小儿麻龙止咳平喘颗粒的质量控制方法与流程

本发明属于医药质量检测技术领域，具体涉及小儿麻龙止咳平喘颗粒的质量控制方法。

背景技术：

小儿麻龙止咳平喘颗粒的药物组成为：炒苦杏仁1～3份、炒桃仁1～3份、清半夏2～4份、甘草1～2份、生石膏4～9份、麻黄1～2份、地龙1～3份、连翘1～3份、桑白皮1～3份、蜜百部1～3份、前胡1～3份、枇杷叶2～4份，具有清肺化痰，疏散风寒，降气止咳的功效。

其中，麻黄、地龙二药合用，清热宣肺，疏散风寒，解痉止咳，共为君药，苦杏仁、百部、枇杷叶、石膏、清半夏共为臣药，连翘、前胡、桑白皮为佐药。

以下是2015版中国药典一部记载的地龙、枇杷叶、甘草药材鉴别方法。

地龙药材鉴别：取本品粉末lg，加三氯甲烷20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷lml使溶解，作为供试品溶液；另取地龙对照药材lg，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶g薄层板上，以甲苯-丙酮(9：1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯下检视。供试品色谱中，对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

枇杷叶鉴别：取本品粉末lg，加甲醇20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇5ml使溶解，作为供试品溶液。另取枇杷叶对照药材lg，同法制成对照药材溶液；再取熊果酸对照品，加甲醇制成每lml含lmg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各1μl，分别点于同一硅胶g薄层板上，以甲苯-丙酮(5:1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

甘草鉴别：取本品粉末1g，加乙醚40ml，加热回流1小时，滤过，弃去醚液，药渣加甲醇30ml，加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水40ml使溶解，用正丁醇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，用水洗涤3次，弃去水液，正丁酵液蒸干，残渣加甲醇5ml使溶解，作为供试品溶液；另取甘草对照药材1g，同法制成对照药材溶液；再取甘草酸单铵盐对照品，加甲醇制成每lml含2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各1～2μl，分别点于同一用1％氢氧化钠溶液制备的硅胶g薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(15:1:1:2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显相同的橙黄色荧光斑点。

参考药典鉴别方法对地龙、枇杷叶和甘草进行鉴别，阴性有干扰，结果不稳定，因此，本发明对上述鉴别方法进行了改进，可以排除干扰，使得到的结果准确。

技术实现要素：

本发明提供了一种简单、专属性强且重复性好的小儿麻龙止咳平喘颗粒的质量控制方法，为小儿麻龙止咳平喘颗粒的质量提供了保障。

一种小儿麻龙止咳平喘颗粒的质量控制方法，包括如下步骤：

(1)采用薄层色谱法对小儿麻龙止咳平喘颗粒中地龙、枇杷叶和甘草进行定性鉴别；

(2)采用高效液相色谱法对小儿麻龙止咳平喘颗粒中的活性成分苦杏仁苷、麻黄碱和连翘酯苷a进行定量鉴别；

步骤(1)中，所述地龙鉴别的色谱条件为：以地龙为对照药材，以体积比为3～7∶0.5～1.5∶1的正丁醇-冰乙酸-水为展开剂，以茚三酮溶液为显色剂，在105℃时显色；

所述枇杷叶鉴别的色谱条件为：以枇杷叶为对照药材，以体积比为3～6∶4～8∶2～5的三氯甲烷-甲醇-水的下层溶液为展开剂，以10％磷钼酸乙醇溶液为显色剂，在105℃时显色；

所述甘草鉴别的色谱条件为：以甘草为对照药材，以体积比为15～22∶4～8∶2～4∶0.2～0.6∶0.15的三氯甲烷-甲醇-乙酸乙酯-甲酸-水为展开剂，以10％硫酸乙醇溶液为显色剂，在105℃时显色。

步骤(2)中，所述麻黄碱具体为盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱。

本发明先对处方中药材进行了细致的研究，考察了多种方法提取，采用多种展开系统展开，蜜百部均有较好的特征斑点，但多次试验发现其方法受干扰因素较多、稳定性、重复性差；桑白皮也有较好的特征斑点，但均不能排除干扰；生石膏和清半夏其特征斑点均不明显；故对于蜜百部、桑白皮、清半夏和石膏试验研究结果不甚理想，薄层鉴别重复性差或不能排除干扰。而地龙、枇杷叶、甘草的薄层色谱鉴别斑点清晰，重现性好，阴性无干扰。

因此，为了有效控制药品质量，建立科学的质量控制方法，对麻黄、炒苦杏仁、炒桃仁、连翘四味药材进行定量控制，其余8味药材通过实验研究建立3个薄层鉴别项，分别是以甘草、地龙、枇杷叶作为对照药材进行的定性鉴别。

地龙为麻龙止咳平喘颗粒中的君药，地龙主要成分为蛋白质和多肽、氨基酸、核苷酸类的琥珀酸、次黄嘌呤、黄嘌呤、腺嘌呤等，经研究无法建立定量控制指标，因此进行薄层鉴别研究。参考本品药典鉴别方法进行鉴别，阴性有干扰；经多次实验考察苯-醋酸乙酯和正丁醇-冰醋酸-水展开系统，结果以正丁醇-冰醋酸-水(3～7∶0.5～1.5∶1)为展开剂，喷以茚三酮溶液，105℃显色，可以得到较为满意的结果。

枇杷叶中主要含有熊果酸和齐墩果酸，药典中的方法是鉴别熊果酸，本试验应用药典方法鉴别，但阴性有干扰。经实验研究对对照药材和供试品溶液改用氢氧化钠溶液碱化再用醋酸乙酯提取，可排除干扰；经考察，以三氯甲烷-甲醇-水(3～6∶4～8∶2～5)的下层溶液为展开剂，喷以10％磷钼酸乙醇溶液，105℃显色，得到较为满意的结果。

先采用药典的方法鉴别甘草，发现供试品色谱中与对照药材色谱有对应的斑点，但是斑点背景较深，似乎有干扰，因此不采用。本发明以三氯甲烷-甲醇-乙酸乙酯-甲酸-水(15～22∶4～8∶2～4∶0.2～0.6∶0.15)为展开剂，喷10％硫酸乙醇溶液，105℃显色，结果较为满意且重复性、稳定性良好。

根据中药新药质量标准研究含量测定的选定要求，选择与本品功能主治及适应症相关的主要有效成分作为本品的含量测定指标成分，麻黄碱具有抗过敏，能缓解支气管平滑肌痉挛作用，苦杏仁苷具有显著镇咳平喘作用、连翘酯苷a具有抗炎、抗过敏作用。因此拟选定君药麻黄主要成分盐酸麻黄碱、臣药苦杏仁中主要成分苦杏仁苷以及左药连翘中主要成分连翘酯苷a为本品的质量控制的含量测定指标。

小儿麻龙止咳平喘颗粒中含有苦杏仁和桃仁药材，苦杏仁苷是这两味药材的主要有效成分，苦杏仁苷在体内能慢慢分解，逐渐产生微量氢氰酸，能起到轻度抑制呼吸中枢，使呼吸系统趋于安静而呈显著镇咳平喘的功效。因此选择苦杏仁苷作为本品质量控制指标成分，建立了hplc法测定苦杏仁苷的含量，进行了方法学研究。

麻黄为小儿麻龙止咳平喘颗粒处方中的君药，麻黄碱为麻黄药材的主要有效成分，具有平喘止咳作用，因此选择麻黄碱作为本品质量控制指标成分，建立了hplc法同时测定麻黄碱含量的方法，进行了方法学研究。

连翘为麻龙止咳平喘颗粒组成药味之一，连翘酯苷a为该药材的主要有效成分，现代药理研究表明连翘酯苷a具有抗炎、抗过敏作用，有文献报道连翘酯苷a稳定性差，因此选择连翘酯苷a作为本品多个定量控制指标成分之一，建立了hplc法测定连翘酯苷a含量的方法，进行了方法学研究。

步骤(1)中，所述地龙的鉴别方法为：取本品6g加水溶解，再加入三氯甲烷超声处理20～60分钟，分取滤液蒸干，残渣加1ml甲醇溶解，作为供试品溶液；另取地龙对照药材加入20～60ml甲醇，超声处理20～60分钟，滤液蒸干，残渣加甲醇溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法中国药典2015版四部通则0502试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液各10μl，分别点于同一硅胶g薄层板上，在展开剂中展开后取出晾干，喷显色剂，105℃烘至斑点显色清晰，在供试品色谱中，与对照药材色谱相应位置上，显示出相同颜色的斑点。

步骤(1)中，所述枇杷叶的鉴别方法为：取本品6g加水溶解，用1％氢氧化钠溶液调节ph值至8～11，分别用15～30ml醋酸乙酯提取2次，蒸干，残渣加0.5ml甲醇溶解，作为供试品溶液；取枇杷叶对照药材，加水回流提取30～60分钟，滤液用1％氢氧化钠溶液调节ph值至8～11，分别用15～30ml醋酸乙酯提取2次，蒸干，残渣加甲醇溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法中国药典2015版四部通则0502试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液各10μl，分别点于同一硅胶g薄层板上，在展开剂中展开后取出晾干，喷显色剂，105℃烘至斑点显色清晰，在供试品色谱中，与对照药材色谱相应位置上，显示出相同颜色的斑点。

步骤(1)中，所述甘草的鉴别方法为：取本品3g，加甲醇30ml，超声处理20～60分钟，滤液蒸干，残渣加水溶解，分别用10～40ml的石油醚提取3次，合并水层，分别用20～50ml乙酸乙酯提取2次，乙酸乙酯提取液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；称取甘草对照药材，加甲醇超声处理20～60分钟，滤液蒸干，残渣加水溶解，分别用10～30ml乙酸乙酯提取2次，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法中国药典2015版四部通则0502试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液各10μl，分别点于同一硅胶g薄层板上，在展开剂中展开后取出晾干，喷显色剂，105℃烘至斑点显色清晰，在供试品色谱中，与对照药材色谱相应位置上，显示出了相同颜色的斑点。

步骤(2)中，所述苦杏仁苷的高效液相色谱条件为：采用以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，以体积比为15～25∶75～85的甲醇-0.05％磷酸水溶液为流动相，检测波长为210nm，理论板数按苦杏仁苷峰计算不低于6000；

所述麻黄碱的高效液相色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比为2～8∶92～98的乙腈-0.1％磷酸水溶液为流动相，检测波长为210nm，理论板数按盐酸麻黄碱峰计算不低于6000；

所述连翘的高效液相色谱法条件为：采用以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比为30～38∶62～70的甲醇-0.05％磷酸水溶液为流动相，检测波长为330nm，理论板数按连翘酯苷a峰计算不低于5000。

步骤(2)中，所述苦杏仁苷的高效液相色谱鉴别方法为：称取苦杏仁苷对照品，精密称定，加50％甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得对照品溶液；取本品0.2g加入50～80％甲醇25ml，超声处理10～30分钟，用50～80％甲醇补足减失的重量，摇匀，取滤液，即得供试品溶液；吸取苦杏仁苷对照品溶液、供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪进行测定；所述小儿麻龙止咳平喘颗粒中含苦杏仁和桃仁以苦杏仁苷计，其含量不得少于3.9mg/g。

步骤(2)中，所述麻黄碱的高效液相色谱鉴别方法为：称取盐酸麻黄碱对照品和盐酸伪麻黄碱对照品，精密称定，加50％甲醇溶解制成每1ml含0.04mg盐酸麻黄碱和0.01mg盐酸伪麻黄碱的混合溶液，即得对照品溶液；称取本品，精密加入含1.0～2.0％磷酸的50～80％甲醇25ml，超声处理10～40分钟，用含1.0～2.0％磷酸的50～80％甲醇补足减失的重量，取续滤液，即得供试品溶液；精密吸取对照品溶液、供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，进行测定；所述小儿麻龙止咳平喘颗粒中含麻黄以盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱计，其总量不得少于0.5mg/g。

步骤(2)中，所述连翘酯苷a的高效液相色谱鉴别方法为：称取连翘酯苷a对照品，精密称定，加50％甲醇溶解制成每1ml含0.05mg的连翘酯苷a溶液，即得对照品溶液；称取本品，加入50～80％甲醇25ml，超声处理10～40分钟，用50～80％甲醇补足减失的重量，摇匀，取续滤液，即得供试品溶液；精密吸取连翘酯苷a对照品、供试品各10μl，注入液相色谱仪进行测定；所述小儿麻龙止咳平喘颗粒中含连翘以连翘酯苷计，其含量不得少于0.07mg/g。

本发明与现有技术相比，具有以下有益效果：

(1)本发明利用改进过的薄层色谱法对小儿麻龙止咳平喘颗粒中地龙、枇杷叶、甘草进行定性鉴别，得到的薄层色谱鉴别斑点清晰，阴性无干扰，结果较为满意且重复性、稳定性良好；

(2)本发明利用高效液相色谱法测定小儿麻龙止咳平喘颗粒中盐酸麻黄碱、苦杏仁苷和连翘酯苷a的含量，该方法具有分离效果好、灵敏、准确等优点，保证了本品的质量稳定均一性及疗效；

(3)本发明的质量控制方法简单、专属性强、重现性好，有效的保障了小儿麻龙止咳平喘颗粒的质量和疗效，具有很强的实用性。

附图说明

图1为实施例1中地龙的薄层色谱图，其中1为阴性对照品、2为对照品、3-5为供试品；

图2为实施例2中枇杷叶的薄层色谱图，其中1为对照品、2为阴性对照品、3-5为供试品；

图3为实施例3中甘草的薄层色谱图，其中1为对照品、2为阴性对照品、3-5为供试品；

图4为实施例4中苦杏仁苷对照品的高效液相色谱图；

图5为实施例4中苦杏仁苷供试品的高效液相色谱图；

图6为实施例4中苦杏仁苷阴性供试品的高效液相色谱图；

图7为实施例5中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱对照品的高效液相色谱图；

图8为实施例5中麻黄碱供试品的高效液相色谱图；

图9为实施例5中麻黄碱阴性供试品的高效液相色谱图；

图10为实施例6中连翘酯苷a对照品的高效液相色谱图；

图11为实施例6中连翘酯苷a供试品的高效液相色谱图；

图12为实施例6中连翘酯苷a阴性供试品的高效液相色谱图。

具体实施方式

agilent1100高效液相色谱仪，包括g1310a单元泵、g1313a自动进样器、g1314avwd检测器、co-201柱温箱、安捷伦色谱工作站；ab204-n型电子分析天平(mettlertoledo)。

所用甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯，溶液均用0.45μm滤膜滤过；对照药材地龙、枇杷叶和甘草均购自中国食品药品检定研究院。

实施例1

(1)称取0.5g地龙对照药材，加入20ml甲醇，超声处理40分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml溶解得到对照药材溶液；

(2)称取6g研细后的小儿麻龙止咳平喘颗粒，加20ml水溶解，用三氯甲烷30ml，超声处理50分钟，放冷，分取三氯甲烷溶液，蒸干，残渣加甲醇1ml溶解，作为供试品溶液；

(3)称取3g研细后的地龙阴性样品，按照步骤(2)所述方法操作，作为阴性对照溶液；

(4)按照薄层色谱法(中国药典2015版四部通则0502)，取供试品溶液、对照药材溶液和阴性供试品溶液各10μl，分别点于同一硅胶g薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水(5∶1.5∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以茚三酮溶液，105℃烘至斑点显色清晰。

鉴别结果如图1所示，在供试品色谱中，与对照药材色谱相应位置上，显示出了相同颜色的斑点；在阴性对照色谱中与对照药材色谱相应位置上，无相同颜色的斑点。

实施例2

(1)称取1g枇杷叶对照药材，加20ml水，回流提取60分钟，放冷，滤过，滤液用1％氢氧化钠溶液调ph＝11，用醋酸乙酯提取2次，每次30ml，醋酸乙酯提取液蒸干，残渣加甲醇0.5ml溶解，作为对照药材溶液；

(2)称取6g研细后的小儿麻龙止咳平喘颗粒，加水20ml溶解，用1％氢氧化钠溶液调ph＝11，用醋酸乙酯提取2次，每次30ml，醋酸乙酯提取液蒸干，残渣加甲醇0.5ml溶解，作为供试品溶液；

(3)称取2.5g枇杷叶阴性样品研细，按照步骤(2)所述方法操作，作为阴性对照溶液；

(4)按照薄层色谱法(中国药典2015版四部通则0502)试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液和阴性供试品溶液各10μl，分别点于同一硅胶g薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(5∶4∶4)的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷10％磷钼酸乙醇溶液，105℃烘至斑点显色清晰。

鉴别结果如图2所示，供试品色谱中与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的斑点；在阴性对照色谱中与对照药材色谱相应位置上，无相同颜色的斑点。

实施例3

(1)称取0.5g甘草对照药材，加甲醇30ml，超声处理50分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml溶解，用乙酸乙酯提取2次，每次30ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为对照药材溶液；

(2)称取3g研细后的小儿麻龙止咳平喘颗粒，加甲醇30ml，超声处理50分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml溶解，用石油醚(60-90℃)提取3次，每次40ml，合并水液层备用，用乙酸乙酯提取2次，每次40ml，合并乙酸乙酯提取液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；

(3)称取1.5g研细后的甘草阴性样品，按照步骤(2)所述方法操作，作为阴性对照溶液；

(4)按照薄层色谱法中国药典2015版四部通则0502)试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液和阴性对照溶液各10μl，分别点于同一硅胶g薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-乙酸乙酯-甲酸-水(16∶5∶4∶0.3∶0.15)为展开剂，展开，取出，晾干，喷10％硫酸乙醇溶液，105℃烘至斑点显色清晰。

鉴别结果如图3所示，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的斑点；在阴性对照色谱中与对照药材色谱相应位置上，无相同颜色的斑点。

实施例4

(1)称取苦杏仁苷对照品(纯度以85.8％计)12.49mg，加50％甲醇溶解制成浓度为0.50mg/ml的苦杏仁苷对照品储备溶液；再吸取苦杏仁苷对照品储备溶液2.0ml，置10ml量瓶中，用50％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液；

(2)取装量差异项下的本品，研细，取0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入60％甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用60％甲醇补足减失的重量，摇匀，0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液；

(3)按本品处方制法，制得缺味苦杏仁和桃仁的阴性颗粒，按步骤(2)所述方法制备得到阴性供试品溶液；

(4)吸取苦杏仁苷对照品溶液、供试品溶液、阴性供试品溶液各10μl，分别注入液相色谱仪进行测定，其中高效液相色谱的条件为：以dikmadiamonsil-c18(4.6mm×250mm，5μm)为色谱柱、以甲醇-0.05％磷酸水溶液(15∶85)为流动相、检测波长为210nm、体积流量1.0ml/min、柱温30℃。

所得到的对照品溶液、供试品溶液、阴性供试品溶液色谱图分别如图4～6，结果表明：该色谱条件下，对照品溶液中苦杏仁苷的色谱峰峰形良好；供试品溶液中苦杏仁苷相应保留时间处的色谱峰峰形良好，苦杏仁苷色谱峰与杂质峰的分离度大于1.5；阴性供试品溶液中在苦杏仁苷色谱峰相应保留时间处无色谱峰出现，该色谱条件专属性良好。

实施例5

(1)称取盐酸麻黄碱对照品10.12mg，加甲醇溶解制成浓度为0.405mg/ml的盐酸麻黄碱对照品储备溶液，称取盐酸伪麻黄碱对照品6.25mg，加甲醇溶解制成浓度为0.250mg/ml的盐酸伪麻黄碱对照品储备溶液；精密吸取盐酸麻黄碱对照品储备溶液1.0ml和盐酸伪麻黄碱对照品储备溶液0.5ml，置10ml量瓶中，用50％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液；

(2)称取装量差异项下的本品，研细，取1.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入含2.0％磷酸的60％甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理20分钟，放冷，再称定重量，用含2.0％磷酸的60％甲醇补足减失的重量，摇匀，0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液；

(3)按本品处方制法，制得缺味麻黄的阴性颗粒，按步骤(2)所述方法制备得到阴性供试品溶液；

(4)精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪进行测定，其中，色谱条件采用dikmadiamonsil-c18(4.6mm×250mm，5μm)色谱柱、以乙腈-0.1％磷酸水溶液(每100ml中加入三乙胺0.2ml)(8∶92)为流动相，检测波长为210nm，体积流量1.0ml/min，柱温30℃。

所得到的对照品溶液、供试品溶液和阴性供试品溶液色谱图分别如图7～9，结果表明：该色谱条件下，对照品溶液中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的色谱峰峰形良好；供试品溶液中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱相应保留时间处的色谱峰峰形良好，盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱色谱峰与杂质峰的分离度大于1.5；阴性供试品溶液中在盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱色谱峰相应保留时间处无色谱峰出现，该色谱条件专属性良好。

实施例6

(1)精密称取连翘酯苷a对照品12.42mg(纯度以94.1％计)，加甲醇溶解制成浓度为0.497mg/ml的连翘酯苷a对照品储备溶液。精密吸取连翘酯苷a对照品储备溶液1.0ml，置10ml量瓶中，用50％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液；

(2)取装量差异项下的本品，研细，取约0.7g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入80％甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液；

(3)按本品处方制法，制得缺味连翘药材的阴性颗粒，按步骤(2)所述方法制备得到阴性供试品溶液；

(4)精密吸取连翘酯苷a对照品、供试品及阴性对照溶液各10μl，注入液相色谱仪进行测定，高效液相色谱条件采用dikmadiamonsil-c18(4.6mm×250mm，5μm)色谱柱、以甲醇-0.05％磷酸水溶液(38∶62)为流动相、检测波长为330nm、体积流量1.0ml/min、柱温30℃。

所得到的对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液色谱图分别如图10～12所示，结果表明：该色谱条件下，对照品溶液中连翘酯苷a的色谱峰峰形良好；供试品溶液中连翘酯苷a相应保留时间处的色谱峰峰形良好，连翘酯苷a色谱峰与杂质峰的分离度大于1.5；阴性供试品溶液中在连翘酯苷a色谱峰相应保留时间处无色谱峰出现，该色谱条件专属性良好。