鉴定诱导未分化或去分化的实体肿瘤细胞(再)分化的制剂的方法与流程

文档序号:20012593发布日期:2020-02-22 04:32阅读:来源:国知局

技术特征:

1.鉴定在未分化或去分化细胞中诱导(再)分化的化合物的方法,其特征在于,包括:

a)提供由去分化或未分化肿瘤细胞组成的细胞培养样品,

b)将目标化合物与所述的细胞培养样品接触,

c)随后,测定与未处理细胞相比的第一标记乳酸的相对浓度,和

d)随后,测定与未处理细胞相比的第二标记中性脂质的相对浓度,

其中,如果需要,步骤c)和d)可以以相反的顺序进行。

2.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述的细胞培养样品进行无脂或减脂培养。

3.如权利要求1或2所述的方法,其特征在于,在有氧条件下培养所述细胞培养样品。

4.如权利要求1-3中的一项或多项所述的方法,其特征在于,所述方法还包括以下步骤:

e)通过定量离心后的吸光度来确定存活的贴壁细胞的数量,和/或

f)在信号完全降低至背景水平的过程中确定细胞中细胞凋亡的完全诱导。

5.如权利要求4所述的方法,其特征在于,用作活力测试和/或用作凋亡测试。

6.如权利要求1-5中的一项或多项所述的方法,其特征在于,在胰岛素存在下培养所述细胞培养样品。

7.如权利要求1-6中的一项或多项所述的方法,其特征在于,在存在或不存在胰岛素的条件下,培养(肿瘤)细胞培养样品,所述细胞培养样品不表达或低表达胰岛素受体同种型b,或者具有比分化细胞更高的胰岛素受体同种型a/b的表达比例。

8.如权利要求1-7中的一项或多项所述的方法,其特征在于,在存在或不存在胰岛素的条件下,一种或两种前述标记物的改变是朝着细胞代谢中合成代谢改变的方向,从而能够分别进行功能性胰岛素受体b亚型的表达的分析,以及朝向相对较高的b亚型表达的a亚型与b型的比例的分析。

9.如权利要求1-8中的一项或多项所述的方法,其特征在于,在存在或不存在催乳素的情况下,培养催乳素受体阴性或基本不表达催乳素受体的乳腺细胞培养样品。

10.如权利要求1-9中的一项或多项所述的方法,其特征在于,在存在或不存在催乳素的情况下,一种或两种前述标记物的改变是朝着细胞代谢中合成代谢改变的方向,从而能够进行功能性催乳素受体的表达的分析。

11.如权利要求1-10中的一项或多项所述的方法,其特征在于,在微量滴定板中提供所述细胞培养样品。

12.如权利要求1-11中的一项或多项所述的方法,其特征在于,用透气箔密封所述微量滴定板。

13.如权利要求1-12中的一项或多项所述的方法,其特征在于,通过检测ph依赖性的酚红光学吸收的变化,对合适的co2-空气中温育的碳酸氢盐缓冲的细胞培养基中的乳酸浓度进行定量。

14.如权利要求1-13中的一项或多项所述的方法,其特征在于,在步骤1d)中,在添加新培养基以进一步培养或检测标记物之前,通过离心从所述细胞培养样品中去除一种/多种培养基和/或洗涤缓冲液。

15.如权利要求1-14中的一项或多项所述的方法,其特征在于,通过局部装置(a)和(b)进行培养基和/或洗涤缓冲液的单次/多次更换。

16.如权利要求1-15中的一项或多项所述的方法,其特征在于,所述标志物乳酸和中性脂质的组合应用,用于鉴定在未分化或去分化的细胞,特别是肿瘤细胞中诱导(再)分化的化合物。

17.如权利要求1-16中的一项或多项所述的方法,其特征在于,通过检测ph依赖性的酚红光学吸收的变化,对合适的恒定的co2-空气中温育的碳酸氢盐缓冲的细胞培养基中的乳酸浓度进行定量,并且,利用合适的中性脂质染色(荧光)染料(例如493/503),对中性脂质进行定量。

18.标记物乳酸和中性脂质的用途,用于鉴定在未分化或去分化的细胞,特别是肿瘤细胞中诱导(再)分化的化合物,其特征在于,所述标志物是组合使用的。

19.一种用于通过离心从细胞中除去液体的容器(局部装置(a)),其特征在于,包括:

-4个侧壁(a1、a2、b1、b2),其中两个相对的侧壁具有相同的长边(la、lb),从而获得矩形形状,

-平坦的底部(c),所述底物以下述方式与各个侧壁连接:所有连接区域以不透液体的方式连接,

-各个侧壁均具有朝向容器内部的突起(da、db),

-彼此相对的4个侧壁中的2个具有凹槽(e1、e2),该凹槽位于在各个侧壁的上表面的侧壁的长边la的中间。

20.一种用于通过离心来添加液体以培养细胞的微量滴定板(局部装置(b)),所述滴定板包括表面(1)和孔(2),所述孔锥形朝向底部(3)并存在开口,特别是圆形开口。

21.如权利要求20所述的微量滴定板,其特征在于,所述开口的直径与各个孔内液体的表面张力成比例,并以使得液体仅在比重力强的力的影响下才能逸出的方式调节。

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