一种检测莲子心生物碱含量的高效液相检测方法与流程

本发明涉及莲子心含量测定
技术领域：
，特别是涉及一种检测莲子心生物碱含量的高效液相检测方法。
背景技术：
：莲子心是《中国药典》收录的草药，药用来源为睡莲科植物莲的成熟种子中间的绿色胚根(莲心)，取出，晒干。莲子心其味清苦，但却具有极好的降压去脂之效。异名薏(《尔雅》)，苦薏(《本草图经》)，莲薏(《纲目》)，莲心(《本草再新》)。为睡莲科植物莲的成熟种子的绿色胚芽。主产湖南、湖北、江西、福建、江苏、浙江等地。性味苦，寒。清心，去热，止血，涩精。治心烦，口渴，吐血，遗精，平和五脏之气。莲子心为成熟莲子种仁内的绿色胚芽，民间常用以泡茶饮，有清心火，止遗精的作用，对心肾不交、阴虚火旺的失眠患者，食之最宜。从临床应用上看，莲子心适用于轻度失眠人群，如不见效，可适当使用安定控制，但长期服用安定对身体有较大伤害。另外，失眠患者应该培养起较好的生活习惯，如晚饭后多散步，平常多运动等等，这些对于睡眠的恢复均有很好的帮助。莲子心主要含有生物碱、黄酮和多糖等多种活性成分。莲子心生物碱成分主要为莲心碱、异莲心碱、甲基莲心碱和莲心季铵碱等、具有降血压、抗心律失常、抗血小板聚集、抗癌等药理作用。因此，建立准确检测莲子心生物碱含量的方法具有非常重要的意义。技术实现要素：鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种检测莲子心生物碱含量的高效液相检测方法，用于解决现有技术中莲子心生物碱含量测定不准确的问题，提供的检测莲子心生物碱含量的高效液相检测方法具有专属性、线性范围、准确度、稳定性和重复性良好的优点，可以用于定量分析，同时耐用性良好。为实现上述目的及其他相关目的，本发明的第一方面，提供一种检测莲子心生物碱含量的高效液相检测方法包括如下步骤：步骤一、将莲心碱对照品、异莲心碱对照品和甲基莲心碱对照品分别适量配成一系列浓度的莲心碱对照品溶液、异莲心碱对照品溶液和甲基莲心碱对照品溶液，在色谱柱为extend-c18色谱柱、流动相a为水和三乙胺的体积比为1000：(0.9～1.1)的混合溶液、流动相b为为乙腈和甲醇的体积比为1：(0.99～1.01)的混合溶液、流速为1ml/min、检测波长为282nm、柱温为28～32℃、进样量为20μl的色谱条件下，分别量取不同浓度的莲心碱对照品溶液、异莲心碱对照品溶液和甲基莲心碱对照品溶液进行高效液相检测，当s/n≈3时为检测限，当s/n≈10时作为定量限；步骤二、将莲子心醇提物配制成一系列浓度的莲子心生物碱供试样品溶液，在色谱柱为extend-c18色谱柱、流动相a为水和三乙胺的体积比为1000：(0.9～1.1)的混合溶液、流动相b为为乙腈和甲醇的体积比为1：(0.99～1.01)的混合溶液、流速为1ml/min、检测波长为282nm、柱温为28～32℃、进样量为20μl的色谱条件下进行高效液相检测，通过峰面积计算出试样品溶液中莲子心生物碱含量。于本发明的一实施例中，步骤一和步骤二中流动相a和流动相b在洗脱过程中的体积配比具体如表2所示：时间/min流动相a/％流动相b/％0901058020205050252080352080表2流动相a和流动相b的体积配比。于本发明的一实施例中，所述步骤一和步骤二中流动相a为水和三乙胺的体积比为1000：1的混合溶液、流动相b为为乙腈和甲醇的体积比为1：1的混合溶液。于本发明的一实施例中，所述步骤一和步骤二中所述色谱柱的柱温30℃，色谱柱长度为250mm，色谱柱内径为4.6mm，色谱柱填料颗粒直径为5μm。于本发明的一实施例中，所述步骤二中莲子心醇提物的制备过程为：取莲子心试样粉碎后过20目筛，取499～501mg的莲子心粉末置于25ml容量瓶中，加入质量分数为70～100％的甲醇后超声25～35min，冷却至室温后静置至少30min，再用质量分数为70～100％的甲醇定容至25ml，再经过0.45微米的微孔滤膜过滤，取续滤液即为莲子心醇提物。于本发明的一实施例中，所述步骤二中莲子心醇提物的制备过程为：取莲子心试样粉碎后过20目筛，取500mg的莲子心粉末置于25ml容量瓶中，加入甲醇后超声30min，冷却至室温后静置30min，再用甲醇定容至25ml，再经过0.45微米的微孔滤膜过滤，取续滤液即为莲子心醇提物。于本发明的一实施例中，所述步骤二中莲子心醇提物的制备过程为：取莲子心100重量份，用4～6倍于莲子心质量的50～95％乙醇回流提取2～3次，每次1～2h，过滤，合并滤液，减压浓缩到莲子心质量的1.5～2.5倍即得醇提液，将100重量份的732型阳离子交换树脂装入内径为60mm的玻璃柱内，加入醇提液，732型阳离子交换树脂充分吸附2～3h后，用10～15bv的蒸馏水以4～6bv/h的流速洗去水溶性杂质，再用10～15bv的95％乙醇以2～3bv/h的流速洗脱，再用10～15bv的含氨水5％的95％乙醇以2～3bv/h的流速洗脱，收集洗脱液，浓缩干燥后即得莲子心醇提物。于本发明的一实施例中，所述步骤二中莲子心醇提物的制备过程为：取莲子心100重量份，用6倍于莲子心质量的95％乙醇回流提取3次，每次1h，过滤，合并滤液，减压浓缩到莲子心质量的2.0倍即得醇提液，将100重量份的732型阳离子交换树脂装入内径为60mm的玻璃柱内，加入醇提液，732型阳离子交换树脂充分吸附3h后，用15bv的蒸馏水以6bv/h的流速洗去水溶性杂质，再用15bv的95％乙醇以3bv/h的流速洗脱，再用15bv的含氨水5％的95％乙醇以3bv/h的流速洗脱，收集洗脱液，浓缩干燥后即得莲子心醇提物如上所述，本发明的一种检测莲子心生物碱含量的高效液相检测方法，具有以下有益效果：莲心碱、异莲心碱和甲基莲心碱三个组分在该色谱条件下各峰的分离度均大于1.5，可以有效地分离，专属性良好；莲心碱、异莲心碱和甲基莲心碱的定量限分别为91.3μg，124.7μg和269.3μg，结果良好；莲心碱、异莲心碱和甲基莲心碱的检测限分别为47.1μg，62.3μg和135.2μg，结果良好；三个主要的生物碱成分在各自的样品范围内，(莲心碱(0.0879mg至1.465mg)、异莲心碱(0.0997mg至1.6623mg)和甲基莲心碱(0.2127mg至3.5446mg))，峰面积和含量之间的线性关系良好，各物质相关系数r2均大于0.998；通过6次平行操作结果，各样品中三个组分的含量rsd为0.23％,0.50％和0.10％，均小于2％，重复性良好；三个组分的对照品混合溶液室温放置12小时，其峰面积和含量没有明显变化，溶液稳定性良好；莲心碱、异莲心碱和甲基莲心碱加样回收率均在80.0％～120.0％范围内且各浓度水平间回收率的rsd值均小于5％，本高效液相测定方法准确度良好；通过换用不同色谱柱，变更柱温，发现测定结果rsd小于2％，耐用性良好。附图说明图1为全波长扫描图；图2为甲醇/0.1％三乙胺作为洗脱剂的色谱图；图3为乙腈/0.1％三乙胺作为洗脱剂的色谱图；图4为典型色谱图；图5为阴性样品溶液hplc图；图6为供试品溶液hplc图；图7为对照品溶液hplc图；图8为莲心碱、异莲心碱和甲基莲心碱定量限(loq)色谱图；图9为莲心碱、异莲心碱和甲基莲心碱检测限(lod)色谱图；图10为莲心碱线性关系图；图11为异莲心碱线性关系图；图12为甲基莲心碱线性关系图；图13为二十四批样品测定结果对比图。具体实施方式以下由特定的具体实施例说明本发明的实施方式，熟悉此技术的人士可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点及功效。针对莲子心中主要的三个活性生物碱，莲心碱、异莲心碱和甲基莲心碱，本文探索和优化了相应的测定其含量的方法，并分别对该方法的专属性、线性范围、准确度、重复性、中间精密度、定量限、检测限、溶液稳定性、方法耐用性和系统适用性等部分进行考察验证。1.莲子心生物碱含量的hplc检测1.1仪器与试剂1.1.1仪器高效液相色谱仪：agilent1100色谱柱：安捷伦extend-c18(4.6×250mm,5μm)分析天平：十万分之一天平mettler-toledoax205超声仪昆山市超声仪器kq3200e粉碎机灵丹ld-750a1.1.2试剂试剂及药品名称级别生产厂商水蒸馏水watsons乙腈hplc级adamas-beta三乙胺分析级国药甲醇hplc级lichrosolv莲心碱-自制异莲心碱-自制甲基莲心碱-自制表3实验过程中采用的试剂以上莲心碱、异莲心碱和甲基莲心碱样品经过含量标定，含量均在99.5％以上，可作为二级对照品使用。1.2莲子心生物碱hplc优化实验1.2.1检测波长的选择取莲心碱、异莲心碱和甲基莲心碱三个生物碱，在波长范围200～400nm内扫描，全波长扫面图如图1所示，发现三个组分的全波长扫描比较类似，均在215nm、282nm处有最大吸收，为了降低末端吸收带来的干扰，故选择282nm作为检测波长。3.3.2流动相采用甲醇或者乙腈与水做流动相直接进样时，发现莲子心的化学成分出峰的峰形拖尾，因为其主要成分为生物碱，加入0.1％三乙胺作为扫尾剂，加入三乙胺可以使峰形改善，抑制拖尾。采用甲醇/0.1％三乙胺作为洗脱剂时，出峰仍有拖尾，而采用乙腈/0.1％三乙胺作为洗脱剂时出峰会有前沿。甲醇/0.1％三乙胺作为洗脱剂如图2所示，乙腈/0.1％三乙胺作为洗脱剂如图3所示。因此结合两者，采用甲醇/乙腈/0.1％三乙胺作为洗脱剂可以很好的防止峰形异常。采用10％-50％的梯度时，目前保留时间为5-20分钟的组分能部分分离开，而保留时间为25-30分钟的组分出峰很慢；采用10％-60％的梯度时，比以上梯度保留时间为25-30分钟的组分出峰改观不明显；采用10％-80％的梯度时，比以上梯度保留时间为25-30分钟的组分出峰比较完全；因此，前期的梯度设置为10-50％可以使得保留时间为5-20分钟的组分得到比较好的分离，而后期梯度要设置为80％，使保留时间为25-30分钟的组分很快的分离开。3.3.3色谱条件色谱柱：安捷伦extend-c18(4.6×250mm,5μm)；流动相：水-三乙胺(1000：1)/乙腈-甲醇(1：1)；流速1ml/min；检测波长：282nm；柱温30℃，在此色谱条件下，莲心碱、异莲心碱、甲基莲心碱三个成分的理论塔板数均大于5000。可知在该色谱条件下，测定效果良好。三个成分的分离度均大于1.5，本项测定和计算结果，分离度符合要求。表4典型色谱图的色谱条件在此色谱条件下得到的典型色谱图如图4所示，在此色谱条件下，莲心碱、异莲心碱、甲基莲心碱三个成分的理论塔板数分别为307510,283372和189676，分离度为-/10.91/7.79，均大于1.5。1.3莲子心生物碱提取方法根据文献报道，三个生物碱化学结构不是很稳定，容易发生氧化反应，加热回流提取的过程中结构会遭到破坏，提取效率低于超声提取，因此实验决定以超声提取为首选，但是超声提取并非唯一选择，还可以采用阳离子树脂分离纯化提取。阳离子树脂分离纯化提取具体如下：取莲子心100重量份，用4～6倍于莲子心质量的50～95％乙醇回流提取2～3次，每次1～2h，过滤，合并滤液，减压浓缩到莲子心质量的1.5～2.5倍即得醇提液，将100重量份的732型阳离子交换树脂装入内径为60mm的玻璃柱内，加入醇提液，732型阳离子交换树脂充分吸附2～3h后，用10～15bv的蒸馏水以4～6bv/h的流速洗去水溶性杂质，再用10～15bv的95％乙醇以2～3bv/h的流速洗脱，再用10～15bv的含氨水5％的95％乙醇以2～3bv/h的流速洗脱，收集洗脱液，浓缩干燥后即得莲子心醇提物。1.3.1提取溶剂的选择同一批次莲子心200g，粉碎，过20目筛。取粉末500mg置于25ml容量瓶中，分别加入甲醇，70％的甲醇水溶液，50％的甲醇水溶液，30％的甲醇水溶液和10％的甲醇水溶液。超声30min，室温下静置30min后定容到25ml。经0.45微米微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。表5提取溶剂考察结果结果：经对比发现,在同样的色谱条件下，纯甲醇作为提取溶剂，比与水的混合溶液的提取结果上，莲子心中的三个主要的峰的色谱峰面积更大，因此从提取效果上判断，选用甲醇作为提取溶剂较为合适。1.3.2提取时间的考察取同一批次莲子心粉末500mg于25ml容量瓶中，加入甲醇溶液，分别置于超声仪中5min，15min，35min，45min和60min。室温静置30min后定容到25ml。经0.45微米微孔滤膜滤过，取续滤液为供试品溶液。表6提取时间考察结果实验发现，当超声时间为30min时，莲心碱的色谱峰面积达到最大，当时间继续延长时，其峰面积反而有一定的减小。异莲心碱和甲基莲心碱在超声时间延长后提取到的也略有下降，因此超声处理时间选用30min能够最大程度保留三个有效成分。结果：对比可以发现，对粉碎后的莲子心样品，以甲醇作为提取溶剂，超声时间为30min提取的最为完全，三个组分的含量最大。当时间延长时，效果反而下降。因此选用30min作为提取时间较为合适。1.3.3供试品溶液配制方法为了使莲子心的三个有效成分最大程度提取出来，实验选取的提取条件为甲醇做提取溶剂，超声30min。取莲子心200g，快速粉碎，过20目筛。取粉末500mg置于25ml容量瓶中，分别加入甲醇，超声30min，放置于室温下，静置30min后定容到25ml。经0.45微米微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。1.4莲子心生物碱分析方法学验证1.4.1色谱条件表7分析方法学验证的色谱条件1.4.2专属性精密称取对照品莲心碱17.31mg，异莲心碱25.28mg，甲基莲心碱27.56mg分别置于不同的25ml容量瓶中，加甲醇超声溶解，并定容至刻度。再用移液管分别吸取莲心碱溶液1ml，异莲心碱1ml，甲基莲心碱2ml至10ml容量瓶中，混匀，定容至刻度。作为三种对照品的混合溶液。阴性样品溶液hplc图如图5所示，供试品溶液hplc图如图6所示，对照品溶液hplc图如图7所示，莲子心生物碱保留时间如表8所示。保留时间(min)分离度理论塔板数莲心碱26.785--307510异莲心碱29.02810.91283372甲基莲心碱30.9797.79189676表8莲子心生物碱保留时间结果：在该色谱条件下，溶剂空白无干扰，其他杂质出峰与三个待测组分峰分离度远大于1.5，方法专属性良好。1.4.3检测限和定量限取莲心碱、异莲心碱和甲基莲心碱对照品适量配成一系列浓度的溶液，分别量取溶液，进样20μl进样分析，当s/n≈3时为检测限(lod)；取莲心碱、异莲心碱和甲基莲心碱对照品适量配成一系列浓度的溶液，分别量取溶液，进样20μl进样分析，当s/n≈10时作为定量限(loq)；lod(μg)loq(μg)莲心碱47.191.3异莲心碱62.3124.7甲基莲心碱135.2269.3表9莲心碱、异莲心碱和甲基莲心碱定量限(loq)、检测限(lod)结果图8为莲心碱、异莲心碱和甲基莲心碱定量限(loq)谱图；图9为莲心碱、异莲心碱和甲基莲心碱检测限(lod)谱图。以上结果表明，检测限、定量限远低于供试品浓度，结果良好。1.4.4线性范围考察精密量取对照品的混合溶液5ml置于10ml量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀，采用逐级稀释法得到一系列待测溶液。取上述不同浓度的供试品溶液各20μl注入色谱仪，在282nm波长下，每个浓度进样1次，以各组分进样量(μg)作为横坐标，三个组分在该相同色谱条件下所得到的色谱峰面积为纵坐标，分别进行线性回归，并计算各自的相关系数。结果如下：莲心碱进样量(mg)0.08790.17580.36630.73271.4654峰面积65.4130.1271.6545.21078.2异莲心碱进样量(mg)0.09970.19950.41560.83111.6623峰面积85.5174.1365.5734.01470.4甲基莲心碱进样量(mg)0.21270.42540.88621.77233.5446峰面积182.1365.4764.71531.33061.4表10线性关系实验结果图10为莲心碱线性关系图，莲心碱回归方程：y＝735.74x+1.9491，相关系数：r2＝1.0000；图11为异莲心碱线性关系图，回归方程：y＝886.27x-2.7646，相关系数：r2＝1.0000；图12为甲基莲心碱线性关系图，回归方程：y＝864.27x-1.5460，相关系数：r2＝1.0000。结果：在上述范围内，莲心碱(0.0879mg至1.4654mg)、异莲心碱(0.0997mg至1.6623mg)和甲基莲心碱(0.2127mg至3.5446mg)的色谱含量与进样量具有良好的线性关系。1.4.5准确度对照品溶液配制：精密称取对照品莲心碱29.05mg，异莲心碱21.15mg，甲基莲心碱52.10mg分别置于不同的5ml容量瓶中，加甲醇超声溶解，并定容至刻度。再用移液管分别吸取莲心碱溶液1ml，异莲心碱1ml，甲基莲心碱2ml至10ml容量瓶中，混匀，定容至刻度。作为三种对照品的混合溶液。采用标准添加法测定回收率。精密称取莲子心样品约250mg，共6份，分别置25ml具塞锥形瓶中，每份分别加入1ml按照以上方法配制的对照品溶液，精密称定，按照供试品的制备方法，制备供试品溶液，在含量测定色谱条件下，进样20μl，记录峰面积，用外标法计算回收率，结果见表11、表12和表13。回收率％＝(c-a)/b*100％其中a为供试品中含有的目标物质的含量，b为加入的对照品的量，c为实测值；表11莲心碱加样回收率测定结果表12异莲心碱加样回收率测定结果表13甲基莲心碱加样回收率测定结果结果：从三个组分的平均回收率以及其rsd来看，rsd<3％，表明准确度良好。1.4.6重复性试验取莲子心200g，快速粉碎，过20目筛。取粉末500mg置于25ml容量瓶中，分别加入甲醇，超声30min，放置于室温下，静置30min后定容到25ml。经0.45微米微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。平行配制6份，分别精密量取20μl进样分析，记录峰面积，计算含量。分别计算三个生物碱成分含量求得rsd。结果见表14。表14重复性实验结果1.4.7稳定性试验取莲子心对照品溶液，按正文中含量测定项下的方法制备样品溶液,分别测定在0、2、4、6、8、12小时内的峰面积，结果见表15。进样时间(h)0246812rsd％莲心碱峰面积1074.01073.51075.91079.21083.61080.10.37异莲心碱峰面积1470.31470.21473.31473.61475.71469.80.16甲基莲心碱峰面积3055.33054.63062.23068.23077.73071.40.30表15稳定性实验结果结果：莲心碱、异莲心碱、甲基莲心碱三组分在室温，甲醇溶液中静置0、2、4、6、8、12小时后，其色谱峰面积变化非常小，且没有减小的趋势。三个组分rsd<2％，表明在0-12小时内样品是稳定的。1.4.8耐用性(1)不同色谱柱比较表16不同色谱柱测试结果(2)不同柱温比较表17不同柱温下测试结果结果：在不同的色谱柱，以及同一色谱柱柱温上述范围内波动时，该分析方法也能用于测定莲子心样品中的莲心碱、异莲心碱和甲基莲心碱的含量。1.4.9分析方法验证总结通过对莲子心中三个主要的生物碱成分，莲心碱、异莲心碱和甲基莲心碱建立和优化了hplc方法，使得三个组分能比较好的分离开来，同时该方法可以使其他含量较少的组分出峰尽量的减少重叠。对后续研究有借鉴意义。通过方法学验证，检测莲子心生物碱含量的高效液相检测方法具有专属性、线性范围、准确度、稳定性和重复性良好的优点，可以用于定量分析，同时耐用性良好。经过对以上项目的方法学验证，结果如表18所示：表18方法验证结果2.莲子心主要活性碱成分的实地考察2.1实验材料购自莲子产区的莲子心样品。分别选自江苏宿迁、江西广昌、湖南湘潭、安徽黄山、湖南岳阳、广西贵港、浙江丽水、浙江杭州、山东济南、山东济宁、浙江武义、浙江江山、湖北洪湖、福建建阳、山东微山湖、河南南阳、湖北金典、湖南祁东、江苏洪泽湖、江西石城、浙江龙游、重庆石祝、福建建宁、安徽芜湖24产地，所有材料均为没有经过加工炮制的粗品莲子心。2.2实验方法取同一批次莲子心200g，快速粉碎，过20目筛。取粉末500mg置于25ml容量瓶中，分别加入甲醇，超声30min，室温静置30min后定容到25ml。经0.45微米微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。以上述验证的色谱方法，对以上供试品溶液分别进样20μl，以外标法测定其峰面积，并计算其中三个组分各自的含量。2.3实验结果与结论分别测试了购自：江苏宿迁、江西广昌、湖南湘潭、安徽黄山、湖南岳阳、广西贵港、浙江丽水、浙江杭州、山东济南、山东济宁、浙江武义、浙江江山、湖北洪湖、福建建阳、山东微山湖、河南南阳、湖北金典、湖南祁东、江苏洪泽湖、江西石城、浙江龙游、重庆石祝、福建建宁、安徽芜湖共24产地的莲子心。测试结果见表19和图13。编号产地莲心碱(mg)异莲心碱(mg)甲基莲心碱(mg)总生物碱(mg)1江苏宿迁0.3951.3194.6686.3822江西广昌1.0011.4764.4576.9343湖南湘潭0.4461.4333.9565.8354安徽黄山0.4251.1273.9855.5375湖南岳阳0.5271.3904.6056.5226广西贵港0.3601.1173.5765.0537浙江丽水0.4411.4484.5126.4018浙江杭州0.5800.8613.2914.7329山东济南0.3991.2414.1945.83410山东济宁0.6141.3974.3136.32411浙江武义1.2711.2274.5927.0912浙江江山0.3121.6383.3515.30113湖北洪湖0.7711.4274.1736.37114福建建阳0.3762.0533.4505.87915山东微山湖0.5730.9973.8115.38116河南南阳0.3971.2574.0385.69217湖北金典1.1611.5566.3729.08918湖南祁东0.7821.1376.6398.55819江苏洪泽湖0.2551.4955.9627.71220江西石城0.7731.7554.8447.37221浙江龙游0.3712.7532.6865.8122重庆石祝0.5101.2624.2396.01123安徽芜湖0.3941.5804.0866.0624福建建宁1.0710.7203.6035.394表19二十四批样品测定结果其中含量均为500mg莲子心粉末对应的生物碱含量(以毫克计算)，总生物碱按照三个生物碱含量之和来计算。由测定结果可以看出，来自24产地的莲心碱含量平均值为0.592mg/500mg，异莲心碱为1.403mg/500mg，甲基莲心碱为4.308mg/500mg，三者之和的总生物碱为6.303mg/500mg。从三个生物碱的化学结构来看，莲心碱、异莲心碱和甲基莲心碱的结构比较类似，其主要的药理作用也具有相似的地方。因此选取三者总计的总生物碱更加具有合理性。来着湖北金典的莲子心的样本中甲基莲心碱和三个生物碱之和是比较高的。通过hplc定量的方法测定不同产地的莲子心的样品中主要生物碱的含量，可以发现不同产地的莲子心中三个活性成分的差异还是非常大的。由数据可以得出，甲基莲心碱的含量较另外两个生物碱要多许多，能够达到其数倍之多，应该与其结构相对比较稳定有关。综上所述，本发明提供的检测莲子心生物碱含量的高效液相检测方法具有专属性、线性范围、准确度、稳定性和重复性良好的优点，可以用于定量分析，同时耐用性良好。所以，本发明有效克服了现有技术中的种种缺点而具高度产业利用价值。上述实施例仅例示性说明本发明的原理及其功效，而非用于限制本发明。任何熟悉此技术的人士皆可在不违背本发明的精神及范畴下，对上述实施例进行修饰或改变。因此，举凡所属
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中具有通常知识者在未脱离本发明所揭示的精神与技术思想下所完成的一切等效修饰或改变，仍应由本发明的权利要求所涵盖。当前第1页12