连续逆流螺旋色谱的制作方法

相关申请

本申请要求于2017年3月28日提交的名称为“continuouscountercurrentspiralchromatography(连续逆流螺旋色谱)”的美国临时申请序列号62/477,917的优先权，该美国临时申请的全部内容以引用方式并入本文。

本发明总体涉及色谱法和吸附分离。更具体地，本发明涉及使用连续逆流和螺旋分离器来进行连续逆流螺旋色谱的方法、系统和设备，利用所述方法、系统和设备以有助于分离所需产物和提高整个色谱过程的效率。

背景技术：

以单克隆抗体和其他蛋白质为特征的新型药物生产已经显著且持续增长，每年增长约15-20％。这种增长是由于药物开发(drugpipeline)的扩大，以及更有效的细胞系和生物反应器生长优化。目前估计每年的生物生产成本为26亿美元。药物制造商必须进行的最重要的投资之一是进行过程色谱(每年约30％或8.5亿美元)。

生产蛋白质药物的主要成本之一是下游生物加工，下游生物加工可占总制造成本的多达80％。目前，用于蛋白质纯化的主要方法是柱色谱。蛋白a亲和色谱由于其非常高的选择性和高度稳健的操作而用于几乎所有单克隆抗体的纯化。然而，用于柱色谱中的蛋白a树脂非常昂贵，并且设计用于单克隆抗体的初始捕获的单一蛋白a柱仅树脂就花费了约1500万美元。与柱色谱相关的另一个主要问题是它是高压操作。过去五年中细胞培养技术的重大进步已经使产物滴度提高了十倍，这导致生物制造战略转变为一次性用完即弃的工艺，所述一次性用完即弃的工艺提供更高的灵活性、更低的成本和持续的按需制造。一次性设备可以显著缩短新药物的上市时间。

olegshinkazh的标题分别为“continuouscountercurrenttangentialchromatography(连续逆流切向色谱法)”和“countercurrenttangentialchromatographymethods,systemsandapparatus(逆流切向色谱方法、系统和设备)”美国专利号7,947,175和7,988,859，公开了用于连续逆流切向色谱的新技术的方法、系统和设备，所述方法、系统和设备解决了现有技术的一些挑战。olegshinkazh的标题为“highefficiencycontinuouscountercurrenttangentialchromatography(高效连续逆流切向色谱)”的美国专利申请号15/305,850(作为美国专利申请公开号2017/0045483a1公开)公开了进一步推进连续逆流切向色谱新技术的方法、系统和设备。美国专利号7,947,175和7,988,859以及美国专利申请公开号2017/0045483a1以它们的全部内容并入本文，如同被完全重述一样。

与树脂颗粒填充在固定床柱中的常规柱色谱相比，连续逆流切向色谱方法利用浆液形式的树脂，如图1和图2所示，所述浆液形式的树脂流过一系列静态混合器和切向流过滤膜模块。连续逆流切向色谱是具有一次性流动路径的低压操作(<20psi)，因此其可以消除与蛋白a柱色谱相关的一些显著缺陷。以结合/洗脱模式运行的连续逆流切向色谱(cctc)系统是多个步骤的组合：结合、洗涤、洗脱、再生和平衡。然而，一些实施方案可以具有更少或额外的步骤。举例来说，cctc流通过程模式不包括洗脱步骤，产物在结合步骤和洗涤步骤中收集。将树脂经由在每个静态混合器之前安装的渗余物泵引入每级。通过使用渗余物泵的流量来稳定流体动力学，所述渗余物泵既用作泵又用作准止回阀，所述渗余物泵引导缓冲液经由每个步骤以逆流方式流动到树脂。由于每个步骤充当封闭系统，所以泵入该步骤的缓冲液将等于所得的渗透物流的流量。

cctc系统中树脂和流体相的分离是通过中空纤维膜执行的。然而，cctc系统中的膜生垢可能会抑制长期性能。膜生垢的影响示出在图3中。随着时间的推移，压力逐渐增加，这限制了系统用于通常时长小于24小时的补料分批过程的性能。

lean等人在标题为“particleseparationandconcentrationsystem(颗粒分离和浓缩系统)”的美国专利号9,433,880中描述了利用螺旋通道中的流动的颗粒分离和浓缩系统。在该专利中，描述了一种基于在螺旋通道中流动的悬浮颗粒的大小分离和质量分离的发明。在螺旋通道中，来自流体剪切的向内指向的横向压力与向外指向的离心力竞争，并且两个相反的力的大小取决于流速、粒径、螺旋区段的曲率半径、通道尺寸和流体粘度，从而导致颗粒分离。

han等人在标题为“micro-fluidicdeviceandusesthereof(微流体装置及其用途)”的美国专利号9,789,485中描述了一种微流体装置，所述微流体装置具有有非矩形横截面的弯曲微通道以用于颗粒聚焦和混合。在该专利中，要求保护的是其中描述的微流体装置可以将一个或多个颗粒按照大小从颗粒混合物中分离。该螺旋微流体分离装置具有梯形横截面，聚焦迪恩涡流(deanvortice)和微通道内的惯性升力以提供分离。在特定的流动条件下，较小的组分被捕集在朝向通道外壁倾斜的迪恩涡流中，而较大的组分保持朝向通道内壁。美国专利号9,789,48以其全部内容并入本文，如同完全重述一样。

技术实现要素：

在一个示例性实施方案中，连续逆流螺旋色谱模块包括第一输入端口、第一混合器、i级分离器、第二混合器、ii级分离器和至少一个液体级分泵。所述第一输入端口用于接收输入溶液。所述第一混合器用于将所述输入溶液与来自第二输入端口的再循环溶液混合以产生第一混合输出。所述i级分离器用于浓缩所述第一混合输出以产生i级固体级分，其中i级液体级分经由第一输出端口离开所述i级分离器。所述第二混合器用于将来自所述i级分离器的所述i级固体级分和来自第三输入端口的任选缓冲溶液混合以产生第二混合输出。所述ii级分离器用于浓缩所述第二混合输出以产生ii级固体级分，所述ii级固体级分经由第二输出端口从所述ii级分离器离开所述模块，其中ii级液体级分经由第三输出端口从所述ii级分离器离开所述模块。来自所述第三输出端口的所述再循环溶液与所述输入溶液逆流地流入所述第二输入端口。所述i级分离器和所述ii级分离器中的至少一者是螺旋分离器，所述螺旋分离器包括至少一个入口、经布置和设置以产生至少一个迪恩涡流的曲线通道、至少一个液体级分出口和至少一个固体级分出口。

在另一个示例性实施方案中，具有多个模块的连续逆流螺旋色谱系统包括结合步骤模块，所述结合步骤模块用于将来自未纯化产物溶液的产物与树脂浆料结合；洗涤步骤模块，所述洗涤步骤模块用于从所述树脂浆料中洗涤杂质；以及再生步骤模块，所述再生步骤模块用于使所述树脂浆料再生。所述多个模块中的至少一个包括多个级，所述多个级具有与所述模块中的所述至少一个内的树脂浆料流逆向流动的固体级分流。所述多个模块中的至少一个包括螺旋分离器，所述螺旋分离器具有至少一个入口、经布置和设置以产生至少一个迪恩涡流的曲线通道、至少一个液体级分出口和至少一个固体级分出口。

在另一个示例性实施方案中，一种通过使用多个模块的连续逆流螺旋色谱来纯化未纯化溶液的方法包括：接收所述未纯化溶液；从用于容纳树脂浆料的树脂浆料槽接收树脂浆料，在从所述树脂浆料槽排出所述树脂浆料后将所述树脂浆料槽隔离；用于将所述未纯化产物溶液中的产物与来自所述树脂浆料槽的所述树脂浆料结合的结合步骤；用于从所述树脂浆料中洗涤杂质的洗涤步骤；任选地，用于在所述洗涤步骤之后从所述树脂浆料中洗脱产物的洗脱步骤；捕获纯化的产物溶液；用于清洁所述树脂浆料的再生步骤；以及为所述步骤提供缓冲溶液，所述多个模块中的至少一个包括多个级，所述多个级具有与所述多个模块中的所述至少一个内的树脂浆料流逆向流动的固体级分流。所述多个模块中的至少一个包括螺旋分离器，所述螺旋分离器具有至少一个入口、经布置和设置以产生至少一个迪恩涡流的曲线通道、至少一个液体级分出口和至少一个固体级分出口。

通过以下结合附图对优选实施方案的更详细描述，本发明的其他特征和优点将变得显而易见，所述附图以举例方式示出了本发明的原理。

附图说明

图1是连续逆流切向色谱模块的示意图。

图2是连续模式下的连续逆流切向色谱系统的示意图。

图3是根据本公开的实施方案的螺旋分离器的示意图。

图4是根据本公开的一个实施方案的连续逆流螺旋色谱模块的示意图。

图5是根据本公开的一个实施方案的具有重新捕获分离的连续逆流螺旋色谱模块的示意图。

图6是根据本公开的一个实施方案的结合-洗脱模式下的连续逆流螺旋色谱系统的示意图。

图7是根据本公开的一个实施方案的具有重新捕获分离的结合-洗脱模式下的连续逆流螺旋色谱系统的示意图。

图8是根据本公开的一个实施方案的流通模式下的连续逆流螺旋色谱系统的示意图。

图9是根据本公开的一个实施方案的具有重新捕获分离的流通模式下的连续逆流螺旋色谱系统的示意图。

图10公开了根据本公开的一个实施方案的对结合状态生垢数据的比较。

图11公开了根据本公开的一个实施方案在连续逆流螺旋色谱系统的洗脱步骤期间的压力分布。

图12公开了根据本公开的一个实施方案的连续逆流螺旋色谱系统的洗脱uv分布。

在附图中将尽可能使用相同的附图标记来表示相同的部件。

具体实施方式

定义：以下术语在本说明书中具有以下赋予的含义。

“结合”步骤或模式表示这样的操作，在所述操作期间树脂和未纯化产物形成可逆复合物(用于阳性色谱)，或在所述操作期间树脂和杂质形成可逆复合物(用于阴性色谱)。

“洗涤”步骤或模式表示这样的操作，在所述操作期间用洗涤缓冲液洗涤带有结合产物的树脂，以去除树脂中的杂质(用于阳性色谱法)，或在所述操作期间用洗涤缓冲液洗涤具有结合杂质的树脂以洗掉来自结合步骤的遗留产物(用于阴性色谱法)。

“洗脱”步骤或模式表示这样的操作，在所述操作期间树脂和产物的复合物被逆转并收集纯化产物。

“再生”步骤或模式表示这样的操作，在所述操作期间清洁树脂以用于再利用或用于以后的循环。

“平衡”步骤或模式表示表示这样的操作，在所述操作期间系统在中性缓冲液中平衡。

“固体颗粒负载分离能力”是在不显著降低模块或系统的处理效率和生垢率的情况下可以引入到所述模块或系统中的未纯化溶液中的固体颗粒含量的最大量。

“级”表示互连的分离器和混合器。

“单程模块”是单程执行色谱操作(诸如结合、洗涤、洗脱和再生)中的一项色谱操作的模块。

提供了示例性系统、模块和方法。与不利用本文公开的一种或多种特征的系统、模块和方法相比，本公开的实施方案提供可扩展、可靠和一次性的技术，所述可扩展、可靠和一次性的技术利用再循环原理来显著提高处理效率、增大操作规模，以及降低树脂成本，或它们的组合。

cctc系统的中空纤维膜被螺旋微流体颗粒分选器装置代替提供了意想不到的益处。这些螺旋装置在装置通道的弯曲外壁处使用迪恩涡流将树脂与溶解物质分离，以选择性地将颗粒吸引到装置的一个壁上。因此，这些装置不需要物理屏障，诸如用于将树脂颗粒与溶解物质分离的膜。逆流螺旋色谱系统操作相对于cctc系统的意想不到的和显著的益处包括下面描述的那些益处，根据实施方案，所述益处可以单独提供，彼此组合提供，或全部一起提供。

由于没有先前在膜装置中存在的逐渐生垢，所以用螺旋微流体颗粒分选器装置代替中空纤维膜可以显著提高生产量。此外，处理时间可以从24小时延长到约30-90天(生产量增加高达90倍)，并且逆流色谱系统与输注生物反应器直接整合(所述逆流色谱系统与输注生物反应器的直接整合可运行长达约90天)。

用螺旋微流体颗粒分选器装置代替中空纤维膜可以显著简化硬件和系统监测，这是因为由于没有生垢，所以不再需要单独监测每个逆流色谱级的压力。由于系统监测显著减少，所以这可以将用于典型逆流色谱操作的压力表的数量从约20个减少到约6个(减少了大于3倍)，从而允许简化的硬件设计、降低的用于滑动和流动路径的成本，以及增加的易用性。

用螺旋微流体颗粒分选器装置代替中空纤维膜可以改善制造和供应链的稳健性，这是因为螺旋装置可以用各种廉价的制造方法(诸如3d打印、蚀刻和注塑成型)来制造。由于螺旋装置的简单性，螺旋装置可能需要显著减少的对流动路径制造和逆流色谱操作的技术支持。此外，此类装置可以由系统整合公司直接制造，而不必管理来自第三方的采购、质量测试和故障排除膜模块。

因为不再需要对膜装置结垢行为的耗时定性，所以用螺旋微流体颗粒分选器装置代替中空纤维膜可降低工艺开发要求，从而增加螺旋装置的采用。整个逆流色谱方法可以从使用小柱和烧杯测试树脂的结合能力和动力学的标准桌面实验扩展。这可以提供该方法的更大程度的吸引力并减少市场采用的障碍。

由于产量增加、与膜模块相比制造所述装置的成本降低，并且减少了方法开发的努力，所以用螺旋微流体颗粒分选装置代替中空纤维膜可以使纯化产物的成本/克数显著降低高达80％。

用螺旋微流体颗粒分选装置代替中空纤维膜可以提供逆流色谱纯化大分子和聚集体(诸如质粒dna、病毒载体颗粒、疫苗和rna)的能力，否则所述大分子和聚集体可能会迅速在膜过滤器上生垢，从而与具有中空纤维膜的cctc相比，打开了这种新技术平台的有显著额外市场机会。

与具有中空纤维膜的cctc相比，用螺旋微流体颗粒分选器装置代替中空纤维膜可以增强固体颗粒负载分离能力。

参考图1，如美国专利号7,947,175和7,988,859以及美国专利申请公开号2017/0045483a1中更全面描述的，示出了连续逆流切向色谱模块100(在虚线内)。输入溶液101在第一输入端口102处进入，并且输入溶液101与来自第一混合器105内的第二输入端口104的再循环溶液103混合。来自第一混合器105的第一混合输出106进入i级分离器107，所述i级分离器107是切向流过滤器108，来自所述i级分离器107的i级液体级分109在第一输出端口110处离开i级分离器107。将i级固体级分111进料到第二混合器112中，所述i级固体级分111可以与来自第三输入端口114的任选缓冲溶液113混合以产生第二混合输出115。来自第二混合器112的第二混合输出115进料到ii级分离器116中，所述分离器116是切向流过滤器108。ii级固体级分117经由第二输出端口118从ii级分离器116离开连续逆流切向色谱模块100，并且ii级液体级分119经由第三输出端口120从ii级分离器116离开连续逆流切向色谱模块100。ii级液体级分119可以是再循环溶液103。连续逆流切向色谱模块100包括至少一个泵122。

参考图2，如美国专利号7,947,175和7,988,859以及美国专利申请公开号2017/0045483a1中更全面描述的，连续逆流切向色谱系统200以连续模式操作。结合步骤模块210、洗涤步骤模块220、洗脱步骤模块230、再生步骤模块240和平衡步骤模块250以与图1中所示的连续逆流切向色谱模块100的操作类似的方式操作，不同之处在于洗涤步骤模块220和洗脱步骤模块230还包括第三混合器201和iii级分离器202。结合步骤模块210在第一输入端口102处连接到树脂浆料槽203，并且在第三输入端口114处连接到结合缓冲槽204。洗涤步骤模块220连接到结合步骤模块210和洗涤缓冲槽205。洗脱步骤模块230连接到洗涤步骤模块220和洗脱缓冲槽206。再生步骤模块240连接到洗脱步骤模块230和脱离缓冲槽207。平衡步骤模块250连接到再生步骤模块240和平衡缓冲槽208。

参考图3，如美国专利号9,789,485中更全面描述的，螺旋分离器300包括至少一个入口301、经布置和设置以产生至少一个迪恩涡流的曲线通道302、至少一个液体级分出口303，以及至少一个固体级分出口304。曲线通道302可包括矩形横截面、非矩形横截面、梯形横截面、正方形横截面、椭圆形横截面、圆形横截面、不规则横截面、圆角矩形横截面、圆角正方形横截面、圆角梯形横截面，或它们的组合。

参考图4，在一个实施方案中，图1的连续逆流切向色谱模块100中的至少一个切向流过滤器108被螺旋分离器300代替，从而形成连续逆流螺旋色谱模块400。所述连续逆流螺旋色谱模块400包括：第一输入端口102，所述第一输入端口102用于接收输入溶液101；第一混合器105，所述第一混合器105用于将所述输入溶液101与来自第二输入端口104的再循环溶液103混合以产生第一混合输出106；i级分离器107，所述i级分离器107用于浓缩所述第一混合输出106以产生i级固体级分111，其中i级液体级分109经由第一输出端口110离开i级分离器107；第二混合器112，所述第二混合器112用于将来自i级分离器107的i级固体级分111和来自第三输入端口114的任选缓冲溶液113混合以产生第二混合输出115；ii级分离器116，所述ii级分离器116用于浓缩第二混合输出115以产生ii级固体级分117，所述ii级固体级分117经由第二输出端口118从ii级分离器116离开所述模块，其中ii级液体级分119经由第三输出端口120从ii级分离器116离开连续逆流螺旋色谱模块400；以及至少一个泵122。来自第三输出端口120的再循环溶液103与输入溶液101逆流地流入第二输入端口104。i级分离器107和ii级分离器116中的至少一者是螺旋分离器300。i级液体级分109可以是废物或可以是产物。

在一个实施方案中，i级分离器107和ii级分离器116都是螺旋分离器300。在另一个实施方案(未示出)中，i级分离器107和ii级分离器116中的一者是螺旋分离器300，一者是切向流过滤器108。在又一个实施方案(未示出)中，其中连续逆流螺旋色谱模块400包括iii级分离器202，i级分离器107、ii级分离器116和iii级分离器202中的一者是螺旋分离器300并且两者是切向流过滤器108，i级分离器107、ii级分离器116和iii级分离器202中的两者是螺旋分离器300并且一者是切向流过滤器108，或者i级分离器107、ii级分离器116和iii级分离器202中的每一者均是螺旋分离器300。

在一个实施方案中，输入溶液101包含树脂和未纯化产物溶液。未纯化产物溶液可包括任何合适的产物，包括但不限于商品化学品、糖、氨基酸、纳米颗粒、药物、抗生素、他汀类、蛋白质、单克隆抗体、融合蛋白、抗体药物缀合物、酶、病毒样颗粒、疫苗、dna、rna，或它们的组合。

第一混合器105可以是静态混合器或非静态混合器。第二混合器112可以是静态混合器或非静态混合器。在一个实施方案(未示出)中，其中连续逆流螺旋色谱模块400包括第三混合器201，所述第三混合器201可以是静态混合器或非静态混合器。连续逆流螺旋色谱模块400可包括静态和非静态混合器的任何合适组合。第二混合器112可以接收清洁的缓冲溶液或者可以不接收清洁的缓冲溶液。

在一个实施方案中，连续逆流螺旋色谱模块400是单程模块，在所述模块中来自第一输入端口102的输入溶液101在单程中流过i级分离器107和ii级分离器116。

在一个实施方案中，连续逆流螺旋色谱模块400可以以比对比连续逆流切向色谱模块100更高的树脂到缓冲液流量来操作，并且利用比对比连续逆流切向色谱模块100更少的缓冲液体积。连续逆流螺旋色谱模块400可以以比对比连续逆流切向色谱模块100更高的产物浓度操作。

在一个实施方案中，连续逆流螺旋色谱模块400包括至少约10重量％、或者至少约12重量％、或者至少约14重量％、或者至少约16重量％、或者至少约18重量％、或者至少约20重量％、或者至少约22重量％、或者至少约24重量％、或者至少约26重量％、或者至少约28重量％，或者至少约30重量％的固体颗粒负载分离能力。

参考图5，在一个实施方案中，连续逆流螺旋色谱模块400还包括重新捕获分离器500，所述重新捕获分离器500用于从离开第一输出端口110的i级液体级分109中去除残留的固体物质，产生分离的i级液体级分501和再循环的i级固体级分503，所述分离的i级液体级分501从第四输出端口502离开连续逆流螺旋色谱模块400，所述再循环的i级固体级分503经由第五输出端口504离开重新捕获分离器500并且经由第四输入端口505进料到第一混合器105中以与输入溶液101和再循环溶液103混合成第一混合输出106。重新捕获分离器500可以是螺旋分离器300(示出)或切向流过滤器108(未示出)。固体材料可包括树脂。在一个实施方案中，固体材料包括未被i级分离器107分离成i级固体级分111的树脂。

参考图6至图9，在一个实施方案中，图2的连续逆流切向色谱系统200中的至少一个切向流过滤器108被螺旋分离器300代替，从而形成连续逆流螺旋色谱系统600。连续逆流螺旋色谱系统600具有多个模块，并且包括：结合步骤模块210，所述结合步骤模块210用于将来自未纯化产物溶液的产物与树脂浆料结合；洗涤步骤模块220，所述洗涤步骤模块220用于从所述树脂浆料中洗涤杂质；以及再生步骤模块240，所述再生步骤模块240用于使所述树脂浆料再生。所述多个模块中的至少一个包括多个级，所述多个级具有与所述多个模块中的至少一个内的树脂浆料流逆向流动的固体级分流，并且所述多个模块中的至少一个包括螺旋分离器300。所述多个模块可包括用于所述多个模块中的每个模块的连续逆流切向色谱模块100和连续逆流螺旋色谱模块400的任何合适组合。所述多个模块还可包括：洗脱步骤模块230，所述洗脱步骤模块230用于洗脱所述洗涤步骤模块220的输出作为纯化的产物溶液；平衡步骤模块250，所述平衡步骤模块250用于使用适当的缓冲液来平衡连续逆流螺旋色谱系统600；或两者。适当的缓冲液可包括但不限于中性缓冲液。

在一个实施方案中，连续逆流螺旋色谱系统600包括至少约10重量％、或者至少约12重量％、或者至少约14重量％、或者至少约16重量％、或者至少约18重量％、或者至少约20重量％、或者至少约22重量％、或者至少约24重量％、或者至少约26重量％、或者至少约28重量％，或者至少约30重量％的固体颗粒负载分离能力。

参考图6和图7，在一个实施方案中，连续逆流螺旋色谱系统600包括结合步骤模块210、洗涤步骤模块220、洗脱步骤模块230、再生步骤模块240和平衡步骤模块250，并且以结合-洗脱模式操作。参考图8和图9，在另一个实施方案中，连续逆流螺旋色谱系统600包括结合步骤模块210、洗涤步骤模块220、再生步骤模块240和平衡步骤模块250，但不包括洗脱步骤模块230，并且以流通模式操作。

参考图6和图8，在一个实施方案中，连续逆流螺旋色谱系统600不包括具有重新捕获分离器500的连续逆流螺旋色谱模块400。参考图7和图9，在另一个实施方案中，连续逆流螺旋色谱系统600包括至少一个具有重新捕获分离器500的连续逆流螺旋色谱模块400。连续逆流螺旋色谱系统600可包括任何合适数量的具有重新捕获分离器500的模块，范围是从没有连续逆流螺旋色谱模块400到单个连续逆流螺旋色谱模块400，到每个连续逆流螺旋色谱模块400，以及其间的任何连续逆流螺旋色谱模块400的组合。在连续逆流螺旋色谱系统600中包括至少一个重新捕获分离器500可以从在连续逆流螺旋色谱系统600的操作期间产生的液体级分中去除残余树脂，从而相对于缺少重新捕获分离器500的对比系统减少操作期间的树脂损失。

再次参考图6至图9，在一个实施方案中，连续逆流螺旋色谱系统600包括小于约30psi、或者小于约20psi、或者小于约18psi、或者小于约15psi、或者在约1psi至约20psi之间，或者在约2psi与约18psi之间的操作压力。

参考图10，示出了连续逆流螺旋色谱系统600的结合步骤模块210的压力分布与连续逆流切向色谱系统200的结合步骤模块210中的压力分布的比较，证明了在连续逆流螺旋色谱系统600中压力分布是稳定的，在连续逆流螺旋色谱系统600中没有明显的生垢，而逆流切向色谱系统200在相同条件下遭受膜生垢。

参考图11，示出了具有连续逆流螺旋色谱系统600的四个洗脱步骤模块230的洗脱步骤的压力分布，证明了连续逆流螺旋色谱系统600的洗脱部分中的压力分布在操作条件下是稳定的，没有显著生垢。

参考图12，作为来自洗脱步骤模块230的产物获得的蛋白质样品的uva280分布证明了洗脱步骤模块230的稳定操作。

在一个实施方案中，通过使用多个模块的连续逆流螺旋色谱来纯化未纯化溶液的方法包括：接收所述未纯化溶液；从用于容纳树脂浆料的树脂浆料槽203接收树脂浆料，在从所述树脂浆料槽203排出所述树脂浆料后将所述树脂浆料槽203隔离；用于将所述未纯化产物溶液中的产物或杂质与来自所述树脂浆料槽203的所述树脂浆料结合的结合步骤；用于洗涤杂质或从所述树脂浆料中回收未结合产物的洗涤步骤；任选地，用于在所述洗涤步骤之后从所述树脂浆料中洗脱产物的洗脱步骤；捕获纯化的产物溶液；用于清洁所述树脂浆料的再生步骤；以及为所述步骤提供缓冲溶液。

纯化未纯化溶液可包括纯化任何合适的组合物，使盐水脱盐，执行任何合适的色谱过程，或这些步骤的组合。合适的组合物包括但不限于商品化学品、糖、氨基酸、纳米粒子、药物、抗生素、他汀类、蛋白质、单克隆抗体、双特异性抗体、融合蛋白、抗体药物缀合物、酶、病毒样颗粒、疫苗、基因治疗剂、或它们的组合；合适的色谱方法包括但不限于色谱捕获分离、色谱流通分离、使用蛋白a树脂的色谱抗体捕获分离、色谱离子交换分离、色谱疏水相互作用分离、色谱金属亲和力分离、色谱混合模式分离、色谱羟磷灰石分离、色谱亲和配体分离、基于色谱适体的分离、色谱反相分离，或它们的组合。

因此，虽然已经参考以特定顺序执行的特定操作描述和示出了本文公开的方法，但是应当理解，在不脱离本发明的教导的情况下，这些操作可以组合、细分或重新排序以形成等同的方法。因此，除非在此具体指出，否则操作的顺序和分组不是对本发明的限制。

最后，虽然已经参考本发明的特定实施方案具体示出和描述了本发明，但是本领域技术人员应当理解，在不脱离如所附权利要求中所定义的本发明的精神和范围的情况下，可以在形式和细节上进行各种其他改变。