本发明涉及药物杂质元素分析方法
技术领域：
，尤其涉及一种测定瑞舒伐他汀钙及其组合物中铅、钒、镉、钴、镍含量的方法。
背景技术：
：瑞舒伐他汀钙是第二代他汀类强效降脂药物，在临床上主要用于原发性高胆固醇血症、家族性高胆固醇血症及其他原因引起的脂质紊乱等的治疗。随着人类健康意识的不断提高，人们对瑞舒伐他汀钙的开发利用日益凸现，瑞舒伐他汀钙制剂经常被直接用于西医处方治病，其质量好坏不仅直接关系到患者的用药安全有效。因此，瑞舒伐他汀钙制剂中元素杂质含量分析研究，可为控制瑞舒伐他汀钙制剂质量提供依据。技术实现要素：基于
背景技术：
存在的技术问题，本发明提出了一种测定瑞舒伐他汀钙及其组合物中铅、钒、镉、钴、镍含量的方法，通过对瑞舒伐他汀钙及其组合物中的元素检测方法进行设计优化，实现了样品消解完全均匀，达到了检测准确、重现性好的元素测定效果，完善了瑞舒伐他汀钙及其组合物质量评价体系。本发明提出的一种测定瑞舒伐他汀钙及其组合物中铅、钒、镉、钴、镍含量的方法，包括：将瑞舒伐他汀钙或其组合物进行微波消解后得到消解液，再将消解液赶酸后用去离子水稀释得到样品溶液；将铅、钒、镉、钴、镍标准品分别配制得到不同浓度的铅、镉、钴、钒、镍标准曲线溶液；采用石墨炉原子吸收光谱法对所述不同浓度的铅、镉、钴、钒、镍标准曲线溶液进行检测，测定出对应不同浓度的铅、钒、镉、钴、镍标准曲线溶液的吸光度，分别以铅、镉、钴、钒、镍的浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，制定出标准曲线；再采用石墨炉原子吸收光谱法对所述样品溶液进行检测，测定出样品溶液中铅、钒、镉、钴、镍的吸光度，并根据所述标准曲线计算，得到瑞舒伐他汀钙及其组合物中铅、钒、镉、钴、镍的含量。瑞舒伐他汀钙组合物包括瑞舒伐他汀钙与药学上可接受的辅料制备的组合物，按剂型有片剂(含分散片)、胶囊。代表性的瑞舒伐他汀钙片作为瑞舒伐他汀钙的组合物中一种，其药学上可接受的辅料可参见cn00122484，即三碱价磷酸盐和/或一种或多种填充剂、粘合剂、崩解剂或润滑剂。合适的填充剂包括，例如：乳糖、糖、淀粉、改性淀粉、甘露糖醇、山梨糖醇、无机盐、纤维素衍生物(例如微晶纤维素、纤维素)、硫酸钙、木糖醇和乳糖醇。合适的粘合剂包括，例如：聚乙烯吡咯烷酮、乳糖、淀粉、改性淀粉、糖、阿拉伯树胶、黄芪胶、瓜尔胶、果胶、蜡粘合剂、微晶纤维素、甲基纤维素、羧甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、共聚维酮、明胶和藻酸钠。合适的崩解剂包括，例如：交联羧甲基纤维素钠(crosscarmellosesodium)、交联聚乙烯聚吡咯烷酮(crospovidone)、聚乙烯吡咯烷酮、淀粉羟基乙酸钠、玉米淀粉、微晶纤维素、羟丙基甲基纤维素和羟丙基纤维素。合适的润滑剂包括，例如：硬脂酸镁、硬脂酸、棕榈酸、硬脂酸钙、滑石、巴西棕榈蜡、氢化植物油、矿物油、聚乙二醇和十八烷基富马酸钠。也可以加入的其它常规赋形剂包括防腐剂、稳定剂、抗氧化剂、二氧化硅流动调节剂、防粘剂或助流剂。优选地，所述将瑞舒伐他汀钙或其组合物进行微波消解得到消解液具体包括：将瑞舒伐他汀钙或其组合物置于微波消解罐中，加入由硝酸、盐酸和氢氟酸组成的消解试剂，密封后置于微波消解仪中进行微波消解，得到消解液，其中微波消解升温程序为：升温至120℃，保持5min，升温至160℃，保持120min；所述将消解液赶酸具体包括：将消解液加热至130℃进行赶酸处理。优选地，所述消解试剂中硝酸、盐酸和氢氟酸的体积比为3.125:3.125:1。优选地，测定瑞舒伐他汀钙及其组合物中铅的含量时：将铅标准溶液用2％硝酸水溶液稀释成不少于三个浓度点的铅标准曲线溶液，且铅标准曲线溶液浓度范围为2.5-20ng/ml；采用石墨炉原子吸收光谱法对上述配制的铅标准曲线溶液和所述样品溶液进行检测时，采用aa-6800型原子吸收分光光度计；工作波长为283.3nm；保护气为高纯氩气；制冷水温度为25℃；石墨管类型为热解涂层；背景校正方式为bgc-d2，信号处理为峰高；进样为40μl待测溶液和10μl基体改进剂，基体改性剂为1％磷酸二氢铵和0.2％硝酸镁溶液；石墨炉升温程序如下：干燥阶段载气流量为100ml/min，灰化及净化阶段载气流量为1000ml/min，原子化阶段停气；干燥温度为150℃和250℃，时间为20s、10s；灰化温度为800℃，时间为23s；原子化温度为2400℃，时间为2s；净化温度为2500℃，时间为2s。优选地，测定瑞舒伐他汀钙及其组合物中钒的含量时：将钒标准溶液用2％硝酸水溶液稀释成不少于三个浓度点的钒标准曲线溶液，且钒标准曲线溶液浓度范围为25-200ng/ml；采用石墨炉原子吸收光谱法对上述配制的钒标准曲线溶液和样品溶液进行检测时，采用aa-6800型原子吸收分光光度计；工作波长为318.4nm；保护气为高纯氩气；制冷水温度为25℃；石墨管类型为热解涂层；背景校正方式为bgc-d2，信号处理为峰高；进样为30μl待测溶液；石墨炉升温程序如下：干燥阶段载气流量为100ml/min，灰化及净化阶段载气流量为1000ml/min，原子化阶段停气；干燥温度为150℃和250℃，时间为20s、10s；灰化温度为900℃，时间为23s；原子化温度为2600℃，时间为2s；净化温度为2600℃，时间为2s。优选地，测定瑞舒伐他汀钙及其组合物中镉的含量时：将镉标准溶液用2％硝酸水溶液稀释成不少于三个浓度点的镉标准曲线溶液，且镉标准曲线溶液浓度范围为0.4-2.5ng/ml；采用石墨炉原子吸收光谱法对上述配制的镉标准曲线溶液和样品溶液进行检测时，采用aa-6800型原子吸收分光光度计；工作波长为228.8nm；保护气为高纯氩气；制冷水温度为25℃；石墨管类型为热解涂层；背景校正方式为bgc-d2，信号处理为峰高；进样为10μl待测溶液和5μl基体改进剂，基体改性剂为1％磷酸二氢铵和0.2％硝酸镁溶液；石墨炉升温程序如下：干燥阶段载气流量为100ml/min，灰化及净化阶段载气流量为1000ml/min，原子化阶段停气；干燥温度为150℃和250℃，时间为20s、10s；灰化温度为500℃，时间为23s；原子化温度为2200℃，时间为2s；净化温度为2400℃，时间为2s。优选地，测定瑞舒伐他汀钙及其组合物中钴的含量时：将钴标准溶液用2％硝酸水溶液稀释成不少于三个浓度点的钴标准曲线溶液，且钴标准曲线溶液浓度范围为4-30ng/ml；采用石墨炉原子吸收光谱法对上述配制的钴标准曲线溶液和样品溶液进行检测时，采用aa-6800型原子吸收分光光度计；工作波长为240.7nm；保护气为高纯氩气；制冷水温度为25℃；石墨管类型为热解涂层；背景校正方式为bgc-d2，信号处理为峰高；进样为15μl待测溶液；石墨炉升温程序如下：灰化及净化阶段载气流量为1000ml/min，原子化阶段停气；干燥温度为150℃和250℃，时间为20s、10s；灰化温度为400℃，时间为23s；原子化温度为2500℃，时间为3s；净化温度为2700℃，时间为2s。优选地，测定瑞舒伐他汀钙及其组合物中镍的含量时：将镍标准溶液用2％硝酸水溶液稀释成不少于三个浓度点的镍标准曲线溶液，且镍标准曲线溶液浓度范围为5-40ng/ml；采用石墨炉原子吸收光谱法对上述配制的镍标准曲线溶液和样品溶液进行检测时，采用aa-6800型原子吸收分光光度计；工作波长为232.0nm；保护气为高纯氩气；制冷水温度为25℃；石墨管类型为热解涂层；背景校正方式为bgc-d2，信号处理为峰高；进样为20μl待测溶液；石墨炉升温程序如下：干燥阶段载气流量为100ml/min，灰化及净化阶段载气流量为1000ml/min，原子化阶段停气；干燥温度为150℃和250℃，时间为20s、10s；灰化温度为800℃，时间为23s；原子化温度为2500℃，时间为2s；净化温度为2500℃，时间为2s。与现有技术相比本发明方法具有如下优良效果：(1)采用微波消解方式可以减少样品与强酸的使用量、提高消解能力，且样品待测元素损失少、对操作人员危害小、易于操作：对瑞舒伐他汀钙及其组合物这种特定制剂，复合酸的消解体系完全适用，消解液澄清、透明、没有沉淀，同时由于消解样品所用试剂少，赶酸过程快速简单，确定的赶酸温度130℃的回收率高，空白值低，测定结果准确。(2)本发明进一步结合使用石墨炉原子吸收光谱法进行铅、钒、镉、钴、镍含量的测试采用优化的原子吸收光谱法相关升温程序，灰化温度，原子化温度测定之后，回收率高，测定结果准确，具有操作简便、快速、准确、灵敏度及重复性好的优点。(3)本发明实现了瑞舒伐他汀钙及其组合物样品的多元素同时测定，通过重复性、准确度、耐用性等实验，结果证实了该方法能够准确测定铅、钒、镉、钴、镍等元素的含量。具体实施方式以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。以下实施例中所使用的使用仪器中，石墨炉原子吸收分光光度计型号：aa-6800；微波消解仪型号：md6cn；电热板型号：db-2；以下实施例中所使用的试剂中，硝酸级别：优级纯；磷酸二氢铵级别：分析纯；盐酸级别：优级纯；去离子水级别：milliq；氢氟酸级别：优级纯。以下实施例中所使用的样品和对照品中，瑞舒伐他汀钙片批号20170201，来源为合肥合源药业有限公司；处方组成为瑞舒伐他汀钙、微晶纤维素、乳糖、轻质氧化镁、聚维酮、羟丙基纤维素，薄膜包衣预混剂(胃溶型，欧巴代)；铅、镉、钴、镍、钒、汞、砷标准溶液批号分别为177011-2、176045-2、175048-2、176039-1、176020-1、175064-4、175068-4，含量均为1000μg/ml，来源均为国家有色金属及电子材料分析测试中心。实施例1瑞舒伐他汀钙片中铅含量的测定参照ichq3d元素杂质指南和ichq9质量风险管理来控制瑞舒伐他汀钙片中的元素杂质铅，铅的限度为j＝0.5ppm。一、试剂的准备1.1样品溶液的配置：取瑞舒伐他汀钙片置玛瑙研钵中，充分研磨，精密称取0.2g，置消解罐中，加入2.5ml硝酸、2.5ml盐酸和0.8ml氢氟酸，硝酸浓度为65％，氢氟酸浓度为40％，盐酸浓度为37％，密封后置微波消解仪中，按消解程序消解，将消解液转移至25ml小烧杯中，并置130℃加热板上赶酸至剩余约1ml，将赶酸后的溶液转移至10ml量瓶中，用水作为溶剂，稀释至刻度，摇匀，即得瑞舒伐他汀钙浓度为20mg/ml的样品溶液。消解程序如表1所示：表1微波消解升温程序步骤控制温度(℃)恒温时间(min)总功率成数11205521601205具体关于消解试剂和消解程序的筛选过程记录如下：1.1.1消解方法筛选取瑞舒伐他汀钙片3片，称定重量，置消解罐中，加入硝酸5.0ml，密封后置微波消解仪中，选择如下消解程序：步骤控制温度(℃)恒温时间(min)总功率成数11205521601205结论：5份样品均有颗粒状沉淀，悬浮液呈淡黄色，样品消解不彻底。原因：a.样品量偏多；b.片剂未经碾碎；c.消解体系不合适。1.1.2消解体系筛选取瑞舒伐他汀钙片置玛瑙研钵中，充分研磨，精密称取0.2g，置消解罐中，按如下表中消解体系加入适量酸，同法配制2份或3份，密封后置微波消解仪中，选择对应的程序进行消解，观察消解液性状。取瑞舒伐他汀钙片置玛瑙研钵中，充分研磨，精密称取0.2g，置250ml小烧杯中，加10.0mlhno3冷消解2h，再加入2.5mlhclo4，置120℃加热板加热1.5h，升温至160℃加热2h.，观察消解液性状。消解体系消解方式结果10.0mlhno3+2.5mlhclo4湿法消解消解液有沉淀结论：瑞舒伐他汀钙片仅在消解体系(2.0mlhno3+2.0mlhcl+0.7mlhf)中可以得到澄明消解液，即样品消解充分。因原装消解罐个数和新配置消解罐耐温限制，故选择消解体系(2.5mlhno3+2.5mlhcl+0.8mlhf)进行实验。1.1.3消解程序筛选取瑞舒伐他汀钙片置玛瑙研钵中，充分研磨，精密称取0.2g，置消解罐中，加入2.5ml硝酸、2.5ml盐酸和0.8ml氢氟酸，密封后置微波消解仪中。同法配置5份样品。按如下表中程序进行消解，观察消解液性状。结论：消解程序5样品消解更充分，故选择该程序进行后续实验。为保护石墨管的使用寿命，降低溶液酸度，使之达到与标准溶液酸度接近的程度，样品经微波消解后需赶酸至1ml。综合1.1.1-1.1.3，确定样品的消解方法为：取瑞舒伐他汀钙片置玛瑙研钵中，充分研磨，精密称取0.2g，置消解罐中，加入2.5ml硝酸、2.5ml盐酸和0.8ml氢氟酸，硝酸浓度为65％，氢氟酸浓度为40％，盐酸浓度为37％，密封后置微波消解仪中，按消解程序消解，将消解液转移至25ml小烧杯中，并置130℃加热板上赶酸至剩余约1ml，将赶酸后的溶液转移至10ml量瓶中，用水作为溶剂，稀释至刻度，摇匀，即得瑞舒伐他汀钙浓度为20mg/ml的样品溶液。1.2混合标准品储备液的配制：分别精密移取100μl铅、镉和500μl钴标准溶液(1000μg/ml)分别置于20ml量程的容量瓶中加2％硝酸水溶液稀释至刻度，摇匀即得铅、镉、钴标准品储备液，再分别移取500μl钒、镍标准溶液(1000μg/ml)分别置于10ml量程的容量瓶中加2％硝酸水溶液稀释至刻度，摇匀即得钒、镍标准品储备液；分别移取1.0ml铅、镉和2.0ml钴、钒以及4ml镍标准品储备液置于同一50ml量程的容量瓶中加2％硝酸水溶液稀释至刻度，摇匀，即得混合标准品储备液。1.3100％水平样品溶液的配置：取瑞舒伐他汀钙片置玛瑙研钵中，充分研磨，精密称取0.2g，置消解罐中，移取1.0ml混合标准品储备液l，加入2.5ml硝酸、2.5ml盐酸和0.8ml氢氟酸，密封后置微波消解仪中，按表1消解程序消解，将消解液转移至25ml小烧杯中，并置130℃加热板上赶酸至剩余约1ml，将赶酸后的溶液转移至10ml量瓶中，用水作为溶剂，稀释至刻度，摇匀，即得100％水平样品溶液，用100％-s表示。1.450％水平样品溶液的配置：取瑞舒伐他汀钙片置玛瑙研钵中，充分研磨，精密称取0.2g，置消解罐中，移取0.5ml混合标准品储备液，加入2.5ml硝酸、2.5ml盐酸和0.8ml氢氟酸，密封后置微波消解仪中，按表1消解程序消解，将消解液转移至25ml小烧杯中，并置130℃加热板上赶酸至剩余约1ml，将赶酸后的溶液转移至10ml量瓶中，用水作为溶剂，稀释至刻度，摇匀，即得50％水平样品溶液，用50％-s表示。1.5150％水平样品溶液的配置：除了移取1.5ml混合标准品储备液这一步骤，其他配置步骤和1.4中配置50％水平样品溶液的步骤相同，得到150％水平样品溶液，用150％-s表示。1.6样品空白溶液的配置：取2.5ml硝酸、2.5ml盐酸和0.8ml氢氟酸置消解罐中，按微波消解程序进行消解，将消解液转移至25ml小烧杯中，置130℃加热板上赶酸至剩余约1ml，将赶酸后的溶液转移至10ml量瓶中，用少量水润洗小烧杯，合并润洗液，加水稀释至刻度，摇匀，即得样品空白溶液。1.7标准空白溶液的配置：量取20ml硝酸，置于1000ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得2％硝酸水溶液，即为标准空白溶液，同时亦作为定容标准曲线溶液所用的2％硝酸水溶液。1.8铅标准曲线溶液的配置：精密移取100μl铅标准溶液(1000μg/ml)置于100ml量程的容量瓶中，加2％硝酸水溶液稀释至刻度，摇匀得到母液，精密量取5ml该母液至于50ml量瓶中加2％硝酸水溶液稀释至刻度，摇匀，即得100ng/ml的铅标准曲线储备液；精密移取铅标准曲线储备液0.25ml、0.5ml、1.0ml、1.5ml、2.0ml，分别置于10ml量瓶中，加2％硝酸水溶液稀释至刻度，摇匀，即得浓度分别为2.5ng/ml、5ng/ml、10ng/ml、15ng/ml、20ng/ml的铅标准曲线溶液，分别用std1、std2、std3、std4、std5表示。二、检测方法的建立2.1检测条件的确定采用石墨炉原子吸收光谱法对上述配制的铅标准曲线溶液进行检测，制定出标准曲线；再采用石墨炉原子吸收光谱法测定出样品溶液的吸光度，并根据所述标准曲线计算得到瑞舒伐他汀钙片中铅的含量。具体的，取所述标准空白溶液、铅标准曲线溶液、样品空白溶液和样品溶液各40μl，并分别加入10μl基体改性剂作为进样，基体改性剂为1wt％磷酸二氢铵和0.2wt％硝酸镁的水溶液(取磷酸二氢铵1.0g和硝酸镁0.2g，置于100ml量瓶中，加水适量使之溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得基体改性剂)，具体进样时采用自动进样，先进样品液，后进基体改进剂，样品液按顺序依次为标准空白溶液、标准曲线溶液、样品空白溶液和样品溶液。检测时，原子吸收分光光度计的工作条件为：波长为283.3nm；保护气为高纯氩气；制冷水温度为25℃；石墨管类型为热解涂层；背景校正方式为bgc-d2；信号处理为峰高；进样体积为待测溶液40μl+基体改进剂10μl；石墨炉升温程序如表2所示：表2石墨炉原子吸收分光光度计升温程序2.2标准曲线绘制将标准空白溶液及3组铅标准曲线溶液作为样品液依次进样，在本实施例2.1检测条件下进行检测，测定吸光度，以元素浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，系统自动绘制结果如表3所示：表3铅元素的标准曲线汇总由表3可以看出，在本发明检测方法条件下，铅在2.5ng/ml～20ng/ml的浓度范围内与其吸光度均呈现良好的线性关系。具体实验数据记录如下表3.1、3.2、3.3、3.4所示：表3.1铅元素的标准曲线-linearity1表3.2铅元素的标准曲线-linearity2表3.3铅元素的标准曲线-linearity3表3.4铅元素的标准曲线-linearity-total3.3样品检测：按本实施例1.1配置样品溶液的方法将6批中试规模的舒伐他汀钙片样品配置成6份样品溶液，将样品空白溶液和6份样品溶液依次进样，在本实施例2.1检测条件下进行检测，测得铅的吸光度，利用本实施例2.2中绘制的标准曲线，计算出铅元素的浓度，进而计算出瑞舒伐他汀钙片中铅含量，结果如下表4所示：表4六批中试规模样品检测试验结果汇总*n.d.，未检出；最低检测限：铅：0.04ppm。由表4可以看出，6批中试规模的样品中均未检出铅元素。本发明瑞舒伐他汀钙片产品中铅元素主要来源于原料合成工艺中用到的设备及管道，在合成步骤中不存在有目的性的铅元素作为成分或试剂、催化剂加入。建立铅元素的定量分析方法，且方法通过验证，对6批中试规模的瑞舒伐他汀钙片样品检测，均未检出。因此，可确定本品原料合成工艺及制剂生产工艺，可以稳定生产出铅元素合格的样品，铅超出限度的风险极低，不作为本品的关键质量属性定入质量标准。三、检测方法的验证3.1检出限实验将标准空白溶液作为样品液进样，在本实施例2.1检测条件下进行检测，连续检测11次，记录吸光度，结果如下表5所示：表5检出限试验结果汇总由表5可以看出，标准空白溶液的吸光度sd为0.006084，根据线性1公式计算出检测限浓度为0.7500ng/ml。铅限度测定样品溶液浓度为20mg/ml，铅限度为0.5ppm，限度浓度为10ng/ml，检测限浓度为限度浓度的7.50％，相当于可检出样品中0.04ppm的铅，满足检测需求，即本发明所述检测方法有较高的灵敏度。3.2定量限实验定量限浓度需满足精密度和准确度要求，根据所获得的标准曲线，将2.5ng/ml作为铅的定量限，将浓度为2.5ng/ml的铅标准曲线溶液作为样品液进样，在本实施例2.1检测条件下连续检测6次，记录吸光度，平均值与rsd由工作站自动计算，结果如下表6所示：表6定量限试验结果汇总由表6可以看出，当定量限浓度为2.5ng/ml时，相当于可检出样品(c：20mg/ml)中0.13ppm的铅，精密度rsd为1.99％，准确度在76.8％～107.5％，均符合要求；且定量限浓度为限度浓度(10ng/ml)的25％，满足检测需求。故定量限浓度确定为2.5ng/ml。3.3重复性实验将1份样品空白溶液、6份样品溶液及6份100％水平样品溶液作为样品液依次进样，在本实施例2.1检测条件下进行检测，记录吸光度，结果如下表7所示：表7重复性试验结果汇总由表7可以看出，6份100％水平样品溶液，平均检出量为0.51ppm，rsd为1.24％，小于20％；6份不加标准溶液的样品溶液中均未检出铅元素。表明本发明检测方法重复性良好。3.4准确性试验将1份样品空白溶液、3份50％水平样品溶液、3份100％水平样品溶液和3份150％水平样品溶液作为样品液依次进样，在本实施例2.1检测条件下进行检测，记录吸光度，试验中，用回收率的试验结果作为准确度考察指标，结果如下表8所示：表8准确度试验结果汇总由表8可以看出，在50％～150％限度浓度水平内，9份样品溶液铅元素回收率范围为95.3％～107.2％(平均101.7％)，均在70％～150％范围内，rsd是4.00％，表明本发明检测方法准确度良好。3.5耐用性试验将标准溶液std3、样品溶液、100％水平样品溶液分别于室温下静置0h、1h、2h、4h和6h后，在本实施例2.1检测条件下进行检测，结果如下表9所示：表9稳定性试验结果汇总由表9可以看出，标准溶液std3和100％水平样品溶液在6h内浓度rsd均在15％范围内，样品溶液在6h内铅元素均无检出，故可认为溶液在6h内稳定性良好。实施例2瑞舒伐他汀钙片中钒含量的测定参照ichq3d元素杂质指南和ichq9质量风险管理来控制瑞舒伐他汀钙片中的元素杂质钒，钒的限度为j＝10ppm。一、试剂的准备1.1样品溶液的配置：同实施例1中1.1的方法配置得到母液，再将5ml该母液置于10ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即瑞舒伐他汀钙浓度为10mg/ml的样品溶液；1.2混合标准品储备液的配制：同实施例1中1.2的方法。1.3100％水平样品溶液的配置：同实施例1中1.3的方法配置得到母液，再将5ml该母液置于10ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得100％水平样品溶液，用100％-s表示。1.450％水平样品溶液的配置：同实施例1中1.4的方法配置得到母液，再将5ml该母液置于10ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得50％水平样品溶液，用50％-s表示。1.5150％水平样品溶液的配置：同实施例1中1.5的方法配置得到母液，再将5ml该母液置于10ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得150％水平样品溶液，用150％-s表示。1.6样品空白溶液的配置：同实施例1中1.6的方法得到母液，再将5ml该母液置于10ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得样品空白溶液。1.7标准空白溶液的配置：同实施例1中1.7的方法。1.8钒标准曲线溶液的配置：将铅标准溶液(1000μg/ml)替换为钒标准溶液(1000μg/ml)，精密移取100μl钒标准溶液置于100ml量程的容量瓶中，加2％硝酸水溶液稀释至刻度，摇匀，即得1000ng/ml的钒标准曲线储备液，其它同实施例1中1.8的方法，得到浓度分别为25ng/ml、50ng/ml、100ng/ml、150ng/ml、200ng/ml的钒标准曲线溶液，分别用std1、std2、std3、std4、std5表示。。二、检测方法的建立2.1检测条件的确定采用石墨炉原子吸收光谱法对上述配制的钒标准曲线溶液进行检测，制定出标准曲线；再采用石墨炉原子吸收光谱法测定出样品溶液的吸光度，并根据所述标准曲线计算得到瑞舒伐他汀钙片中钒的含量。具体的，取所述标准空白溶液、钒标准曲线溶液、样品空白溶液和样品溶液各30μl，具体进样时采用自动进样进样品液，样品液按顺序依次为标准空白溶液、标准曲线溶液、样品空白溶液和样品溶液。检测时，原子吸收分光光度计的工作条件为：波长为318.4nm；保护气为高纯氩气；制冷水温度为25℃；石墨管类型为热解涂层；背景校正方式为bgc-d2；信号处理为峰高；进样体积为待测溶液30μl；石墨炉升温程序如表10所示：表10石墨炉原子吸收分光光度计升温程序2.2标准曲线绘制将标准空白溶液及3组钒标准曲线溶液作为样品液依次进样，在本实施例2.1检测条件下进行检测，测定吸光度，以元素浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，系统自动绘制结果如表11所示：表11钒元素的标准曲线汇总由表11可以看出，在本发明检测方法条件下，钒在25ng/ml～200ng/ml的浓度范围内与其吸光度均呈现良好的线性关系。3.3样品检测：按本实施例1.1配置样品溶液的方法将6批中试规模的舒伐他汀钙片样品配置成6份样品溶液，将样品空白溶液和6份样品溶液依次进样，在本实施例2.1检测条件下进行检测，测得钒的吸光度，利用2.2中绘制的标准曲线，计算出钒元素的浓度，进而计算出瑞舒伐他汀钙片中钒含量，结果如下表12所示：表12六批中试规模样品检测试验结果汇总*n.d.，未检出；最低检测限：钒：0.04ppm。由表12可以看出，6批中试规模的样品中均未检出钒元素。本发明瑞舒伐他汀钙片产品中钒元素主要来源于原料合成工艺中用到的设备及管道，在合成步骤中不存在有目的性的钒元素作为成分或试剂、催化剂加入。建立钒元素的定量分析方法，且方法通过验证，对6批中试规模的瑞舒伐他汀钙片样品检测，均未检出。因此，可确定本品原料合成工艺及制剂生产工艺，可以稳定生产出钒元素合格的样品，钒超出限度的风险极低，不作为本品的关键质量属性定入质量标准。三、检测方法的验证检出限、定量限、重复性、准确性、耐用性实验同实施例1中3.1、3.2、3.3、3.4、3.5中实验方法，其结果汇总如下表13所示：表13检测方法验证结果汇总由表13可以看出，本发明所述检测方法灵敏度较高，检出限满足检测要求，重复性、准确度、耐用性良好。实施例3瑞舒伐他汀钙片中镉含量的测定参照ichq3d元素杂质指南和ichq9质量风险管理来控制瑞舒伐他汀钙片中的元素杂质镉，镉的限度为j＝0.5ppm。一、试剂的准备1.1样品溶液的配置：同实施例1中1.1的方法配置得到母液，再将1.5ml该母液置于10ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得瑞舒伐他汀钙浓度为3mg/ml的样品溶液；1.2混合标准品储备液的配制：同实施例1中1.2的方法。1.3100％水平样品溶液的配置：同实施例1中1.3的方法配置得到母液，再将1.5ml该母液置于10ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得100％水平样品溶液，用100％-s表示。1.450％水平样品溶液的配置：同实施例1中1.4的方法配置得到母液，再将1.5ml该母液置于10ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得50％水平样品溶液，用50％-s表示。1.5150％水平样品溶液的配置：同实施例1中1.5的方法配置得到母液，再将1.5ml该母液置于10ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得150％水平样品溶液，用150％-s表示。1.6样品空白溶液的配置：同实施例1中1.6的方法得到母液，再将1.5ml该母液置于10ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得样品空白溶液。1.7标准空白溶液的配置：同实施例1中1.7的方法。1.8镉标准曲线溶液的配置：将铅标准溶液(1000μg/ml)替换为镉标准溶液(1000μg/ml)，精密移取100μl镉标准溶液置于100ml量程的容量瓶中，加2％硝酸水溶液稀释至刻度，摇匀得到母液，精密量取1ml该母液至于50ml量瓶中加2％硝酸水溶液稀释至刻度，摇匀，，即得20ng/ml的镉标准曲线储备液，精密移取镉标准曲线储备液200μl、500μl、750μl、1000μl、1250μl，分别置10ml量瓶中，加2％硝酸水溶液稀释至刻度，摇匀，即得浓度分别为0.4ng/ml、1.0ng/ml、1.5ng/ml、2.0ng/ml、2.5ng/ml的镉标准曲线溶液，分别用std1、std2、std3、std4、std5表示。。二、检测方法的建立2.1检测条件的确定采用石墨炉原子吸收光谱法对上述配制的镉标准曲线溶液进行检测，制定出标准曲线；再采用石墨炉原子吸收光谱法测定出样品溶液的吸光度，并根据所述标准曲线计算得到瑞舒伐他汀钙片中镉的含量。具体的，取所述标准空白溶液、镉标准曲线溶液、样品空白溶液和样品溶液各10μl，并分别加入5μl基体改性剂作为进样，基体改性剂为1wt％磷酸二氢铵和0.2wt％硝酸镁的水溶液(取磷酸二氢铵1.0g和硝酸镁0.2g，置于100ml量瓶中，加水适量使之溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得基体改性剂)，具体进样时采用自动进样，先进样品液，后进基体改进剂，样品液按顺序依次为标准空白溶液、标准曲线溶液、样品空白溶液和样品溶液。检测时，原子吸收分光光度计的工作条件为：波长为228.8nm；保护气为高纯氩气；制冷水温度为25℃；石墨管类型为热解涂层；背景校正方式为bgc-d2；信号处理为峰高；进样体积为待测溶液10μl+基体改进剂5μl；石墨炉升温程序如表14所示：表14石墨炉原子吸收分光光度计升温程序2.2标准曲线绘制将标准空白溶液及3组镉标准曲线溶液作为样品液依次进样，在本实施例2.1检测条件下进行检测，测定吸光度，以元素浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，系统自动绘制结果如表15所示：表15镉元素的标准曲线汇总由表15可以看出，在本发明检测方法条件下，镉在0.4ng/ml～2.5ng/ml的浓度范围内与其吸光度均呈现良好的线性关系。3.3样品检测：按本实施例1.1配置样品溶液的方法将6批中试规模的舒伐他汀钙片样品配置成6份样品溶液，将样品空白溶液和6份样品溶液依次进样，在本实施例2.1检测条件下进行检测，测得镉的吸光度，利用本实施例2.2中绘制的标准曲线，计算出镉元素的浓度，进而计算出瑞舒伐他汀钙片中镉含量，结果如下表16所示：表16六批中试规模样品检测试验结果汇总*n.d.，未检出；最低检测限：镉：0.02ppm。由表16可以看出，6批中试规模的样品中均未检出镉元素。本发明瑞舒伐他汀钙片产品中镉元素主要来源于原料合成工艺中用到的设备及管道，在合成步骤中不存在有目的性的镉元素作为成分或试剂、催化剂加入。建立镉元素的定量分析方法，且方法通过验证，对6批中试规模的瑞舒伐他汀钙片样品检测，均未检出。因此，可确定本品原料合成工艺及制剂生产工艺，可以稳定生产出镉元素合格的样品，镉超出限度的风险极低，不作为本品的关键质量属性定入质量标准。三、检测方法的验证检出限、定量限、重复性、准确性、耐用性实验同实施例1中3.1、3.2、3.3、3.4、3.5中实验方法，其结果汇总如下表17所示：表17检测方法验证结果汇总由表17可以看出，本发明所述检测方法灵敏度较高，检出限满足检测要求，重复性、准确度、耐用性良好。实施例4瑞舒伐他汀钙片中钴含量的测定参照ichq3d元素杂质指南和ichq9质量风险管理来控制瑞舒伐他汀钙片中的元素杂质钴，钴的限度为j＝5ppm。一、试剂的准备1.1样品溶液的配置：同实施例1中1.1的方法配置得到母液，再精密移取5.0ml该母液置于10ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，得到储备液，精密移取3.0ml该储备液置于10ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即瑞舒伐他汀钙浓度为3mg/ml的样品溶液；1.2混合标准品储备液的配制：同实施例1中1.2的方法。1.3100％水平样品溶液的配置：同实施例1中1.3的方法配置得到母液，再精密移取5.0ml该母液置于10ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，得到储备液，精密移取3.0ml该储备液置于10ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得100％水平样品溶液，用100％-s表示。1.450％水平样品溶液的配置：同实施例1中1.4的方法配置得到母液，再精密移取5.0ml该母液置于10ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，得到储备液，精密移取3.0ml该储备液置于10ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得50％水平样品溶液，用50％-s表示。1.5150％水平样品溶液的配置：同实施例1中1.5的方法配置得到母液，再精密移取5.0ml该母液置于10ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，得到储备液，精密移取3.0ml该储备液置于10ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得150％水平样品溶液，用150％-s表示。1.6样品空白溶液的配置：同实施例1中1.6的方法得到母液，再精密移取5.0ml该母液置于10ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，得到储备液，精密移取3.0ml该储备液置于10ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得样品空白溶液。1.7标准空白溶液的配置：同实施例1中1.7的方法。1.8钴标准曲线溶液的配置：精密移取100μl钴标准溶液(1000μg/ml)置于100ml量程的容量瓶中，加2％硝酸水溶液稀释至刻度，摇匀，即得1000ng/ml的钴标准曲线储备液，精密移取100μl钴标准曲线储备液置于25ml量瓶中，另精密移取钴标准曲线储备液100μl、150μl、200μl、300μl，分别置于10ml量瓶中，加2％硝酸水溶液稀释至刻度，摇匀，得到浓度分别为4ng/ml、10ng/ml、15ng/ml、20ng/ml、30ng/ml的钴标准曲线溶液，分别用std1、std2、std3、std4、std5表示。二、检测方法的建立2.1检测条件的确定采用石墨炉原子吸收光谱法对上述配制的钴标准曲线溶液进行检测，制定出标准曲线；再采用石墨炉原子吸收光谱法测定出样品溶液的吸光度，并根据所述标准曲线计算得到瑞舒伐他汀钙片中钴的含量。具体的，取所述标准空白溶液、钴标准曲线溶液、样品空白溶液和样品溶液各15μl作为进样，具体进样时采用自动进样，进样品液，样品液按顺序依次为标准空白溶液、标准曲线溶液、样品空白溶液和样品溶液。检测时，原子吸收分光光度计的工作条件为：波长为240.7nm；保护气为高纯氩气；制冷水温度为25℃；石墨管类型为热解涂层；背景校正方式为bgc-d2；信号处理为峰高；进样体积为待测溶液15μl；石墨炉升温程序如表18所示：表18石墨炉原子吸收分光光度计升温程序2.2标准曲线绘制将标准空白溶液及3组钴标准曲线溶液作为样品液依次进样，在本实施例2.1检测条件下进行检测，测定吸光度，以元素浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，系统自动绘制结果如表19所示：表19钴元素的标准曲线汇总由表19可以看出，在本发明检测方法条件下，钴在4.0ng/ml～30ng/ml的浓度范围内与其吸光度均呈现良好的线性关系。3.3样品检测：按本实施例1.1配置样品溶液的方法将6批中试规模的舒伐他汀钙片样品配置成6份样品溶液，将样品空白溶液和6份样品溶液依次进样，在本实施例2.1检测条件下进行检测，测得钴的吸光度，利用本实施例2.2中绘制的标准曲线，计算出钴元素的浓度，进而计算出瑞舒伐他汀钙片中钴含量，结果如下表20所示：表20六批中试规模样品检测试验结果汇总*n.d.，未检出；最低检测限：钴：0.19ppm。由表12可以看出，6批中试规模的样品中均未检出钴元素。本发明瑞舒伐他汀钙片产品中钴元素主要来源于原料合成工艺中用到的设备及管道，在合成步骤中不存在有目的性的钴元素作为成分或试剂、催化剂加入。建立钴元素的定量分析方法，且方法通过验证，对6批中试规模的瑞舒伐他汀钙片样品检测，均未检出。因此，可确定本品原料合成工艺及制剂生产工艺，可以稳定生产出钴元素合格的样品，钴超出限度的风险极低，不作为本品的关键质量属性定入质量标准。三、检测方法的验证检出限、定量限、重复性、准确性、耐用性实验同实施例1中3.1、3.2、3.3、3.4、3.5中实验方法，其结果汇总如下表21所示：表21检测方法验证结果汇总由表21可以看出，本发明所述检测方法灵敏度较高，检出限满足检测要求，重复性、准确度、耐用性良好。实施例5瑞舒伐他汀钙片中镍含量的测定参照ichq3d元素杂质指南和ichq9质量风险管理来控制瑞舒伐他汀钙片中的元素杂质镍，镍的限度为j＝20ppm。一、试剂的准备1.1样品溶液的配置：同实施例1中1.1的方法配置得到母液，再精密移取5.0ml该母液置于10ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，得到储备液，精密移取1.0ml该储备液置于10ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即瑞舒伐他汀钙浓度为1mg/ml的样品溶液；1.2混合标准品储备液的配制：同实施例1中1.2的方法。1.3100％水平样品溶液的配置：同实施例1中1.3的方法配置得到母液，再精密移取5.0ml该母液置于10ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，得到储备液，精密移取1.0ml该储备液置于10ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得100％水平样品溶液，用100％-s表示。1.450％水平样品溶液的配置：同实施例1中1.4的方法配置得到母液，再精密移取5.0ml该母液置于10ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，得到储备液，精密移取1.0ml该储备液置于10ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得50％水平样品溶液，用50％-s表示。1.5150％水平样品溶液的配置：同实施例1中1.5的方法配置得到母液，再精密移取5.0ml该母液置于10ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，得到储备液，精密移取1.0ml该储备液置于10ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得150％水平样品溶液，用150％-s表示。1.6样品空白溶液的配置：同实施例1中1.6的方法得到母液，再精密移取5.0ml该母液置于10ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，得到储备液，精密移取1.0ml该储备液置于10ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得样品空白溶液。1.7标准空白溶液的配置：同实施例1中1.7的方法。1.8镍标准曲线溶液的配置：精密移取100μl镍标准溶液(1000μg/ml)置于100ml量程的容量瓶中，加2％硝酸水溶液稀释至刻度，摇匀，即得1000ng/ml的镍标准曲线储备液，精密移取100μl镍标准曲线储备液置于20ml量瓶中，另精密移取镍标准曲线储备液100μl、200μl、300μl、400μl，分别置于10ml量瓶中，加2％硝酸水溶液稀释至刻度，摇匀，得到浓度分别为5ng/ml、10ng/ml、20ng/ml、30ng/ml、40ng/ml的镍标准曲线溶液，分别用std1、std2、std3、std4、std5表示。二、检测方法的建立2.1检测条件的确定采用石墨炉原子吸收光谱法对上述配制的镍标准曲线溶液进行检测，制定出标准曲线；再采用石墨炉原子吸收光谱法测定出样品溶液的吸光度，并根据所述标准曲线计算得到瑞舒伐他汀钙片中镍的含量。具体的，取所述标准空白溶液、镍标准曲线溶液、样品空白溶液和样品溶液各20μl作为进样，具体进样时采用自动进样，进样品液，样品液按顺序依次为标准空白溶液、镍标准曲线溶液、样品空白溶液和样品溶液。检测时，原子吸收分光光度计的工作条件为：波长为232.0nm；保护气为高纯氩气；制冷水温度为25℃；石墨管类型为热解涂层；背景校正方式为bgc-d2；信号处理为峰高；进样体积为待测溶液20μl；石墨炉升温程序如表22所示：表22石墨炉原子吸收分光光度计升温程序2.2标准曲线绘制将标准空白溶液及3组镍标准曲线溶液作为样品液依次进样，在本实施例2.1检测条件下进行检测，测定吸光度，以元素浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，系统自动绘制结果如表23所示：表23镍元素的标准曲线汇总由表23可以看出，在本发明检测方法条件下，镍在5.0ng/ml～40ng/ml的浓度范围内与其吸光度均呈现良好的线性关系。3.3样品检测：按本实施例1.1配置样品溶液的方法将6批中试规模的舒伐他汀钙片样品配置成6份样品溶液，将样品空白溶液和6份样品溶液依次进样，在本实施例2.1检测条件下进行检测，测得镍的吸光度，利用本实施例2.2中绘制的标准曲线，计算出镍元素的浓度，进而计算出瑞舒伐他汀钙片中镍含量，结果如下表24所示：表24六批中试规模样品检测试验结果汇总*n.d.，未检出；最低检测限：镍：1.24ppm。由表24可以看出，6批中试规模的样品中均未检出镍元素。本发明瑞舒伐他汀钙片产品中镍元素主要来源于原料合成工艺中用到的设备及管道，在合成步骤中不存在有目的性的镍元素作为成分或试剂、催化剂加入。建立镍元素的定量分析方法，且方法通过验证，对6批中试规模的瑞舒伐他汀钙片样品检测，均未检出。因此，可确定本品原料合成工艺及制剂生产工艺，可以稳定生产出镍元素合格的样品，镍超出限度的风险极低，不作为本品的关键质量属性定入质量标准。三、检测方法的验证检出限、定量限、重复性、准确性、耐用性实验同实施例1中3.1、3.2、3.3、3.4、3.5中实验方法，其结果汇总如下表25所示：表25检测方法验证结果汇总由表25可以看出，本发明所述检测方法灵敏度较高，检出限满足检测要求，重复性、准确度、耐用性良好。以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本
技术领域：
的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。当前第1页12