本发明涉及药物质量控制技术领域，具体涉及蒙酸模贴膏的质量控制方法。
背景技术：
中药质量控制技术是指：对中药中有效成分的分离和测定，对药材进行客观、可靠、合理、有效的质量评价和质量控制。将近年发展起来的高效液相色谱(hplc)、气相色谱(gc)、毛细管电泳(ce)等多种色谱联用技术应用于中药质量控制，利用他们不同的分离效果，再结合计算机技术和色谱专家系统，完全可以满足中药样品的分离要求，再使用红外光谱，质谱-质谱的联用技术，就可以完成对中药中有效成分的分离和测定。
当前中药的质量控制方法是主要测定其所含的一种或多种化学成分，所测定的化学成分称为指标性成分，通过对指标性成分的定性或定量测定以反应该中药合格与否或评价质量优劣。由于目前绝大多数中药药效物质不明确，这种模式既难以保证该类中药质量的一致性和稳定性，也难以关联或反映其临床使用的安全性和有效性。目前药物质量控制方法，逐步由单一指标性成分定性定量向活性、有效成分及生物测定的综合检测过渡，向多成分及和指纹或特征图谱整体质量控制模式转化。以中药质量控制技术实现对药材的真正客观、可靠、合理、有效的质量评价和质量控制，建立中药的质量标准，有助于推动我国中医学的发展。中国专利公布cn102749414a公开了一种维吾尔药松补力制剂的质量控制方法，该方法包括(1)采用薄层色谱法分别定性鉴别松补力制剂中的甘松新酮和阿魏酸；(2)采用分光光度法分别定量检测松补力制剂中总黄酮含量、总多酚含量和总多糖含量；(3)采用高效液相色谱法分别定量检测松补力制剂中甘松新酮含量和阿魏酸含量。该发明通过定性和定量相结合测定松补力制剂中的甘松新酮、总黄酮、总多酚、总多糖和阿魏酸，可有效、全面地控制成品制剂的质量，为药品临床应用提供可靠的基础。中国专利公布cn101773551a公开了一种用于治疗软组织损伤的蒙药外用药物组合物，其中蒙药外用药物组合物的质量控制方法，包含以下内容：测定蒙酸模、冰片和薄荷脑含量，蒙酸模含量以大黄酚计不低于71.4μg/100cm2，冰片含量以龙脑计不低于20.5mg/100cm2，薄荷脑含量不低于54.8mg/100cm2。针对不同的中药需要制定不同的质量控制方法，中国专利公布cn102749414a公开的方法只适用于对维吾尔药松补力制剂进行质量控制，中国专利公布cn101773551a公开的质量控制方法检测结果的准确性有待进一步提高。
软组织损伤是皮肤皮下组织、筋膜、肌肉、肌腱、韧带、骨膜、关节囊等软组织合并周围神经血管的损伤，为骨科的常见病、多发病。组织受创后出现微循环障碍、无菌性炎症，致使局部肿胀疼痛。以肿胀、疼痛为主要表现。随着现代人们生活节奏的加快，软组织损伤的患者数量也在不断增多。而蒙酸模贴膏是治疗软组织损伤的高效药物。
因此，迫切需要开发出一种能够高效、准确控制蒙酸模贴膏质量的方法。
技术实现要素：
本发明提供了一种蒙酸模贴膏的质量控制方法，该方法检测结果的精密度高、稳定性好，能够准确有效地控制蒙酸模贴膏的质量。
本发明提供了一种蒙酸模贴膏的质量控制方法，该方法包括以下步骤：
(1)通过显色反应对蒙酸模贴膏进行定性分析：a.取蒙酸模贴膏用乙醇溶液溶解，得上清液作为供试品溶液1；b.取步骤(a)中的供试品溶液1，加入氢氧化钾溶液，合格品制成的供试品溶液显红色；
(2)对蒙酸模贴膏中的水杨酸甲酯进行定性分析；
(3)对蒙酸模的含量进行定量分析：制备大黄酚对照品乙醇溶液，使用乙醇溶液对蒙酸模贴膏进行溶解，过滤后将上清液蒸干，之后使用氯仿对蒸干后的物质进行溶解，过滤后将上清液蒸干，之后在用乙醇溶液对蒸干后的物质进行溶解，制得供试品溶液3，使用液相色谱仪检测大黄酚的含量；
(4)对薄荷脑和冰片的含量进行定量分析。
所述步骤(1)中氢氧化钾溶液是质量百分浓度为4-8％的氢氧化钾溶液。
所述步骤(1)还包括以下步骤：c.取步骤(a)中的供试品溶液1，加硫酸溶液，合格品制成的供试品溶液呈现分层，且分层液面出现紫红色圆环。
所述步骤(1)还包括以下步骤：d.取步骤(a)中的供试品溶液1，加入等体积的醋酐和硫酸溶液，合格品制成的供试品溶液下层显紫红色或红色。
所述步骤(1)中步骤(c)和步骤(d)中硫酸溶液的质量百分浓度为8-12％的硫酸溶液。
所述步骤(1)还包括以下步骤：e.取步骤(a)中的供试品溶液1，加入香草醛浓硫酸溶液，合格品制成的供试品溶液下层显紫红色或红色。
所述香草醛浓硫酸溶液的浓度为1％(g/ml)。
所述步骤(1)包括以下具体的操作步骤：(a)取蒙酸模贴膏剪成面积为1×1cm2的小块，用20-50ml体积百分浓度为90-95％乙醇溶液进行溶解，取上清液作为供试品溶液1；(b)取1ml步骤(a)制得的供试品溶液1，加入1ml的质量百分浓度为4-8％的氢氧化钾溶液，合格品制成的供试品溶液显红色；(c)取1ml步骤(a)制得的供试品溶液1，加入0.5ml的质量百分浓度为8-12％的硫酸溶液，合格品制成的供试品溶液出现分层，且分层液面出现紫红色圆环；(d)取1ml步骤(a)制得的供试品溶液1，加入0.5ml的醋酐，再加入0.5ml的质量百分浓度为8-12％的硫酸，合格品制成的供试品溶液下层显紫红色或红色；(e)取1ml步骤(a)制得的供试品溶液1，加入0.5ml浓度为1％(g/ml)的香草醛浓硫酸溶液，合格品制成的供试品溶液下层显紫红色或红色。
所述步骤(2)具体为取蒙酸模贴膏使用甲醇进行溶解，过滤收集滤液并蒸干，使用乙醇溶解蒸干后得到的物质，得到供试品溶液2；制备水杨酸甲酯对照品溶液；采用薄层色谱法进行定量检测。
所述步骤(2)中薄层色谱法检测的方法为：将供试品溶液2和水杨酸甲酯乙醇溶液分别点于同一硅胶g薄层板上，以体积比为12-8:4的甲苯-石油醚为展开剂进行展开，晾干后置于365nm的紫外光下观察，合格品制成的供试品溶液和水杨酸甲酯对照品溶液在相同位置显示相同颜色的荧光斑点。
所述步骤(3)中大黄酚对照品乙醇溶液的浓度为15-25μg/ml。
所述步骤(3)中液相色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为色谱柱填充剂，以体积比为75：20-30：1-5的乙腈：水：乙醇溶液的混合液为流动相，检测波长为254nm。
所述步骤(3)中流动相中的乙醇溶液的体积百分含量为9095％。-
步骤(3)中蒙酸模的含量以大黄酚计。
步骤(1)和步骤(3)中所用乙醇溶液是体积百分浓度为90-95％的乙醇溶液。
所述步骤(4)中采用气相色谱法对薄荷脑和冰片的含量进行分析。
所述步骤(4)中冰片的含量以龙脑的含量计。
所述步骤(4)具体操作方法为：取蒙酸模贴膏，置挥发油提取器中，提取挥发油并使用乙酸乙酯收集挥发油，分取乙酸乙酯层，之后加入乙酸乙酯和内标液，制成供试品溶液4。
所述步骤(4)中内标液为萘、乙酸乙酯和甲醇的混合物，萘的浓度为5μg/ml，乙醇乙酯和甲醇的体积比为2-5:1。
步骤(1)中步骤b的实验方法是对蒙酸模总蒽醌类化合物进行定性分析；步骤(1)中步骤c的实验方法是对三七中皂苷类成分进行定性分析；步骤(1)中步骤d的方法是对红花中环烯醚萜进行定性分析；步骤(1)中步骤e是对诃子中鞣质进行定性分析。本申请中所用蒙酸模贴膏在剪成1×1cm2之前整块的面积是7×10cm2，实验中实际进行溶解测定的面积是1×1cm2。所述香草醛浓硫酸溶液所用浓硫酸是10％(m/m)的硫酸。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
(1)本发明在步骤(3)中通过联合使用乙醇的提取和氯仿、乙醇对提取物的再次提取和溶解，提高了检测结果的精密度。
(2)本发明在步骤(3)中通过使用乙腈-水-乙醇的混合溶液作为流动相，提高了检测结果的稳定性。
(3)本发明通过使用萘、乙酸乙酯和甲醇的混合溶液作为内标液，提高了冰片含量检测精确度和稳定性。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
说明：本申请表1中“-”表示，未对该项结果进行检测。
实施例1蒙酸模贴膏的质量控制方法
(1)通过显色反应对蒙酸模贴膏进行定性分析：(a)取2片蒙酸模贴膏剪成面积为1×1cm2的小块，用50ml体积百分浓度为95％乙醇溶液进行溶解，取上清液作为供试品溶液1；(b)取1ml步骤(a)制得的供试品溶液1，加入1ml的质量百分浓度为4％的氢氧化钾溶液，合格品制成的供试品溶液显红色。
(2)对蒙酸模贴膏中的水杨酸甲酯进行定性分析：取2片蒙酸模贴膏剪成面积为1×1cm2的小块使用20ml甲醇进行溶解，过滤收集滤液并蒸干，使用5ml乙醇溶解蒸干后得到的物质，得到供试品溶液2；制备0.5mg/ml的水杨酸甲酯对照品乙醇溶液；将供试品溶液2和水杨酸甲酯乙醇溶液分别点于同一硅胶g薄层板上，以体积比为12:4的甲苯-石油醚为展开剂进行展开，晾干后置于365nm的紫外光下观察，合格品制成的供试品溶液和水杨酸甲酯对照品溶液在相同位置显示相同颜色的荧光斑点；
(3)对蒙酸模的含量进行定量分析：制备15μg/ml大黄酚对照品乙醇溶液，取2片蒙酸模贴膏剪成面积为1×1cm2的小块使用25ml90％乙醇溶液进行溶解，过滤后将上清液蒸干，之后使用5ml氯仿对蒸干后的物质进行溶解，过滤后将上清液蒸干，之后在用5ml乙醇溶液对蒸干后的物质进行溶解，制得供试品溶液3，使用液相色谱仪检测大黄酚的含量，以十八烷基硅烷键合硅胶为色谱柱填充剂，以体积比为75：30：1的乙腈：水：乙醇溶液的混合液为流动相，流动相中的乙醇溶液的体积百分含量为95％，检测波长为254nm；
(4)气相色谱法对薄荷脑和冰片的含量进行定量分析，冰片的含量以龙脑的含量计，①配制由萘、乙酸乙酯和甲醇组成的内标液，萘的浓度为5μg/ml，乙醇乙酯和甲醇的体积比为2:1；②取两片蒙酸模贴膏切成1×1cm2，置挥发油提取器中，加入120ml去离子水，提取挥发油0.5h并使用8ml乙酸乙酯收集挥发油，分取乙酸乙酯层，之后加入3ml内标液，加乙酸乙酯定容至25ml,制成供试品溶液4，进行气相色谱测定；③取48mg薄荷脑和16mg的龙脑，分别置于10ml的容量瓶中，分别加入2ml步骤①制备的内标液，定用乙酸乙酯定容至10ml，注入气相色谱仪，测定校正因子；④气相色谱条件为：使用peg-20m毛细管柱，升温至110℃保温20min，再以10℃
/min的速度升温至130℃，保持5min。
实施例2蒙酸模贴膏的质量控制方法
(1)通过显色反应对蒙酸模贴膏进行定性分析：(a)取2片蒙酸模贴膏剪成面积为1×1cm2的小块，用30ml体积百分浓度为90％乙醇溶液进行溶解，取上清液作为供试品溶液1；(b)取1ml步骤(a)制得的供试品溶液1，加入1ml的质量百分浓度为8％的氢氧化钾溶液，合格品制成的供试品溶液显红色；(c)取1ml步骤(a)制得的供试品溶液1，加入0.5ml的质量百分浓度为8％的硫酸溶液，合格品制成的供试品溶液出现分层，且分层液面出现紫红色圆环；
(2)对蒙酸模贴膏中的水杨酸甲酯进行定性分析：取2片蒙酸模贴膏剪成面积为1×1cm2的小块使用30ml甲醇进行溶解，过滤收集滤液并蒸干，使用5ml乙醇溶解蒸干后得到的物质，得到供试品溶液2；制备1.2mg/ml的水杨酸甲酯对照品乙醇溶液；将供试品溶液2和水杨酸甲酯乙醇溶液分别点于同一硅胶g薄层板上，以体积比为8:4的甲苯-石油醚为展开剂进行展开，晾干后置于365nm的紫外光下观察，合格品制成的供试品溶液和水杨酸甲酯对照品溶液在相同位置显示相同颜色的荧光斑点；
(3)对蒙酸模的含量进行定量分析：制备25μg/ml大黄酚对照品乙醇溶液，取2片蒙酸模贴膏剪成面积为1×1cm2的小块使用50ml95％乙醇溶液进行溶解，过滤后将上清液蒸干，之后使用12ml氯仿对蒸干后的物质进行溶解，过滤后将上清液蒸干，之后在用12ml90％乙醇溶液对蒸干后的物质进行溶解，制得供试品溶液3，使用液相色谱仪检测大黄酚的含量，以十八烷基硅烷键合硅胶为色谱柱填充剂，以体积比为75：20：5的乙腈：水：乙醇溶液的混合液为流动相，流动相中的乙醇溶液的体积百分含量为90％，检测波长为254nm；
(4)气相色谱法对薄荷脑和冰片的含量进行定量分析，冰片的含量以龙脑的含量计，①配制由萘、乙酸乙酯和甲醇组成的内标液，萘的浓度为5μg/ml，乙醇乙酯和甲醇的体积比为5:1；②取两片1×1cm2蒙酸模贴膏，置挥发油提取器中，加入80ml去离子水，提取挥发油2h并使用3ml乙酸乙酯收集挥发油，分取乙酸乙酯层，之后加入8ml内标液，加乙酸乙酯定容至25ml,制成供试品溶液4，进行气相色谱测定；③取48mg薄荷脑和16mg的龙脑，分别置于10ml的容量瓶中，分别加入2ml步骤①制备的内标液，定用乙酸乙酯定容至10ml，注入气相色谱仪，测定校正因子；④气相色谱条件为：使用peg-20m毛细管柱，升温至110℃保温20min，再以10℃/min的速度升温至130℃，保持5min。
实施例3蒙酸模贴膏的质量控制方法
(1)通过显色反应对蒙酸模贴膏进行定性分析：(a)取蒙酸模贴膏剪成面积为1×1cm2的小块，用20ml体积百分浓度为93％乙醇溶液进行溶解，取上清液作为供试品溶液1；(b)取1ml步骤(a)制得的供试品溶液1，加入1ml的质量百分浓度为6％的氢氧化钾溶液，合格品制成的供试品溶液显红色；(c)取1ml步骤(a)制得的供试品溶液1，加入0.5ml的质量百分浓度为12％的硫酸溶液，合格品制成的供试品溶液出现分层，且分层液面出现紫红色圆环；
(d)取1ml步骤(a)制得的供试品溶液1，加入0.5ml的醋酐，再加入0.5ml的质量百分浓度为8％的硫酸，合格品制成的供试品溶液下层显紫红色或红色；
(2)对蒙酸模贴膏中的水杨酸甲酯进行定性分析：取1×1cm2蒙酸模贴膏使用20ml甲醇进行溶解，过滤收集滤液并蒸干，使用3ml乙醇溶解蒸干后得到的物质，得到供试品溶液2；制备1mg/ml的水杨酸甲酯对照品乙醇溶液；将供试品溶液2和水杨酸甲酯乙醇溶液分别点于同一硅胶g薄层板上，以体积比为10:4的甲苯-石油醚为展开剂进行展开，晾干后置于365nm的紫外光下观察，合格品制成的供试品溶液和水杨酸甲酯对照品溶液在相同位置显示相同颜色的荧光斑点；
(3)对蒙酸模的含量进行定量分析：制备20μg/ml大黄酚对照品乙醇溶液，取2片蒙酸模贴膏剪成面积为1×1cm2的小块使用30ml95％乙醇溶液进行溶解，过滤后将上清液蒸干，之后使用10ml氯仿对蒸干后的物质进行溶解，过滤后将上清液蒸干，之后在用10ml95％乙醇溶液对蒸干后的物质进行溶解，制得供试品溶液3，使用液相色谱仪检测大黄酚的含量，以十八烷基硅烷键合硅胶为色谱柱填充剂，以体积比为75：25：2的乙腈：水：乙醇溶液的混合液为流动相，流动相中的乙醇溶液的体积百分含量为92％，检测波长为254nm；
(4)气相色谱法对薄荷脑和冰片的含量进行定量分析，冰片的含量以龙脑的含量计，①配制由萘、乙酸乙酯和甲醇组成的内标液，萘的浓度为5μg/ml，乙醇乙酯和甲醇的体积比为4:1；②取两片2蒙酸模贴膏剪成1×1cm2的小块，置挥发油提取器中，加入100ml去离子水，提取挥发油1h并使用5ml乙酸乙酯收集挥发油，分取乙酸乙酯层，之后加入5ml内标液，加乙酸乙酯定容至25ml,制成供试品溶液4，进行气相色谱测定；③取48mg薄荷脑和16mg的龙脑，分别置于10ml的容量瓶中，分别加入2ml步骤①制备的内标液，定用乙酸乙酯定容至10ml，注入气相色谱仪，测定校正因子；④气相色谱条件为：使用peg-20m毛细管柱，升温至110℃保温20min，再以10℃/min的速度升温至130℃，保持5min。
实施例4蒙酸模贴膏的质量控制方法
(1)通过显色反应对蒙酸模贴膏进行定性分析：所述步骤(1)包括以下具体的操作步骤：(a)取2片蒙酸模贴膏剪成面积为1×1cm2的小块，用20ml体积百分浓度为95％乙醇溶液进行溶解，取上清液作为供试品溶液1；(b)取1ml步骤(a)制得的供试品溶液1，加入1ml质量百分浓度为6.5％的氢氧化钾溶液，合格品制成的供试品溶液显红色；(c)取1ml步骤(a)制得的供试品溶液1，加入0.5ml的质量百分浓度为10％的硫酸溶液，合格品制成的供试品溶液出现分层，且分层液面出现紫红色圆环；(d)取1ml步骤(a)制得的供试品溶液1，加入0.5ml的醋酐，再加入0.5ml的质量百分浓度为10％的硫酸，合格品制成的供试品溶液下层显紫红色或红色；(e)取1ml步骤(a)制得的供试品溶液1，加入0.5ml浓度为1％(g/ml)的香草醛浓硫酸溶液，合格品制成的供试品溶液下层显紫红色或红色；
(2)对蒙酸模贴膏中的水杨酸甲酯进行定性分析：取2片蒙酸模贴膏剪成1×1cm2的小块，使用50ml甲醇进行溶解(250w，33khz,1h)，过滤收集滤液并蒸干，使用1ml乙醇溶解蒸干后得到的物质，得到供试品溶液2；制备1mg/ml的水杨酸甲酯对照品乙醇溶液；将供试品溶液2和水杨酸甲酯乙醇溶液分别点于同一硅胶g薄层板上，以体积比为10:4的甲苯-石油醚为展开剂进行展开，晾干后置于365nm的紫外光下观察，合格品制成的供试品溶液和水杨酸甲酯对照品溶液在相同位置显示相同颜色的荧光斑点；
(3)对蒙酸模的含量进行定量分析：制备20μg/ml大黄酚对照品乙醇溶液，取两片蒙酸模贴膏剪成1×1cm2的小块，使用30ml95％乙醇溶液对蒙酸模贴膏进行溶解(250w，33khz,1h)，过滤后将上清液蒸干，之后使用10ml氯仿对蒸干后的物质进行溶解，过滤后将上清液蒸干，之后在用10ml95％乙醇溶液对蒸干后的物质进行溶解，制得供试品溶液3，使用液相色谱仪检测大黄酚的含量，以十八烷基硅烷键合硅胶为色谱柱填充剂，以体积比为75：25：2的乙腈：水：乙醇溶液的混合液为流动相，流动相中的乙醇溶液的体积百分含量为92％，检测波长为254nm；
(4)气相色谱法对薄荷脑和冰片的含量进行定量分析，冰片的含量以龙脑的含量计，①配制由萘、乙酸乙酯和甲醇组成的内标液，萘的浓度为5μg/ml，乙醇乙酯和甲醇的体积比为4:1；②取两片1×1cm2蒙酸模贴膏，置挥发油提取器中，加入100ml去离子水，提取挥发油1h并使用5ml乙酸乙酯收集挥发油，分取乙酸乙酯层，之后加入5ml内标液，加乙酸乙酯定容至25ml,制成供试品溶液4，进行气相色谱测定；③取48mg薄荷脑和16mg的龙脑，分别置于10ml的容量瓶中，分别加入2ml步骤①制备的内标液，定用乙酸乙酯定容至10ml，注入气相色谱仪，测定校正因子；④气相色谱条件为：使用peg-20m毛细管柱，升温至110℃保温20min，再以10℃/min的速度升温至130℃，保持5min。
对比例1蒙酸模贴膏的质量控制方法
和实施例4区别仅在于步骤(3)采用以下步骤：制备20μg/ml大黄酚对照品乙醇溶液，取两片你蒙酸模贴膏剪成1×1cm2的小块，使用30ml95％乙醇溶液对蒙酸模贴膏进行溶解，过滤后将上清液蒸干，用10ml95％乙醇溶液对蒸干后的物质进行溶解，制得供试品溶液3，使用液相色谱仪检测大黄酚的含量，以十八烷基硅烷键合硅胶为色谱柱填充剂，以体积比为75：25：2的乙腈：水：乙醇溶液的混合液为流动相，流动相中的乙醇溶液的体积百分含量为92％，检测波长为254nm。
对比例2蒙酸模贴膏的质量控制方法
和实施例4的区别仅在于步骤(3)中的流动相是体积比为75：25的乙腈：水的混合液。
对比例3蒙酸模贴膏的质量控制方法
和实施例4的区别仅在于步骤(4)所用内标液为萘、乙酸乙酯内标液，萘的浓度为5μg/ml。
对比例4蒙酸模贴膏的质量控制方法
中国专利公布cn201010133632.7实验例1和实验例2公开的方法，进行蒙酸模、薄荷脑和冰片含量的测定。
本申请实验所用蒙酸模贴膏为中国专利公布cn201010133632.7实施例1制备的蒙酸模贴膏。
在相同条件下，对新制备的供试品溶液3、供试品溶液4，和对比例4制备的供试品溶液，进行定量分析，将5次平行试验的相对标准偏差记为rsd1。将新制备的各供试品溶液，分别在0h、1h、2h、4h测定其蒙酸模、薄荷脑和冰片的含量，计算4个时间段测定结果的相对标准偏差，记为rsd2。各统计结果见表1。
表1
本发明的检测方法，在定量检测之前，采用多种定性检测的方法，对蒙酸模中是否存在各有效成分进行检测，当没有出现某项定性指标时，不需经过定量检测即可认定蒙酸模贴膏的质量不合格。通过定性检测的方法，对蒙酸模的质量进行初步的控制，节约了检测时间，提高了质量控制的效率。
表1中的实验数据显示，使用本发明的方法，对蒙酸模贴膏进行质量控制，蒙酸模、薄荷脑和冰片定性检测的准确性和稳定性均有提高。将实施例4和对比例1的实验数据进行比较，可以发现在步骤(3)中通过联合使用乙醇的提取和氯仿、乙醇对提取物的再次提取和溶解，能够提高蒙酸模检测结果的精密度和稳定性。将实施例4和对比例2的实验数据进行比较，可以发现在步骤(3)中通过使用乙腈-水-乙醇的混合溶液作为流动相，能够提高检测结果的稳定性。将实施例4和对比例3进行比较，可以发现步骤(4)中使用萘、乙酸乙酯和甲醇的混合溶液作为内标液，提高了冰片、薄荷脑含量检测的精确度和稳定性。