一种羟丙基倍他环糊精中甲酸甲酯残留检测方法与流程

本发明属于分析化学
技术领域：
，更具体的说是涉及一种羟丙基倍他环糊精中甲酸甲酯残留检测方法。
背景技术：
：环氧丙烷是羟丙基倍他环糊精合成过程中的重要原料，现有技术中制备并精制得到的环氧丙烷纯度一般可以达到99.5％以上，但是粗环氧丙烷中还存在甲酸甲酯、乙醛、丙酮等杂质难以脱除。为除去环氧丙烷中的这些杂质，已有大量专利对此方面进行了研究和报道，如us2550847、us3477919及us4691035披露采用水溶性碱对粗环氧丙烷进行处理以除去其中的甲酸甲酯；us2622060披露采用金属氢氧化物的碱溶液对粗环氧丙烷进行萃取精馏除去甲酸甲酯等。随着羟丙基倍他环糊精工艺的日趋完善，应用范围越来越广，并开始作为注射用药物制剂的辅料，其使用场景会直接进入血液。故对羟丙基倍他环糊精中甲酸甲酯残留进行控制，是关系到用药安全和用药效率的关键所在。目前相关文献中有毛细管气相色谱法测定空气中甲酸甲酯的方法，气相色谱不适用于不挥发物质和对热不稳定物质。因此建立一种精确的羟丙基倍他环糊精中甲酸甲酯残留检测方法，对羟丙基倍他环糊精的安全用药十分必要。技术实现要素：本发明所要解决的技术问题在于针对上述现有技术中的不足，提供一种羟丙基倍他环糊精中甲酸甲酯残留检测方法。本方法具有检测灵敏度高、重现性高、结果可靠的优点，为羟丙基倍他环糊精用作注射级辅料提供了安全保障。为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种羟丙基倍他环糊精中甲酸甲酯残留检测方法，包括以下步骤：（1）配制供试品溶液：取供试品，精密称定，加流动相溶解，定容，配制成供试品溶液；（2）配制对照品溶液：取甲酸甲酯对照品，纯度为99.5%，用流动相稀释，定容，配制不同浓度的对照品溶液；（3）样品测定：在一定色谱条件下将对照品溶液利用高效液相色谱仪进样分析，并同时记录峰面积，采用外标法绘制甲酸甲酯的浓度-峰面积标准曲线，得出标准曲线回归方程；取供试品溶液，高效液相色谱仪进样分析，记录峰面积，根据标准曲线回归方程计算出供试品中甲酸甲酯的含量。进一步的，步骤（1）供试品溶液的浓度为150mg/ml。进一步的，步骤（2）对照品溶液的浓度为0.2μg/ml-10μg/ml。进一步的，步骤（3）所述色谱条件为：色谱柱为ods-3，150mm×4.6mm,5um；柱温：35℃；检测器：紫外检测器，温度40℃；流动相：甲醇-水（15：85）；流速：每分钟0.9-1.0ml；进一步的，每次进样分析的样品体积为20μl。进一步的，该检测方法的检出限为0.1μg/ml，定量限为0.2μg/ml。本发明的有益效果体现在：采用本发明所述的方法，供试品中的甲酸甲酯可以有效准确的检测，并且检测灵敏度很高，甲酸甲酯的最低检测限可达到μg/ml的级别。附图说明图1本发明空白溶剂图谱；图2本发明甲酸甲酯标准曲线。具体实施方式下面结合附图和实施例对本发明作进一步说明：实施例1一种羟丙基倍他环糊精中甲酸甲酯残留的检测方法，包括以下步骤：（1）供试品溶液的配制：取羟丙基倍他环糊精供试品，精密称定，加流动相溶解，定容，配置成供试品溶液，浓度为150mg/ml；（2）对照品溶液的配制：取甲酸甲酯对照品（99.5%），用流动相稀释，定容，配制一系列不同浓度的对照品溶液；对照品溶液浓度为0.2μg/ml-10μg/ml；（3）样品测定：将对照品溶液利用高效液相色谱仪进样分析，并同时记录峰面积，采用外标法绘制甲酸甲酯的浓度-峰面积标准曲线，得出标准曲线回归方程；取供试品溶液，高效液相色谱仪进样分析，记录峰面积，根据标准曲线回归方程计算出供试品中甲酸甲酯的含量，最终测得供试品羟丙基倍他环糊精中甲酸甲酯含量为0.006%。其中，色谱条件为：仪器：岛津lc-20a高效液相色谱仪色谱柱：ods-3色谱柱（岛津）（150mm×4.6mm,5um）；柱温：35℃；检测器：紫外检测器；检测器温度：40℃；流动相：甲醇-水（15：85）；流速：每分钟1.0ml。实施例2：一种羟丙基倍他环糊精中甲酸甲酯残留的检测方法，包括以下步骤：（1）供试品溶液的配制：取羟丙基倍他环糊精供试品（不同于实例1批次），精密称定，加流动相溶解，定容，配置成供试品溶液，浓度为150mg/ml；（2）对照品溶液的配制：取甲酸甲酯对照品（99.5%），用流动相稀释，定容，配制一系列不同浓度的对照品溶液；对照品溶液浓度为0.2μg/ml-10μg/ml；（3）样品测定：将对照品溶液利用高效液相色谱仪进样分析，并同时记录峰面积，采用外标法绘制甲酸甲酯的浓度-峰面积标准曲线，得出标准曲线回归方程；取供试品溶液，高效液相色谱仪进样分析，记录峰面积，根据标准曲线回归方程计算出供试品中甲酸甲酯的含量，最终测得供试品羟丙基倍他环糊精中甲酸甲酯含量为0.005%。其中，色谱条件为：仪器：岛津lc-20a高效液相色谱仪色谱柱：ods-3色谱柱（岛津）（150mm×4.6mm,5um）；柱温：35℃；检测器：紫外检测器；检测器温度：40℃；流动相：甲醇-水（15：85）；流速：每分钟1.0ml。实施例3：一种羟丙基倍他环糊精中甲酸甲酯残留的检测方法，包括以下步骤：（1）供试品溶液的配制：取羟丙基倍他环糊精供试品（不同于实例1与实例2批次），精密称定，加流动相溶解，定容，配置成供试品溶液，浓度为150mg/ml；（2）对照品溶液的配制：取甲酸甲酯对照品，纯度为99.5%，用流动相稀释，定容，配制一系列不同浓度的对照品溶液；对照品溶液浓度为0.2μg/ml-10μg/ml；（3）样品测定：将对照品溶液利用高效液相色谱仪进样分析，并同时记录峰面积，采用外标法绘制甲酸甲酯的浓度-峰面积标准曲线，得出标准曲线回归方程；取供试品溶液，高效液相色谱仪进样分析，记录峰面积，根据标准曲线回归方程计算出供试品中甲酸甲酯的含量，最终测得供试品羟丙基倍他环糊精中甲酸甲酯含量为0.006%。其中，色谱条件为：仪器：岛津lc-20a高效液相色谱仪色谱柱：ods-3色谱柱（岛津）（150mm×4.6mm,5um）；柱温：35℃；检测器：紫外检测器；检测器温度：40℃；流动相：甲醇-水（15：85）；流速：每分钟1.0ml。试验例1、本发明所述检测方法系统专属性检测取空白溶剂，按照实施例1中羟丙基倍他环糊精中甲酸甲酯残留的检测方法检测，试验图谱见图1。空白溶剂在甲酸甲酯出峰位置无检出峰，表明空白溶剂对样品中甲酸甲酯的测定无干扰。2、本发明所述检测方法进样线性和范围试验的检测照实施例1中羟丙基倍他环糊精中甲酸甲酯残留的检测方法。取甲酸甲酯对照品（99.5%），用流动相稀释，定容，配制一系列不同浓度的对照品溶液（2.5μg/ml-40μg/ml）进样测定。以甲酸甲酯标准溶液浓度为纵坐标，峰面积为横坐标，进行线性回归，回归曲线见图2。测定结果见表1。表1甲酸甲酯的线性试验结果浓度(μg/ml)2.55102040峰面积0.59001.20012.45035.067210.1465线性方程为：y=3.9133x+0.2742，r=1。结果表明，甲酸甲酯浓度在0～40μg/ml范围内，浓度与峰面积之间线性关系良好。3、本发明所述检测方法定量限和检出限的检测按照实施例1中羟丙基倍他环糊精中甲酸甲酯残留的检测方法。取甲酸甲酯对照品（99.5%），用流动相稀释，定容，配置浓度0.1μg/ml为对照品溶液，进样20μl，s/n=4.9，取甲酸甲酯对照品（99.5%），用流动相稀释，定容，配制浓度0.2μg/ml为对照品溶液，进样20μl，s/n=10.2。检出限为0.1μg/ml，定量限为0.2μg/ml。4、本发明所述检测方法精密度的检测。按照实施例1中羟丙基倍他环糊精中甲酸甲酯残留的检测方法。取甲酸甲酯对照品（99.5%），用流动相稀释，定容，配制浓度10μg/ml为对照品溶液，（10µg/ml）连续测定6次，结果见下表2。表2精密度试验结果连续6次测定的峰面积rsd为0.28%，表明仪器的精密度良好。5、本发明所述检测方法的重复性检测。按照实施例1中羟丙基倍他环糊精中甲酸甲酯残留的检测方法。取羟丙基倍他环糊精供试品分别精密称取6份，各约15g，置100ml容量瓶中，用流动相溶解稀释至刻度，摇匀进样，分别计算含量，含量结果rsd=1.2%，说明重复性良好。6、本发明所述检测方法的回收率检测。按照实施例1中羟丙基倍他环糊精中甲酸甲酯残留的检测方法。取羟丙基倍他环糊精供试品79.03g，置250ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，作为供试品储备液。取9个50ml容量瓶分为3组，每组3个，分别向每个量瓶中精密加入供试品储备液25ml，三组容量瓶再分别加入甲酸甲酯标准贮备液（500μg/ml）0.8ml、1.0ml、1.2ml，用流动相稀释至刻度，摇匀，制成3组不同浓度的溶液，依法测定，计算甲酸甲酯的回收率，结果见下表3。表3甲酸甲酯的回收率试验结果平均回收率为100.0%，rsd为2.6%，表明回收率良好。7、本发明所述检测方法的溶液稳定性检测按照实施例1中羟丙基倍他环糊精中甲酸甲酯残留的检测方法。取供试品溶液（甲酸甲酯浓度约为10µg/ml），分别于配制后0、3、5、24小时进样，记录峰面积。结果见下表4。表4甲酸甲酯溶液的稳定性试验结果结果表明，供试品水溶液室温放置24小时的稳定性良好。8、本发明所述检测方法的耐用性检测。按照实施例1中羟丙基倍他环糊精中甲酸甲酯残留的检测方法。取甲酸甲酯对照品（99.5%），用流动相稀释，定容，配置浓度10μg/ml为对照品溶液，分别在不同的柱温、不同的流速、以及不同的流动相成分浓度的条件下进行试验，记录色谱图。结果见表5。表5耐用性试验结果结果表明，改变柱温、流速和流动相组分比例后仍能满足系统适用性要求，说明此方法耐用性良好。应当指出的是，具体实施方式只是本发明比较由代表性的例子，显然本发明的技术方案不限于上述实施例，还可以有很多变形。本领域的普通技术人员，以本发明所明确公开的或根据文件的书面描述毫无异议的得到的，均应认为是本专利所要保护的范围。当前第1页1 2 3