艾叶药材及其饮片、标准汤剂、配方颗粒的指纹图谱的构建方法与流程

本发明涉及中药鉴别，尤其涉及一种艾叶药材及其饮片、标准汤剂、配方颗粒的指纹图谱的构建方法。

背景技术：

1、艾叶为菊科植物艾artemisia argyi levi，et vant.的干燥叶。具有温经止血，散寒止痛之功。用于吐血、鲍血、崩漏、月经过多、胎漏下血、少腹冷痛、经寒不调、宫冷不孕等症。醋艾炭为艾叶的炮制加工品，具有温经止血的功效，常用于虚寒性出血。艾品种繁多，分布广泛，野生资源也丰富，受不同地区环境和气候条件的影响，艾叶的质量参差不齐。历史上有北艾、海艾、蕲艾、祁艾等名优品种。此外经调研发现，市售艾叶中也经常会掺有野生小艾叶，其与艾叶药材性状相似，极易混淆，特别是炮制成醋艾炭后，饮片呈不规则的碎片，肉眼更是难以准确区分。

技术实现思路

1、本发明所要解决的技术问题在于，提供一种艾叶药材及其饮片、标准汤剂、配方颗粒的指纹图谱的构建方法，其特征峰信息丰富，可全面反映各种形态的艾叶的质量特征，便于其与各种伪品的鉴别。

2、为了解决上述技术问题，本发明提供了一种艾叶药材及其饮片、标准汤剂、配方颗粒的指纹图谱的构建方法，其包括：

3、将艾叶药材或其饮片、标准汤剂、配方颗粒采用20vol％～90vol％甲醇提取，得到供试品溶液；

4、将新绿原酸对照品、绿原酸对照品、隐绿原酸对照品、咖啡酸对照品、夏佛塔苷对照品、异绿原酸b对照品、1,5-o-二咖啡酰奎宁酸对照品、异绿原酸a对照品、异绿原酸c对照品、棕矢车菊素对照品、异泽兰黄素对照品采用80vol％～100vol％甲醇溶解，得到对照品溶液；

5、将所述供试品溶液、对照品溶液采用液相色谱仪测定，得到艾叶药材或其饮片、标准汤剂、配方颗粒的指纹图谱；

6、其中，所述液相色谱仪的色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，以乙腈为流动相a，以0.05vol％～0.2vol％甲酸水溶液为流动相b进行梯度洗脱，梯度洗脱曲线为：

7、0min～4min，流动相a从8％→10％，流动相b从92％→90％；

8、4min～7min，流动相a从10％→15％，流动相b从90％→85％；

9、7min～12min，流动相a从15％→18％，流动相b从85％→82％；

10、12min～18min，流动相a从18％→19％，流动相b从82％→81％；

11、18min～22min，流动相a从19％→21％，流动相b从81％→79％；

12、22min～27min，流动相a从21％→30％，流动相b从79％→70％；

13、27min～30min，流动相a从30％→36％，流动相b从70％→64％；

14、30min～36min，流动相a从36％→45％，流动相b从64％→55％；

15、36min～38min，流动相a从45％→65％，流动相b从55％→35％；

16、38min～40min，流动相a从65％→95％，流动相b从35％→5％；

17、40min～45min，流动相a为95％，流动相b为5％；

18、45min～46min，流动相a从95％→8％，流动相b从5％→92％；

19、46min～50min，流动相a为8％，流动相b为92％；

20、作为上述技术方案的改进，所述色谱柱的柱长为100mm～150mm，柱径为2mm～3mm，柱温为20℃～40℃，所述固定相的粒径为1.5μm～2.1μm；

21、所述液相色谱仪的流速为0.2ml/min～0.35ml/min，供试品溶液的进样量为0.5μl～3μl，对照品溶液的进样量为0.5μl～3μl；

22、所述液相色谱仪的检测波长为320nm～340nm。

23、作为上述技术方案的改进，所述色谱柱的柱长为150mm，柱径为2.1mm，柱温为25℃，所述固定相的粒径为1.7μm；

24、所述液相色谱仪的流速为0.25ml/min，供试品溶液的进样量为1μl，对照品溶液的进样量为1μl；

25、所述液相色谱仪的检测波长为325nm。

26、作为上述技术方案的改进，所述流动相b为0.1vol％甲酸。

27、作为上述技术方案的改进，所述供试品溶液的制备方法为：

28、取艾叶药材或其饮片、标准汤剂、配方颗粒粉末1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入80vol％甲醇50ml，称定重量，采用功率为300w，频率为45khz的超声处理30min，取出，放冷，再称定重量，用80vol％甲醇补足减失的重量，摇匀，过0.22μm微孔滤膜，取续滤液，即得。

29、作为上述技术方案的改进，所述艾叶药材的指纹图谱包括17个共有峰，其中，峰1为新绿原酸、峰2为绿原酸、峰3为隐绿原酸、峰4为咖啡酸、峰5为夏佛塔苷、峰6为异绿原酸b、峰7为1,5-o-二咖啡酰奎宁酸、峰8为异绿原酸a、峰9为异绿原酸c、峰13为棕矢车菊素、峰15为异泽兰黄素。

30、作为上述技术方案的改进，所述艾叶饮片的指纹图谱包括15个共有峰，其中，峰1为新绿原酸、峰2为绿原酸、峰3为隐绿原酸、峰4为咖啡酸、峰5为夏佛塔苷、峰6为异绿原酸b、峰7为1,5-o-二咖啡酰奎宁酸、峰8为异绿原酸a、峰9为异绿原酸c、峰13为棕矢车菊素、峰15为异泽兰黄素。

31、所述艾叶饮片为醋艾炭。

32、相应的，本发明还公开了一种艾叶制品的鉴别方法，用于鉴别艾叶与醋艾炭，其包括：

33、提供待鉴别物质；

34、以上述的艾叶药材及其饮片、标准汤剂、配方颗粒的指纹图谱的构建方法构建所述待鉴别物质的指纹图谱；

35、若所述指纹图谱呈现峰1～峰15，而不呈现峰16和峰17，则所述待鉴别物质为醋艾炭；若所述指纹图谱呈现峰1～峰17，则待鉴别物质包括或是艾叶。

36、作为上述技术方案的改进，所述醋艾炭包括醋艾炭饮片，或醋艾炭饮片加工得到的醋艾炭标准汤剂、醋艾炭配方颗粒；

37、所述艾叶包括艾叶药材，艾叶药材经过除去杂质或炒制所得到的艾叶饮片，或该艾叶饮片加工得到的艾叶标准汤剂、艾叶配方颗粒。

38、相应的，本发明还公开了一种艾叶及其伪品的鉴别方法，用于鉴别艾叶药材与野生小艾叶药材；其包括：

39、提供待鉴别物质；

40、以上述的艾叶药材及其饮片、标准汤剂、配方颗粒的指纹图谱的构建方法构建所述待鉴别物质的指纹图谱；

41、若所述指纹图谱中峰12、峰13的峰面积/取样量分别小于2500和3900或所述指纹图谱缺峰12、峰13及多出至少一个明显的特征峰，则所述待鉴别物质包括或是野生小艾叶药材；若所述指纹图谱呈现峰1～峰17，且峰12、峰13的峰面积/取样量分别大于14000和59500，则待鉴别物质为艾叶药材。

42、作为上述技术方案的改进，若所述特征图谱缺失峰12、峰13，且在峰6与峰7之间多出一个明显特征峰，则待鉴别物质包括或是广西野生小艾叶药材；

43、若所述特征图谱中峰12、峰13、峰14的峰面积/取样量分别小于2500、3900、2800，且在峰15和峰16之间多出两个明显的特征峰，则待鉴别物质包括或是山东野生小艾叶药材；

44、若所述特征图谱呈现峰1～峰17，且峰12、峰13、峰14的峰面积/取样量分别大于14000、59500和6800，则待鉴别物质为艾叶药材。

45、相应的，本发明还公开了一种醋艾炭及其伪品的鉴别方法，其包括：

46、提供待鉴别物质；

47、以上述的艾叶药材及其饮片、标准汤剂、配方颗粒的指纹图谱的构建方法构建所述待鉴别物质的指纹图谱；

48、若所述指纹图谱中峰12、峰13的峰面积/取样量分别小于600和1400，则所述待鉴别物质包括或是野生小艾叶药材炮制而得的野生小艾叶醋艾炭饮片；若所述指纹图谱呈现峰1～峰15，且峰12、峰13的峰面积/取样量分别大于880和3100，则待鉴别物质为艾叶药材炮制而得的醋艾炭饮片。

49、作为上述技术方案的改进，若所述特征图谱缺失峰5、峰10、峰12和峰13，则待鉴别物质包括或是广西野生小艾叶药材炮制而得的广西野生小艾叶醋艾炭饮片；

50、若所述特征图谱中峰12、峰13的峰面积/取样量分别小于600和1400，且在峰15之后多出一个明显的特征峰，则待鉴别物质包括或是山东野生小艾叶药材炮制而得的山东野生小艾叶醋艾炭饮片；

51、若所述特征图谱呈现峰1～峰15，且峰12、峰13的峰面积/取样量分别大于880和3100，则待鉴别物质为艾叶药材炮制而得的醋艾炭饮片。

52、实施本发明，具有如下有益效果：

53、本发明基于对艾叶物质基础的分析，构建了艾叶指纹图谱，能提供更多丰富特征峰信息，从而更全面反应样品质量，且方法稳定，精密度，重现性较好，同时能有效鉴别艾叶与醋艾炭、艾叶与野生小艾叶、艾叶和与野生小艾叶的炮制品。