一种利用UPLC-MS/MS法检测水中噻森铜的方法与流程

本发明涉及环境检测
技术领域：
，具体涉及一种利用uplc-ms/ms法检测水中噻森铜的方法。
背景技术：
：噻森铜为噻唑类有机铜杀菌剂，主要防治水稻白叶枯病、细菌性条斑病、白菜软腐病和番茄青枯病。高效广谱，毒性低，安全环保，无公害，对细菌性病害特效，对真菌性病害高效，在酸性条件下稳定，能与其它农药混用，是农业部全国农技中心重点推荐农药品种之一。噻森铜的检测分析方法目前报道的只有高效液相色谱法，方法不仅需要衍生，而且需要进行反复的萃取，操作复杂，且衍生转化率不高，衍生产物稳定性差，导致检出限过高，灵敏度偏低，重复性差，不能满足现代农业对于农药残留，水环境中低含量农药的检测。而lc-ms/ms检测噻森铜的方法国内外均未见报道，因此有必要探索专属有效的检测方法应用于噻森铜的分析检测。噻森铜残留分析方法:郭治强,吴莉宇,王强,李振,赵华.噻森铜残留分析方法[j].农药,2009,48(07):509-510噻森铜残留分析方法:采用硫代硫酸钠水解,找出噻森铜与amt的转化关系,建立噻森铜在水中残留的高效液相色谱测定方法。流动相为乙腈-0.01％乙酸水溶液(体积比30∶70)。实验结果表明:噻森铜在水中转化成amt的转化系数为0.4556,方法的平均回收率为(90.7±2.6)％,相对标准偏差小于3.25％。该方法平均回收率较低，相对偏差较大，实验过程相对复杂，检测结果稳定性差。cn103592404b-一种检测果蔬中有机铜农药残留量的方法,公开了一种检测果蔬中有机铜农药残留量的方法，采用分散固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱法检测，具体包括以下步骤：(1)标准溶液的配制；(2)样品中加入破络剂破络，然后加入甲醇，涡旋振荡、超声提取；(3)净化；(4)仪器检测：用步骤(1)中的系列浓度标准工作液进样，uplc-ms/ms检测，对步骤(3)收集的净化样品进行uplc-ms/ms检测；(5)标准曲线的建立；(6)结果分析，计算试样中有机铜农药的含量。采用的破络剂包括硫化钠(na2s)、硫酸亚铁(feso4)、次氯酸钠(naclo)、fenton试剂，这些试剂有些本身有毒性，或与其他试剂发生反应可能会产生毒性，而且直接加入固体试剂破络效果差，本发明提供的检测水中噻森铜的方法中采用edta混合液溶进行衍生化处理，得到衍生化后的噻森铜标样储备液，曝气搅拌配制。最小检出量为1.2×10-11g，最低检出浓度为0.01mg/kg，高于本发明的检出限0.427μg/l；高效液相色谱法测定烟草上的噻森铜，李智宁，贵州大学精细化工研究开发中心公开了一种高效液相色谱(hplc-dad)测定烟草中噻森铜残留量的分析方法。烟叶样品经硫代硫酸钠溶液衍生和提取,离心,三氯乙烯净化,乙酸乙酯萃取,高效液相色谱检测。该方法的平均回收率为79.55％～98.16％,相对标准偏差为0.94％～7.55％,噻森铜最低检出限为1.8ng,噻森铜在烟叶样品中的最低检测限为0.5mg/kg,适合烟草基质中噻森铜残留量的准确检测，但对于水中微量的噻森铜，该方法不能到达检测要求。cn106198508b-一种高灵敏度快速检测含重金属类农药的方法，公开了将传感器与农药接触，通过指示剂与含重金属类农药中的重金属之间的螯合作用使传感器上的指示剂产生颜色反应，并通过传感器对定量农药进行富集来提高指示剂的颜色变化强度，然后利用成像设备采集指示剂反应前后图像，提取其中红、绿、蓝(rgb)三个通道的颜色变化值；然后利用公式计算得到传感器与农药反应前后的颜色变化值ed，该方法为现存农药残留快检方法的补充方法，针对噻森铜残留量的检测，检出限为mg/kg级别，水中噻森铜残留量浓度更低时则达不到检测目的。技术实现要素：本发明的目的是克服现有技术中检出限高，灵敏度偏低，重复性差等缺陷，提供一种利用uplc-ms/ms法检测水中噻森铜的检测方法。所述方法包括以下步骤：1)edta混合液的制备：称取0.5～2gedta-na2和1～5gl-半胱氨酸盐置于1000ml烧杯中，加900ml水，用1～3mol/lnaoh调节ph＝10～14，转移至1000ml容量瓶中并定容至刻度，得edta混合液；2)供试品溶液的制备：称取30％春雷·噻森铜悬浮剂试样0.3232g于100ml容量瓶中，加曝气水稀释至刻度，超声2～10min，取2.0ml于2000ml烧杯中，用曝气水稀释至2000ml刻度，得浓度为808μg/l噻森铜水溶液，即为待测噻森铜水溶液，用edta混合液1:1～1:3处理待测噻森铜水溶液，得衍生化后的噻森铜溶液，待uplc-ms/ms检测；3)标准品溶液的制备：称取噻森铜标样0.0105g置于100.00ml容量瓶中，用edta混合液溶稀释并定容至刻度，得噻森铜浓度为96.60mg/l的标样储备液，吸取适当标样储备液，用edta混合液稀释配制成系列梯度为9.66μg/l、19.32μg/l、48.30μg/l、96.60μg/l、193.20μg/l、483.00μg/l的标准工作溶液，待uplc-ms/ms测定；4)测定和结果计算：设定仪器参数，待仪器稳定后将对照品溶液和供试品溶液进行uplc-ms/ms测定，记录色谱图，以噻森铜衍生物含量作为噻森铜含量，按外标法进行计算。优选的，所述方法包括以下步骤：1)edta混合液的制备：称取1～1.5gedta-na2和2～4gl-半胱氨酸盐1000ml烧杯中，加900ml水，用1.5～2.5mol/lnaoh调节ph＝11～13，转移至1000ml容量瓶中并定容至刻度，得edta混合液；2)供试品溶液的制备：称取30％春雷·噻森铜悬浮剂试样0.3232g于100ml容量瓶中，加曝气水稀释至刻度，超声3～8min，取2.0ml于2000ml烧杯中，用曝气水稀释至2000ml刻度，得浓度为808μg/l噻森铜水溶液，即为待测噻森铜水溶液，用edta混合液1:1～1:2处理待测噻森铜水溶液，得衍生化后的噻森铜溶液，待uplc-ms/ms检测；3)标准品溶液的制备：称取噻森铜标样0.0105g置于100.00ml容量瓶中，用edta混合液溶稀释并定容至刻度，得噻森铜浓度为96.60mg/l的标样储备液，吸取适当标样储备液，用edta混合液稀释配制成系列梯度为9.66μg/l、19.32μg/l、48.30μg/l、96.60μg/l、193.20μg/l、483.00μg/l的标准工作溶液，待uplc-ms/ms测定；4)测定和结果计算：设定仪器参数，待仪器稳定后将对照品溶液和供试品溶液进行uplc-ms/ms测定，记录色谱图，以噻森铜衍生物含量作为噻森铜含量，按外标法进行计算。进一步优选的，所述方法包括以下步骤：1)edta混合液的制备：称取1.21gedta-na2和3.72gl-半胱氨酸盐1000ml烧杯中，加900ml水，用2mol/lnaoh调节ph＝12，转移至1000ml容量瓶中并定容至刻度，得edta混合液；2)供试品溶液的制备：称取30％春雷·噻森铜悬浮剂试样0.3232g于100ml容量瓶中，加曝气水稀释至刻度，超声5min，取2.0ml于2000ml烧杯中，用曝气水稀释至2000ml刻度，得浓度为808μg/l噻森铜水溶液，即为待测噻森铜水溶液，用edta混合液1:1处理待测噻森铜水溶液，得衍生化后的噻森铜溶液，待uplc-ms/ms检测；3)标准品溶液的制备：称取噻森铜标样0.0105g置于100.00ml容量瓶中，用edta混合液溶稀释并定容至刻度，得噻森铜浓度为96.60mg/l的标样储备液，吸取适当标样储备液，用edta混合液稀释配制成系列梯度为9.66μg/l、19.32μg/l、48.30μg/l、96.60μg/l、193.20μg/l、483.00μg/l的标准工作溶液，待uplc-ms/ms测定；4)测定和结果计算：设定仪器参数，待仪器稳定后将对照品溶液和供试品溶液进行uplc-ms/ms测定，记录色谱图，以噻森铜衍生物含量作为噻森铜含量，按外标法进行计算。所述edta混合液处理试样溶液和标样溶液的步骤为：(1)所述edta混合液处理试样溶液的步骤为：将试样待测噻森铜水溶液，用edta混合液按体积比1:3稀释，旋涡混合5～20min，待充分反应后，再超声5～20min，再用0.45um滤膜过滤，即得；(2)所述edta混合液处理标样溶液的步骤为：称取噻森铜标样，用edta混合液溶稀释，旋涡混合5min，再超声5min，并定容至刻度，得噻森铜浓度为96.60mg/l的标样储备液，吸取适当标样储备液，用edta混合液稀释配制成系列梯度为9.66μg/l、19.32μg/l、48.30μg/l、96.60μg/l、193.20μg/l、483.00μg/l的标准工作溶液，待uplc-ms/ms测定；噻森铜在edta混合液溶液中发生的转化过程如下：优选的，所述edta混合液处理试样溶液和标样溶液的制备步骤为：(1)所述edta混合液处理试样溶液的步骤为：将试样待测噻森铜水溶液，用edta混合液按体积比1:2稀释，旋涡混合5～10min，待充分反应后，再超声5～10min，再用0.45um滤膜过滤，即得；(2)所述edta混合液处理标样溶液的步骤为：称取噻森铜标样，用edta混合液溶稀释，旋涡混合5min，再超声5min，并定容至刻度，得噻森铜浓度为96.60mg/l的标样储备液，吸取适当标样储备液，用edta混合液稀释配制成系列梯度为9.66μg/l、19.32μg/l、48.30μg/l、96.60μg/l、193.20μg/l、483.00μg/l的标准工作溶液，待uplc-ms/ms测定；噻森铜在edta混合液溶液中发生的转化过程如下：进一步优选的，所述edta混合液处理试样溶液和标样溶液的制备步骤为：(1)所述edta混合液处理试样溶液的步骤为：将试样待测噻森铜水溶液，用edta混合液按体积比1:1稀释，旋涡混合5min，待充分反应后，再超声5min，再用0.45um滤膜过滤，即得；(2)所述edta混合液处理标样溶液的步骤为：称取噻森铜标样，用edta混合液溶稀释，旋涡混合5min，再超声5min，并定容至刻度，得噻森铜浓度为96.60mg/l的标样储备液，吸取适当标样储备液，用edta混合液稀释配制成系列梯度为9.66μg/l、19.32μg/l、48.30μg/l、96.60μg/l、193.20μg/l、483.00μg/l的标准工作溶液，待uplc-ms/ms测定；噻森铜在edta混合液溶液中发生的转化过程如下：所述uplc-ms/ms测定，hplc操作条件为：1)进样体积：3.0μl；2)流速：0.5ml/min；3)柱温：40℃；4)洗脱溶剂及程序：洗脱溶剂：流动相a：乙腈,流动相b：0.1％甲酸水；洗脱程序为：时间(分钟)流动相a(％)流动相b(％)0～2.5min82％～90％18％～10％2.5～3.1min90％～82％10％～18％3.1～7.0min82％18％uplc-ms/ms测定，msd操作条件为：1)监测模式：mrm；2)负离子模式；3)离子源参数：干燥气：n2；干燥气温度：350℃；干燥气流速：7l/min；鞘气：n2；鞘气温度：100℃；鞘气流速：9l/min；雾化器压力：55psi；喷嘴电压：500v；毛细管电压：4500v，emv增益(-)：500v。mrm离子采集参数为：*：为定量离子定性鉴定：对于农药的母离子和子离子对，若其离子色谱保留时间与标样品工作溶液一致(变化范围在±2.5％之内)；且样品中目标化合物的离子丰度比率(ratio)不超过20％时，则判断该所测质谱信号为该种农药，若上述两个条件不能同时满足，则判断不含该种农药。本方法对噻森铜的检出限lod为0.427μg/l，loq为1.422μg/l。本发明具有以下优点：1、按本发明检测方法学验证:噻森铜的进样浓度在9.66μg/l～483.00μg/l范围内呈良好的线性关系，线性方程为y＝12.67x-1.45，r2＝0.9997相对标准偏差为1.14，平均回收率为86.89％，lod为0.427μg/l，loq为1.422μg/l，具有操作简便、分析快速、结果准确，分离效果好，高灵敏度的优点。2、本发明提供的检测水中噻森铜的方法中采用edta混合液溶进行衍生化处理，把难于分析的物质转化为与其化学结构相似但易于分析的物质，便于量化和分离。3、本发明克服了以往用气相色谱法，高效液相色谱法等方法的高检出限，供试品处理复杂，本发明检出限可以达到0.427μg/l，定量限达到1.422μg/l，而且灵敏度高，能很好检测出水中噻森铜的含量，为水质评价及环境保护通过参考依据，本发明对水生动物保护和水资源保护有重要意义。附图说明：图1：噻森铜定性定量离子以及离子丰度比率图图2：噻森铜标准曲线图图3：噻森铜标准品色谱图图4：噻森铜试样色谱图具体实施方式：以下结合说明书附图和具体实施例来进一步说明本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本
技术领域：
常规试剂、方法和设备。除非特别说明，本实施例所用的原料和设备均为本
技术领域：
常规市购的原料和设备。以下各实施例中涉及的仪器以及试剂包括但不限于：超高压高效液相色谱-质谱联用仪(agilent1290-6470a)，具有ajsesi离子源，masshunter数据采集、定性分析、定量分析工作站；色谱柱：agilenthilicplusrrhd(2.1×50mm，1.8μm)；试剂：乙腈：色谱纯，默克股份有限公司，(reag.pheur，lot：ja069430)；甲酸：色谱纯，上海安谱科学仪器有限公司，(cnwtechnologies，lot：k3560090)；乙二胺四乙酸二钠：分析纯，国药集团化学试剂有限公司，lotno：f20110105；l-半胱氨酸盐酸盐(无水)：国药集团化学试剂有限公司，lotno：20160301；噻森铜标样：已知质量分数，ω＝92.0％，浙江东方化工有限公司提供；30％春雷·噻森铜悬浮剂试样:(其中噻森铜质量分子数为25％；春雷霉素质量分数为5％),浙江东风化工有限公司。超纯水：电阻率，18.2mω*cm；曝气水：实验室自制，由超纯水经过曝气处理而得。实施例1edta混合液的制备：称取0.5gedta-na2和1gl-半胱氨酸盐置于1000ml烧杯中，加900ml水，用1mol/lnaoh调节ph＝10，转移至1000ml容量瓶中并定容至刻度，得edta混合液；供试品溶液的制备：称取30％春雷·噻森铜悬浮剂试样0.3232g于100ml容量瓶中，加曝气水稀释至刻度，超声2min，取2.0ml于2000ml烧杯中，用曝气水稀释至2000ml刻度，得浓度为808μg/l噻森铜水溶液，即为待测噻森铜水溶液，用上述配制好的edta混合液按体积比1:1稀释，旋涡混合5min，待充分反应后，再超声5min，再用0.45um滤膜过滤，即得衍生化后的噻森铜溶液，待uplc-ms/ms检测；标准品溶液的制备：称取噻森铜标样0.0105g置于100.00ml容量瓶中，用edta混合液溶稀释，旋涡混合5min，待充分反应后，再超声5min，用edta混合液溶稀释至刻度，再用0.45um滤膜过滤，并定容至刻度，得噻森铜浓度为96.60mg/l的标样储备液，吸取适当标样储备液，用edta混合液稀释配制成系列梯度为9.66μg/l、19.32μg/l、48.30μg/l、96.60μg/l、193.20μg/l、483.00μg/l的标准工作溶液，待uplc-ms/ms测定；测定和结果计算：设定仪器参数，待仪器稳定后将对照品溶液和供试品溶液进行进行uplc-ms/m测定，记录色谱峰面积；以噻森铜衍生物浓度为横坐标，噻森铜衍生物峰面积为纵坐标绘制标准曲线，将供试品中测得噻森铜衍生物峰面积代入标准曲线，得到供试品溶液中噻森铜衍生物的含量，以噻森铜衍生物含量作为噻森铜含量进行计算。其中hplc操作条件为：进样体积：3.0μl；流速：0.5ml/min；柱温：40℃；流动相：乙腈+0.1％甲酸水；洗脱程序为：流动相a：乙腈,流动相b：0.1％甲酸水时间(分钟)流动相a(％)流动相b(％)0～2.5min82％～90％18％～10％2.5～3.1min90％～82％10％～18％3.1～7.0min82％18％msd操作条件为：监测模式：mrm；检测模式：负离子模式；离子源参数：干燥气：n2；干燥气温度：350℃；干燥气流速：7l/min；鞘气：n2；鞘气温度：100℃；鞘气流速：9l/min；雾化器压力：55psi；喷嘴电压：500v；毛细管电压：4500v，emv增益(-)：500v。mrm离子采集参数为：*：为定量离子定性鉴定：对于农药的母离子和子离子对，若其离子色谱保留时间与标样品工作溶液一致(变化范围在±2.5％之内)；且样品中目标化合物的离子丰度比率(ratio)不超过20％时，则判断该所测质谱信号为该种农药，若上述两个条件不能同时满足，则判断不含该种农药。实施例2edta混合液的制备：称取1gedta-na2和2gl-半胱氨酸盐置于1000ml烧杯中，加900ml水，用2mol/lnaoh调节ph＝11，转移至1000ml容量瓶中并定容至刻度，得edta混合液；供试品溶液的制备：称取30％春雷·噻森铜悬浮剂试样0.3232g于100ml容量瓶中，加曝气水稀释至刻度，超声3min，取2.0ml于2000ml烧杯中，用曝气水稀释至2000ml刻度，得浓度为808μg/l噻森铜水溶液,即为待测噻森铜水溶液，用上述配制好的edta混合液按体积比1:1.5稀释，旋涡混合6min，待充分反应后，再超声6min，再用0.45um滤膜过滤，即得衍生化后的噻森铜溶液，待uplc-ms/ms检测；标准品溶液的制备：称取噻森铜标样0.0105g置于100.00ml容量瓶中，用edta混合液溶稀释，旋涡混合6min，待充分反应后，再超声6min，用edta混合液溶稀释至刻度，再用0.45um滤膜过滤，并定容至刻度，得噻森铜浓度为96.60mg/l的标样储备液，吸取适当标样储备液，用edta混合液稀释配制成系列梯度为9.66μg/l、19.32μg/l、48.30μg/l、96.60μg/l、193.20μg/l、483.00μg/l的标准工作溶液，待uplc-ms/ms测定；测定和结果计算：设定仪器参数，待仪器稳定后将对照品溶液和供试品溶液进行进行uplc-ms/m测定，记录色谱峰面积；以噻森铜衍生物浓度为横坐标，噻森铜衍生物峰面积为纵坐标绘制标准曲线，将供试品中测得噻森铜衍生物峰面积代入标准曲线，得到供试品溶液中噻森铜衍生物的含量，以噻森铜衍生物含量作为噻森铜含量进行计算。其中hplc操作条件为：进样体积：3.0μl；流速：0.5ml/min；柱温：40℃；流动相：乙腈+0.1％甲酸水；洗脱程序为：流动相a：乙腈,流动相b：0.1％甲酸水时间(分钟)流动相a(％)流动相b(％)0～2.5min82％～90％18％～10％2.5～3.1min90％～82％10％～18％3.1～7.0min82％18％msd操作条件为：监测模式：mrm；检测模式：负离子模式；离子源参数：干燥气：n2；干燥气温度：350℃；干燥气流速：7l/min；鞘气：n2；鞘气温度：100℃；鞘气流速：9l/min；雾化器压力：55psi；喷嘴电压：500v；毛细管电压：4500v，emv增益(-)：500v。mrm离子采集参数为：*：为定量离子定性鉴定：对于农药的母离子和子离子对，若其离子色谱保留时间与标样品工作溶液一致(变化范围在±2.5％之内)；且样品中目标化合物的离子丰度比率(ratio)不超过20％时，则判断该所测质谱信号为该种农药，若上述两个条件不能同时满足，则判断不含该种农药。实施例3edta混合液的制备：称取2gedta-na2和3gl-半胱氨酸盐置于1000ml烧杯中，加900ml水，用2.5mol/lnaoh调节ph＝13，转移至1000ml容量瓶中并定容至刻度，得edta混合液；供试品溶液的制备：称取30％春雷·噻森铜悬浮剂试样0.3232g于100ml容量瓶中，加曝气水稀释至刻度，超声4min，取2.0ml于2000ml烧杯中，用曝气水稀释至2000ml刻度，得浓度为808μg/l噻森铜水溶液，即为待测噻森铜水溶液，用上述配制好的edta混合液按体积比1:2稀释，旋涡混合8min，待充分反应后，再超声8min，再用0.45um滤膜过滤，即得衍生化后的噻森铜溶液，待uplc-ms/ms检测；标准品溶液的制备：称取噻森铜标样0.0105g置于100.00ml容量瓶中，用edta混合液溶稀释，旋涡混合8min，待充分反应后，再超声8min，用edta混合液溶稀释至刻度，再用0.45um滤膜过滤，并定容至刻度，得噻森铜浓度为96.60mg/l的标样储备液，吸取适当标样储备液，用edta混合液稀释配制成系列梯度为9.66μg/l、19.32μg/l、48.30μg/l、96.60μg/l、193.20μg/l、483.00μg/l的标准工作溶液，待uplc-ms/ms测定；测定和结果计算：设定仪器参数，待仪器稳定后将对照品溶液和供试品溶液进行进行uplc-ms/m测定，记录色谱峰面积；以噻森铜衍生物浓度为横坐标，噻森铜衍生物峰面积为纵坐标绘制标准曲线，将供试品中测得噻森铜衍生物峰面积代入标准曲线，得到供试品溶液中噻森铜衍生物的含量，以噻森铜衍生物含量作为噻森铜含量进行计算。其中hplc操作条件为：进样体积：3.0μl；流速：0.5ml/min；柱温：40℃；流动相：乙腈+0.1％甲酸水；洗脱程序为：流动相a：乙腈,流动相b：0.1％甲酸水时间(分钟)流动相a(％)流动相b(％)0～2.5min82％～90％18％～10％2.5～3.1min90％～82％10％～18％3.1～7.0min82％18％msd操作条件为：监测模式：mrm；检测模式：负离子模式；离子源参数：干燥气：n2；干燥气温度：350℃；干燥气流速：7l/min；鞘气：n2；鞘气温度：100℃；鞘气流速：9l/min；雾化器压力：55psi；喷嘴电压：500v；毛细管电压：4500v，emv增益(-)：500v。mrm离子采集参数为：*：为定量离子定性鉴定：对于农药的母离子和子离子对，若其离子色谱保留时间与标样品工作溶液一致(变化范围在±2.5％之内)；且样品中目标化合物的离子丰度比率(ratio)不超过20％时，则判断该所测质谱信号为该种农药，若上述两个条件不能同时满足，则判断不含该种农药。实施例4edta混合液的制备：称取2gedta-na2和5gl-半胱氨酸盐置于1000ml烧杯中，加900ml水，用3mol/lnaoh调节ph＝13，转移至1000ml容量瓶中并定容至刻度，得edta混合液；供试品溶液的制备：称取30％春雷·噻森铜悬浮剂试样0.3232g于100ml容量瓶中，加曝气水稀释至刻度，超声6min，取2.0ml于2000ml烧杯中，用曝气水稀释至2000ml刻度，得浓度为808μg/l噻森铜水溶液，即为待测噻森铜水溶液，用上述配制好的edta混合液按体积比1:2稀释，旋涡混合10min，待充分反应后，再超声10min，再用0.45um滤膜过滤，即得衍生化后的噻森铜溶液，待uplc-ms/ms检测；标准品溶液的制备：称取噻森铜标样0.0105g置于100.00ml容量瓶中，用edta混合液溶稀释，旋涡混合10min，待充分反应后，再超声10min，用edta混合液溶稀释至刻度，再用0.45um滤膜过滤，并定容至刻度，得噻森铜浓度为96.60mg/l的标样储备液，吸取适当标样储备液，用edta混合液稀释配制成系列梯度为9.66μg/l、19.32μg/l、48.30μg/l、96.60μg/l、193.20μg/l、483.00μg/l的标准工作溶液，待uplc-ms/ms测定；测定和结果计算：设定仪器参数，待仪器稳定后将对照品溶液和供试品溶液进行进行uplc-ms/m测定，记录色谱峰面积；以噻森铜衍生物浓度为横坐标，噻森铜衍生物峰面积为纵坐标绘制标准曲线，将供试品中测得噻森铜衍生物峰面积代入标准曲线，得到供试品溶液中噻森铜衍生物的含量，以噻森铜衍生物含量作为噻森铜含量进行计算。其中hplc操作条件为：进样体积：3.0μl；流速：0.5ml/min；柱温：40℃；流动相：乙腈+0.1％甲酸水；洗脱程序为：流动相a：乙腈,流动相b：0.1％甲酸水时间(分钟)流动相a(％)流动相b(％)0～2.5min82％～90％18％～10％2.5～3.1min90％～82％10％～18％3.1～7.0min82％18％msd操作条件为：监测模式：mrm；检测模式：负离子模式；离子源参数：干燥气：n2；干燥气温度：350℃；干燥气流速：7l/min；鞘气：n2；鞘气温度：100℃；鞘气流速：9l/min；雾化器压力：55psi；喷嘴电压：500v；毛细管电压：4500v，emv增益(-)：500v。mrm离子采集参数为：*：为定量离子定性鉴定：对于农药的母离子和子离子对，若其离子色谱保留时间与标样品工作溶液一致(变化范围在±2.5％之内)；且样品中目标化合物的离子丰度比率(ratio)不超过20％时，则判断该所测质谱信号为该种农药，若上述两个条件不能同时满足，则判断不含该种农药。实施例5edta混合液的制备：称取2gedta-na2和3gl-半胱氨酸盐置于1000ml烧杯中，加900ml水，用3mol/lnaoh调节ph＝14，转移至1000ml容量瓶中并定容至刻度，得edta混合液；供试品溶液的制备：称取30％春雷·噻森铜悬浮剂试样0.3232g于100ml容量瓶中，加曝气水稀释至刻度，超声8min，取2.0ml于2000ml烧杯中，用曝气水稀释至2000ml刻度，得浓度为808μg/l噻森铜水溶液，即为待测噻森铜水溶液，用上述配制好的edta混合液按体积比1:2稀释，旋涡混合10min，待充分反应后，再超声10min，再用0.45um滤膜过滤，即得衍生化后的噻森铜溶液，待uplc-ms/ms检测；标准品溶液的制备：称取噻森铜标样0.0105g置于100.00ml容量瓶中，用edta混合液溶稀释，旋涡混合10min，待充分反应后，再超声10min，用edta混合液溶稀释至刻度，再用0.45um滤膜过滤，并定容至刻度，得噻森铜浓度为96.60mg/l的标样储备液，吸取适当标样储备液，用edta混合液稀释配制成系列梯度为9.66μg/l、19.32μg/l、48.30μg/l、96.60μg/l、193.20μg/l、483.00μg/l的标准工作溶液，待uplc-ms/ms测定；测定和结果计算：设定仪器参数，待仪器稳定后将对照品溶液和供试品溶液进行进行uplc-ms/m测定，记录色谱峰面积；以噻森铜衍生物浓度为横坐标，噻森铜衍生物峰面积为纵坐标绘制标准曲线，将供试品中测得噻森铜衍生物峰面积代入标准曲线，得到供试品溶液中噻森铜衍生物的含量，以噻森铜衍生物含量作为噻森铜含量进行计算。其中hplc操作条件为：进样体积：3.0μl；流速：0.5ml/min；柱温：40℃；流动相：乙腈+0.1％甲酸水；洗脱程序为：流动相a：乙腈,流动相b：0.1％甲酸水时间(分钟)流动相a(％)流动相b(％)0～2.5min82％～90％18％～10％2.5～3.1min90％～82％10％～18％3.1～7.0min82％18％msd操作条件为：监测模式：mrm；检测模式：负离子模式；离子源参数：干燥气：n2；干燥气温度：350℃；干燥气流速：7l/min；鞘气：n2；鞘气温度：100℃；鞘气流速：9l/min；雾化器压力：55psi；喷嘴电压：500v；毛细管电压：4500v，emv增益(-)：500v。mrm离子采集参数为：*：为定量离子定性鉴定：对于农药的母离子和子离子对，若其离子色谱保留时间与标样品工作溶液一致(变化范围在±2.5％之内)；且样品中目标化合物的离子丰度比率(ratio)不超过20％时，则判断该所测质谱信号为该种农药，若上述两个条件不能同时满足，则判断不含该种农药。实施例6edta混合液的制备：称取1.55gedta-na2和2.58gl-半胱氨酸盐置于1000ml烧杯中，加900ml水，用3mol/lnaoh调节ph＝12，转移至1000ml容量瓶中并定容至刻度，得edta混合液；供试品溶液的制备：称取30％春雷·噻森铜悬浮剂试样0.3232g于100ml容量瓶中，加曝气水稀释至刻度，超声10min，取2.0ml于2000ml烧杯中，用曝气水稀释至2000ml刻度，得浓度为808μg/l噻森铜水溶液，即为待测噻森铜水溶液，用上述配制好的edta混合液按体积比1:2稀释，旋涡混合5min，待充分反应后，再超声5min，再用0.45um滤膜过滤，即得衍生化后的噻森铜溶液，待uplc-ms/ms检测；标准品溶液的制备：称取噻森铜标样0.0105g置于100.00ml容量瓶中，用edta混合液溶稀释，旋涡混合5min，待充分反应后，再超声5min，用edta混合液溶稀释至刻度，再用0.45um滤膜过滤，并定容至刻度，得噻森铜浓度为96.60mg/l的标样储备液，吸取适当标样储备液，用edta混合液稀释配制成系列梯度为9.66μg/l、19.32μg/l、48.30μg/l、96.60μg/l、193.20μg/l、483.00μg/l的标准工作溶液，待uplc-ms/ms测定；测定和结果计算：设定仪器参数，待仪器稳定后将对照品溶液和供试品溶液进行进行uplc-ms/m测定，记录色谱峰面积；以噻森铜衍生物浓度为横坐标，噻森铜衍生物峰面积为纵坐标绘制标准曲线，将供试品中测得噻森铜衍生物峰面积代入标准曲线，得到供试品溶液中噻森铜衍生物的含量，以噻森铜衍生物含量作为噻森铜含量进行计算。其中hplc操作条件为：进样体积：3.0μl；流速：0.5ml/min；柱温：40℃；流动相：乙腈+0.1％甲酸水；洗脱程序为：流动相a：乙腈,流动相b：0.1％甲酸水时间(分钟)流动相a(％)流动相b(％)0～2.5min82％～90％18％～10％2.5～3.1min90％～82％10％～18％3.1～7.0min82％18％msd操作条件为：监测模式：mrm；检测模式：负离子模式；离子源参数：干燥气：n2；干燥气温度：350℃；干燥气流速：7l/min；鞘气：n2；鞘气温度：100℃；鞘气流速：9l/min；雾化器压力：55psi；喷嘴电压：500v；毛细管电压：4500v，emv增益(-)：500v。mrm离子采集参数为：*：为定量离子定性鉴定：对于农药的母离子和子离子对，若其离子色谱保留时间与标样品工作溶液一致(变化范围在±2.5％之内)；且样品中目标化合物的离子丰度比率(ratio)不超过20％时，则判断该所测质谱信号为该种农药，若上述两个条件不能同时满足，则判断不含该种农药。实施例7edta混合液的制备：称取1.21gedta-na2和3.72gl-半胱氨酸盐置于1000ml烧杯中，加900ml水，用2mol/lnaoh调节ph＝12，转移至1000ml容量瓶中并定容至刻度，得edta混合液；供试品溶液的制备：称取30％春雷·噻森铜悬浮剂试样0.3232g于100ml容量瓶中，加曝气水稀释至刻度，超声5min，取2.0ml于2000ml烧杯中，用曝气水稀释至2000ml刻度，得浓度为808μg/l噻森铜水溶液，即为待测噻森铜水溶液，用上述配制好的edta混合液按体积比1:1稀释，旋涡混合5min，待充分反应后，再超声5min，再用0.45um滤膜过滤，即得衍生化后的噻森铜溶液，待uplc-ms/ms检测；标准品溶液的制备：称取噻森铜标样0.0105g置于100.00ml容量瓶中，用edta混合液溶稀释，旋涡混合5min，待充分反应后，再超声5min，用edta混合液溶稀释至刻度，再用0.45um滤膜过滤，并定容至刻度，得噻森铜浓度为96.60mg/l的标样储备液，吸取适当标样储备液，用edta混合液稀释配制成系列梯度为9.66μg/l、19.32μg/l、48.30μg/l、96.60μg/l、193.20μg/l、483.00μg/l的标准工作溶液，待uplc-ms/ms测定；测定和结果计算：设定仪器参数，待仪器稳定后将对照品溶液和供试品溶液进行进行uplc-ms/m测定，记录色谱峰面积；以噻森铜衍生物浓度为横坐标，噻森铜衍生物峰面积为纵坐标绘制标准曲线，将供试品中测得噻森铜衍生物峰面积代入标准曲线，得到供试品溶液中噻森铜衍生物的含量，以噻森铜衍生物含量作为噻森铜含量进行计算。其中hplc操作条件为：进样体积：3.0μl；流速：0.5ml/min；柱温：40℃；流动相：乙腈+0.1％甲酸水；时间(分钟)流动相a(％)流动相b(％)0～2.5min82％～90％18％～10％2.5～3.1min90％～82％10％～18％3.1～7.0min82％18％洗脱程序为：流动相a：乙腈,流动相b：0.1％甲酸水msd操作条件为：监测模式：mrm；检测模式：负离子模式；离子源参数：干燥气：n2；干燥气温度：350℃；干燥气流速：7l/min；鞘气：n2；鞘气温度：100℃；鞘气流速：9l/min；雾化器压力：55psi；喷嘴电压：500v；毛细管电压：4500v，emv增益(-)：500v。mrm离子采集参数为：*：为定量离子定性鉴定：对于农药的母离子和子离子对，若其离子色谱保留时间与标样品工作溶液一致(变化范围在±2.5％之内)；且样品中目标化合物的离子丰度比率(ratio)不超过20％时，则判断该所测质谱信号为该种农药，若上述两个条件不能同时满足，则判断不含该种农药。实验例：为证明本发明的科学性与合理性，进行了以下方法学实验研究：方法一:方法来源：采取对比文件中的方法即：噻森铜残留分析方法，采用硫代硫酸钠水解，该方法采用lc法进行检测，结合我单位环境研究实验室的实际情况而制定了本方法。仪器：高效液相色谱仪(agilent1260)，具有定性分析、定量分析工作站。色谱柱：c18，内径150mm×2.1mm，3.5μm；试剂：甲醇：色谱纯，默克股份有限公司，(reag.pheur，lot：i0930107803)；乙腈：美国天地4l装原装进口色谱级试剂；甲酸：已知质量分数：95～98％，沪试；二甲基甲酰胺(dmf)：天津市富宇精细化工有限公司噻森铜标样：已知质量分数，ω＝92.0％，浙江东方化工有限公司提供；30％春雷·噻森铜悬浮剂试样:(其中噻森铜质量分子数为25％；春雷霉素质量分数为5％),浙江东风化工有限公司。超纯水：电阻率，18.2mω*cm；色谱与质谱条件：色谱条件：待仪器状态稳定后，用步骤(1)中的系列浓度标准工作液进样，lc检测，其中：液相条件：色谱柱：c18(250mm*4.6mm*5um)柱温：40℃；流动相：乙腈-0.01％乙酸水酸溶液(体积比为30：70)；流速：0.7ml/min；进样量：10μl；检测波长：313nm检测器：dad(1)标准溶液的配制：称取噻森铜标准品适量于100ml容量瓶中，用dmf溶解并定容至刻度，配制成浓度为100mg/l的标准储备液。将标准储备液逐级稀释，配制成浓度为0mg/l、0.1mg/l、0.5mg/l、1.0mg/l、2.0mg/l、5mg/l、10mg/l、标准工作液；(2)提取：称取0.32g30％春雷·噻森铜悬浮剂于100m塞三角瓶中，加入1mol/l硫代硫酸钠2ml，50℃恒温震荡2小时，震荡完毕后，再用2mol/l盐酸调ph至3，转入250ml分液漏斗中，用50ml乙酸乙酯萃取2次(剧烈振摇1分钟)，静置分层后将乙酸乙酯层过无水硫酸钠脱水虑与圆底烧瓶中(加入3低一缩二乙二醇)，在旋转蒸发上蒸发干，用甲醇定容；(3)仪器检测：待仪器状态稳定后，用步骤(1)中的系列浓度标准工作液进样，lc检测，记录色谱峰面积。(4)标准曲线的建立：采用峰面积定量，以进样浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线；结论：用此方法测水中噻森铜的含量，结果数据如下：所得标准曲线的回归方程为：y＝48.1324x+0.431，相关系数r2＝1。检出限(以信噪比s/n≥10计)为0.019mg/l，与本发明实验结果相比，响应值低，检出限高，供试品处理过程繁琐，不再进行此方法的研究。方法二方法来源：采取对比文件中的方法即：cn103592404b-一种检测果蔬中有机铜农药残留量的方法，该方法采用lc-ms/ms法检测果蔬中有机铜农药残留量，结合我单位环境研究实验室的实际情况而制定了本方法。仪器：超高压高效液相色谱-质谱联用仪(agilent1290-6470a)，具有ajsesi离子源，masshunter数据采集、定性分析、定量分析工作站。色谱柱：c18，内径150mm×2.1mm，3.5μm；试剂：甲醇：色谱纯，默克股份有限公司，(reag.pheur，lot：i0930107803)；乙腈：美国天地4l装原装进口色谱级试剂；甲酸：已知质量分数：95～98％，沪试；噻森铜标样：已知质量分数，ω＝92.0％，浙江东方化工有限公司提供；30％春雷·噻森铜悬浮剂试样:(其中噻森铜质量分子数为25％；春雷霉素质量分数为5％),浙江东风化工有限公司。超纯水：电阻率，18.2mω*cm；(1)供试品溶液制备：称取0.32g30％春雷·噻森铜悬浮剂于离心管中，加入1gna2s，于涡旋振荡仪上充分涡旋震荡2min，然后加入15ml甲醇，涡旋振荡2min，超声波提取1h(超声期间，每20min晃动一次)，离心机上4000rpm离心10min。加入5ml甲醇重复提取一次。合并两次提取上清液，于25ml容量瓶中定容，混匀。取1ml提取液于2ml离心管中，加入50mgpsa和50mgc18吸附剂，于13000rpm超高速离心机上离心10min。取上清液，过0.45μm滤膜，待测。(2)uplc-ms/ms检测uplc检测条件为：柱温：25℃；流动相：a相为乙腈，b相为0.1％甲酸水溶液。梯度洗脱条件为:0～2min，保持40％a；2～4.5min，80％～20％a；4.5～10min，保持80％a；10～12min，80％～40％a；12～15min，保持40％a；流速：0.20ml/min；进样量：10μl；ms/ms条件为：离子源：电喷雾离子源esi；扫描方式：负离子源；喷雾电压：2800v；毛细管温度：350℃；鞘气压力：45arb；辅助气压力：15arb；(3)标准曲线的建立称取噻森铜标准品适量于100ml容量瓶中，用甲醇溶解定容，制成100mg/l储备液。将噻森铜标准储备液逐级稀释，配制成0.001mg/l、0.005mg/l、0.01mg/l、0.05mg/l、0.1mg/l、0.5mg/l、1.0mg/l的标准工作液。以进样浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。该方法用的供试品处理的过程适用于检测蔬果固体对象，对于自然环境下水中的残留噻森铜检操作繁杂，且采用直接加入固体试剂破络效果差，响应值低，不再进行此方法的研究。方法三以下是本发明的方法学实验研究：edta混合液的制备：称取1.21gedta-na2和3.72gl-半胱氨酸盐置于1000ml烧杯中，加900ml水，用2mol/lnaoh调节ph＝12，转移至1000ml容量瓶中并定容至刻度，得edta混合液；供试品溶液的制备：称取30％春雷·噻森铜悬浮剂试样(其中噻森铜质量分子数为25％；春雷霉素质量分数为5％)0.3232g于100ml容量瓶中，加曝气水稀释至刻度，超声5min，取2.0ml于2000ml烧杯中，用曝气水稀释至2000ml刻度，得浓度为808μg/l噻森铜水溶液，即为待测噻森铜水溶液，用上述配制好的edta混合液按体积比1:1稀释，旋涡混合5min，待充分反应后，再超声5min，再用0.45um滤膜过滤，即得衍生化后的噻森铜溶液，待uplc-ms/ms检测；标准品溶液的制备：称取噻森铜标样(ω＝92％)0.0105g置于100.00ml容量瓶中，用edta混合液溶稀释，旋涡混合5min，待充分反应后，再超声5min，用edta混合液溶稀释至刻度，再用0.45um滤膜过滤，并定容至刻度，得噻森铜浓度为96.60mg/l的标样储备液，吸取适当标样储备液，用edta混合液稀释配制成系列梯度为9.66μg/l、19.32μg/l、48.30μg/l、96.60μg/l、193.20μg/l、483.00μg/l的标准工作溶液，待uplc-ms/ms测定；测定和结果计算：设定仪器参数，待仪器稳定后将对照品溶液和供试品溶液进行进行uplc-ms/m测定，记录色谱峰面积；以噻森铜衍生物浓度为横坐标，噻森铜衍生物峰面积为纵坐标绘制标准曲线，将供试品中测得噻森铜衍生物峰面积代入标准曲线，得到供试品溶液中噻森铜衍生物的含量，以噻森铜衍生物含量作为噻森铜含量进行计算。其中hplc操作条件为：进样体积：3.0μl；流速：0.5ml/min；柱温：40℃；流动相：乙腈+0.1％甲酸水；洗脱程序为：流动相a：乙腈,流动相b：0.1％甲酸水时间(分钟)流动相a(％)流动相b(％)0～2.5min82％～90％18％～10％2.5～3.1min90％～82％10％～18％3.1～7.0min82％18％msd操作条件为：监测模式：mrm；检测模式：负离子模式；离子源参数：干燥气：n2；干燥气温度：350℃；干燥气流速：7l/min；鞘气：n2；鞘气温度：100℃；鞘气流速：9l/min；雾化器压力：55psi；喷嘴电压：500v；毛细管电压：4500v，emv增益(-)：500v。mrm离子采集参数为：*：为定量离子定性鉴定：对于农药的母离子和子离子对，若其离子色谱保留时间与标样品工作溶液一致(变化范围在±2.5％之内)；且样品中目标化合物的离子丰度比率(ratio)不超过20％时，则判断该所测质谱信号为该种农药，若上述两个条件不能同时满足，则判断不含该种农药。1.方法考察试验1.1.线性试验精密吸取噻森铜对照品溶液9.66μg/l、19.32μg/l、48.30μg/l、96.60μg/l、193.20μg/l、483.00μg/l以标准工作液的色谱峰面积对其相应浓度进行回归分析，得到线性方程为y＝12.67x-1.45，r2＝0.9997结果见表1和图2所示。表明噻森铜进样浓度在9.66μg/l～483.00μg/l范围内呈良好的线性关系。结果见表2。表1噻森铜线性试验结果1.1.2仪器精密度试验取以上按对照品溶液的制备方法制备的48.30μg/l对照品溶液，在上述色谱条件下，重复进样6次，计算相对标准偏差验证方法的精密度，计算rsd％(噻森铜)值为1.14％，表明仪器精密度好，测定结果见表2。表2仪器精密度试验结果1.1.3加标回收率：取曝气水配制的5ml噻森铜试样溶液(edta混合液1：1比例处理后实测浓度为89.70μg/l)，加入曝气水配制的5ml噻森铜标液(edta混合液1：1比例处理后实测浓度为106.72μg/l)，混合噻森铜试样溶液和噻森铜标液后，用edta混合液1：1比例处理，摇匀，平行5次。按上述仪器操作条件进行测试，以实测值按公式(1)计算加标回收率，平均回收率(％)为：86.89％，结果见表3加标回收率(％)＝(检出量/加标量)×100％………式(1)表3噻森铜曝气水中回收率试验结果3.2.5稳定性试验用曝气水配制供试物溶液，用于稳定性试验，室温放置，按拟定色谱条件下于0，24h，48h分别进样，测定峰面积，计算噻森铜浓度，结果表明噻森铜在24h内任然能维持在0h噻森铜浓度的80％以上，表明噻森铜在24h内稳定，稳定性试验结果见表4。表4稳定性试验结果1.1.4检出限和定量限取按以上对照品溶液的制备方法制备的对照品溶液，用edta混合液稀释成浓度为0.97μg/l标准使用液，重复测定6次，根据s/n值计算出lod和loq值，试验结果表明，所建立的方法对噻森铜的lod为0.427μg/l，loq为1.422μg/l。详细结果见表5。表5分析方法检出限和定量限试验结果1.2方法一、方法二、方法三实验结果总结性比较。1.2.1标准曲线回归方程的比较结论：使用对比文件的方法即方法一在较高浓度范围0.01mg/l～10mg/l，得出线性方程y＝48.1324x+0.431，相关系数r2＝1，方法二在浓度0.001mg/l～1.0mg/l范围，得出线性方程y＝3.465×102x+16.29×104，相关系数r2＝0.9987，方法三是本发明的优选方法，在较低浓度范围9.66ug/l～483.00ug/l，得出线性方程y＝12.67x-1.45，相关系数r2＝0.9997，方法三为最优选方法。1.2.2检出限与定量限比较结论：方法一和方法二为对比实验，得出方法一检出限为0.019mg/l，定量限0.310mg/l，方法二检出限为0.037mg/l，定量限0.1430mg/l，均高于本发明优选方法方法三的检出限0.427μg/l，定量限1.422μg/l。总结：本发明在噻森铜较低浓度范围9.66ug/l～483.00ug/l内呈良好的线性关系，而使用对比文件的方法浓度范围较高，具体为0.01mg/l～10mg/l；本发明的检出限能够达到0.427μg/l，定量限达到1.422μg/l，而使用对比文件的方法检出限为0.037mg/l，定量限为0.143mg/l，均优于对比文件；本发明供试品制备过程操作简单，供试品溶液在24h内相对稳定，仪器精密度高，对照品重复性良好，rsd％值1.14％,本发明可有效地检测水中低含量的噻森铜。虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作出一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。当前第1页12