年诗丹德检测技术有限公司;上海诗丹德标准技术服务有限公司
技术研发日：2018.06.22
技术公布日：2018.12.11