检测幽门螺杆菌的方法和试剂盒的制作方法

专利名称：检测幽门螺杆菌的方法和试剂盒的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种基于13C标记的尿素呼吸试验的检测幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)的方法，以及用于所述方法的试剂盒。该方法可用于诊断与幽门螺杆菌有关的胃及十二指肠疾病。
背景技术：
幽门螺杆菌是一种革兰氏阴性杆菌，于1982年被首次分离得到，生物体中幽门螺杆菌的存在与胃及十二指肠疾病有关。具体来说，这种杆菌是十二指肠消化性溃疡的主要诱因，也是慢性胃炎的主要致病因素，它存在于90-95％的患者体内，在十二指肠溃疡、胃溃疡、消化不良、胃非-霍奇金氏淋巴瘤、甚至胃癌患者体内也检测到了幽门螺杆菌。
为了针对可能的胃及十二指肠疾病建立恰当有效的治疗方案，需要对其进行准确可靠的诊断。一部分胃及十二指肠疾病的诊断方法是以幽门螺杆菌的检测为基础的，该方法可分为侵入型和非侵入型。侵入型方法需要对患者进行内窥镜检查，然后对内窥镜活组织检查所采集的胃粘膜样本进行组织学研究、培养或快速尿素酶试验。这些方法具有足够的敏感性和特异性，尽管如此，这些方法成本高，需要专业人员操作，还会引起患者不适，患者偶尔会拒绝接受。非侵入型方法可能有赖于血清学方法和尿素呼吸试验。一般来说，血清学方法的敏感性和特异性比尿素呼吸试验低，此外，所检测的也仅是抗幽门螺杆菌抗体而并非幽门螺杆菌的存在，这一点与13C标记的尿素呼吸试验相同。用血清学试验来观测病菌的根除效果是不可靠的，因为在根除后六个月之后可以看到抗体效价显著降低，且在根除后十八个月之前也不能肯定病菌是否被消除，与之相反，呼吸试验有可能肯定地证实，通过治疗幽门螺杆菌已被消除，从得出此结论之后第一个月开始即是如此。
在大量胃及十二指肠疾病、特别是在与幽门螺杆菌有关的疾病中观察到尿素酶活性异常，因此若检测到尿素酶活性为一异常值，就说明有幽门螺杆菌存在，也就说明可能有胃及十二指肠病理现象产生，尿素呼吸试验正是基于这样一种事实而进行的。尿素酶(尿素酰氨水解酶)是一种催化尿素(碳酰二胺)水解为碳酸铵的酶，碳酸铵又分解为二氧化碳和氨。为了进行尿素呼吸试验，给患者服用可选用碳13(13C)、碳14(14C)、或氮15(15N)标记的尿素，然后对患者的呼吸进行分析，以检测被标记尿素的水解产物的存在。碳13或碳14标记的尿素水解产生的所述同位素标记的二氧化碳被血液系统吸收，并被运输至肺部，最终被呼出，使对患者呼吸的检测成为可能。
B.J.Marshall持有的美国专利US4830010公开了一种基于尿素呼吸试验的胃及十二指肠疾病的诊断方法，该方法存在很多缺陷，其中有-在尿素给药前所使用的溶液没有再现胃幽门适于幽门螺杆菌存活环境的pH条件(在2与2.3之间)，因此所得结果的准确性和可靠性是令人怀疑的，另外，这些溶液经常引起患者的胃及十二指肠功能紊乱，如腹泻、胃部下坠感、呕吐等；-用放射性同位素碳14标记的尿素的使用提高了诊断方法的成本，明显限制了其应用的范围，因为它是不能用在孕妇或儿童身上的，由于放射性的存在，也不可能在同一个患者身上重复试验两或三次以上；-标记的尿素的剂量是与患者体重成比例的，这就必然给测定操作带来一定程度的复杂性，由此消退试剂的消耗也较大，不仅不符合经济观点，而且由于对患者的毒性和或副作用，还存在一定程度的风险；-在全部试验过程中患者必须保持水平体位，会引起患者不适；-使用塑料接口管将患者的呼吸收集到塑料袋中，然后使用注射器从塑料袋中抽取空气，再注入Vacutainer(装有橡皮塞的加压玻璃管，可在径向影响管中收集的患者呼出的气体)中。收集患者的呼吸需要使用大量零部件，不仅使测定操作变得复杂，而且提高了成本，因为除了零部件的成本以外，为了避免环境污染，还必须考虑废弃物的处理成本。
因此，美国专利US4830010所述的方法是一种一般性的方法，不太有特异性，其可靠性与重复性都是令人怀疑的，该方法应用范围有限，复杂、昂贵、麻烦、令患者不适。
本发明提供了一种实施以碳13标记的尿素呼吸试验的方法与试剂盒，用于检测幽门螺杆菌，其克服了上述缺陷。本发明特别是要提供检测幽门螺杆菌的测定方法，该方法简单、易行、可靠、可重复、应用广泛、不复杂、成本低、对患者安全、舒适。
附图的简要说明

图1为用于本发明试剂盒的测试瓶(exetainer)类型，表示出分离状态下测试瓶的各零部件。
图2为图1的测试瓶所有零部件组装在一起时的状态。
发明的详细说明1．检测幽门螺杆菌的方法本发明的第一个目的是提供了一种基于碳13标记的尿素呼吸试验的检测幽门螺杆菌的方法，该方法一般包括下列步骤-给患者服用适量碳13标记的尿素；-在碳13标记的尿素给药前后测定患者呼吸样本中的碳13含量；其特征在于-给患者服用一种柠檬酸水溶液，柠檬酸的含量足以产生pH2至2.5；-在碳13标记的尿素给药之前，测定患者呼吸样本中的碳13含量，测定是在给患者服用所述柠檬酸水溶液之前或之后进行的；-在所述柠檬酸水溶液给药之后或与此同时给患者服用碳13标记的尿素。
由本发明所提供的基于碳13标记的尿素呼吸试验的检测幽门螺杆菌的方法的第一种实施方案涉及在测定呼吸样本中碳13的基线浓度之前给患者服用柠檬酸水溶液，柠檬酸水溶液给药是在碳13标记的尿素给药之前进行的，该方法由下列步骤组成a)给患者服用一种柠檬酸水溶液，柠檬酸的含量足以产生pH2至2.5；
b)收集患者的呼吸样本，目的在于测定碳13的基线含量；c)给患者服用适量碳13标记的尿素；d)收集患者的呼吸样本，目的在于测定服用碳13标记的尿素后的碳13含量；e)分析所收集的呼吸样本，以测定服用碳13标记的尿素前后的碳13含量。
柠檬酸水溶液由柠檬酸在水中的溶液组成，柠檬酸的含量足以产生pH2至2.5。正常情况下，浓度约为0.021g/ml的柠檬酸水溶液可达到该pH。该溶液的使用达到两个目的，一方面它能延迟胃的排空，使碳13标记的尿素在胃幽门的滞留时间较长，另一方面，通过产生一个模拟胃幽门酸碱度的pH，使幽门螺杆菌菌落有可能更有效地发挥其尿素酶的活性，将尿素水解为二氧化碳和水。为了使测定高效、敏感、可靠和可重复，该溶液的使用是必要和关键的，它构成了本发明的重要内容。
柠檬酸水溶液可另外含有可接受的药物及食品添加剂，该添加剂可提高其感官特征，例如甜味剂、矫味剂、着色剂和防腐剂。
通过将各成分溶解在适量水中，即很容易制得所述柠檬酸水溶液。在本发明方法的一个具体和优选的实施方案中，将2至5g柠檬酸溶于适量水，得到柠檬酸水溶液。
在本发明方法的另一个具体实施方案中，考虑了用果汁、如柑橘属水果(橙、柠檬、柚等)作为所述柠檬酸水溶液来源的可能性，只要所述果汁的pH为2至2.5。在果汁不具备该pH的情况下，可以加入所需量的可接受的药物或食品酸化剂以达到所述pH。
柠檬酸水溶液在基于碳13标记的尿素呼吸试验的检测幽门螺杆菌的方法操作中的用途构成了本发明的另一目的，该柠檬酸水溶液中柠檬酸的含量足以产生pH2至2.5，可选其中还含有其他可接受的药物或食品添加剂。
柠檬酸水溶液给药后，将患者的呼吸样本收集在适当的容器中，如测试瓶，目的在于测定碳13的基线浓度。正如人们所熟知的那样，碳13是一种同位素，正常情况下它在天然产物(如来源于蛋白质代谢产物的尿素)中的含量是非常少的。一般，天然产生的尿素样本中含有的碳原子主要由碳12同位素组成，碳13同位素的含量非常少(大约1.1％)。正常情况下在柠檬酸水溶液给药后10分钟左右重复收集样本。适当的容器优选为如图1和图2所示类型的测试瓶，其特征将在描述本发明所提供的试剂盒时进行详细讨论。在本发明方法的一个具体和优选的实施方案中，患者借助于预先安装在测试瓶中的细管向测试瓶中呼气，之后用塞子将测试瓶密封。
然后给患者服用适量的碳13标记的尿素。“适量”一词指安全与有效量的碳13标记的尿素，该剂量足以产生可检测浓度的碳13标记的二氧化碳，而对患者不会引起毒性或过敏反应等副作用。
正常情况下碳13标记的尿素在水中溶解后以其水溶液的方式给药。在本发明方法的一个具体实施方案中，将50至100mg碳13标记的尿素溶于20至50ml水。在优选的实施方案中，给患者服用的碳13标记的尿素水溶液的浓度为1至4.5mg/ml。或者，碳13标记的尿素可以以片剂的方式给药，该片剂可选是可分散的，其中含有适量的碳13标记的尿素。
剂量与体重无关，这一点简化了操作，由于减少了药剂的消耗，也大大节省了经济开支，设想例如为了按照本发明方法测定一个体重70kg的成人，要用掉100mg碳13标记的尿素，而在相应于现有技术所述的其他测定方法中，剂量是体重的函数(一般为2mg/kg体重)，一个体重70kg的成人需要140mg碳13标记的尿素。碳13标记的尿素用量较小，对患者产生的毒性及副作用的风险也就较小。所有这些使本发明的测定方法比其他已知的类似测定方法更简单、成本更低、也更安全。另一方面，使用碳13标记的尿素优点在于没有放射性，既可以对成人、又可以对儿童给药，甚至可以对孕妇给药，此外，根据需要在同一个患者身上可以重复多次。而且，该方法的实施不需要任何特殊的装置，样本可被送至其他测定中心，在邮寄或通过其他方式时也无需特别小心。
碳13标记的尿素是一种以药粉、片剂及其他存在形式获得的商品，制造商例如剑桥同位素实验室公司。
碳13标记的尿素水溶液给药后，将患者的呼吸样本收集在适当的容器中，例如上述的测试瓶，目的在于测定碳13标记的尿素给药后所述同位素的含量。一般，在尿素酶活性起作用适当时间阶段之后重复收集样本，正常情况下约为30分钟。如前文所述，患者借助于细管向测试瓶吹气。收集有呼吸样本的测试瓶可在室温下贮存数月，这对患者呼吸的成分没有不利影响。
收集在容器中的呼吸样本被送至实验室，借助于适当的技术进行呼吸分析，以测定碳13标记的尿素给药前后碳13的含量。在具体的一个发明中，用气相色谱法进行气体的分离，用质谱法进行碳13的测定。
由本发明所提供的基于碳13标记的尿素呼吸试验的测定幽门螺杆菌的方法的第二种实施方案涉及在柠檬酸水溶液与碳13标记的尿素给药之前测定呼吸样本中碳13的基线浓度，然后同时给患者服用柠檬酸水溶液和碳13标记的尿素，该方法由下列步骤组成a)收集患者的呼吸样本，目的在于测定碳13的基线浓度；b)同时给患者服用-一种柠檬酸水溶液，柠檬酸的含量足以产生pH2至2.5；-和适量碳13标记的尿素；c)收集患者的呼吸样本，目的在于测定服用柠檬酸水溶液与碳13标记的尿素之后的碳13含量；d)分析所收集的呼吸样本，以测定服用碳13标记的尿素前后碳13的含量。
在进行该第二种供选择方法时，由于同时服用柠檬酸水溶液与碳13标记的尿素，测定的持续时间减少了大约10分钟，步骤也少了一个。
在柠檬酸水溶液与碳13标记的尿素给药之前收集患者的呼吸样本，目的在于测定碳13的基线浓度，如前文本发明检测幽门螺杆菌的第一种供选择方法的实施方案所述，样本的收集在测试瓶中进行。
然后，给患者同时服用柠檬酸水溶液和适量碳13标记的尿素。与第一种供选择方法的情况相同，柠檬酸水溶液由柠檬酸在水中的溶液组成，柠檬酸的含量足以产生pH2至2.5，该水溶液另外可含有可接受的药物及食品添加剂，该添加剂可提高其感官性质和特征，例如甜味剂、矫味剂、着色剂和防腐剂。碳13标记的尿素既可以在水中溶解后以其水溶液的方式给药，也可以以片剂的方式给药。在本发明方法的一个具体实施方案中，将50至100mg碳13标记的尿素可选择地溶于20至50ml水后给药。
柠檬酸与碳13标记的尿素给药后，收集患者的呼吸样本于测试瓶中，目的在于测定碳13标记的尿素给药后的所述同位素含量。一般，在尿素酶活性起作用适当时间阶段之后重复收集样本，正常情况下约为30分钟。如前文所述，患者借助于细管向测试瓶吹气。
收集有呼吸样本的测试瓶可在室温下贮存数月，这对患者呼吸的成分没有不利影响。
收集在容器中的呼吸样本被送至实验室，借助于适当的技术进行呼吸分析，以测定碳13标记的尿素给药前后碳13的含量，分析方法例如气相色谱法和质谱法。
一般来说，为了实施本发明检测幽门螺杆菌的任一种供选择方法的实施方案，患者宜禁食，建议患者在进行试验前6-8小时内不吃任何食物。
比较碳13的基线含量与碳13标记的尿素给药后的碳13含量来对尿素酶活性进行评价。尿素酶活性的高、低或没有表现(断开点或参考点3-5)是具有尿素酶活性的微生物存在的指征，例如幽门螺杆菌，因而能够指示出胃及十二指肠疾病的存在。
因此，由本发明所提供的检测幽门螺杆菌的方法的一个具体应用为幽门螺杆菌感染的诊断，幽门螺杆菌是前述胃及十二指肠疾病的直接致病因素，诊断是通过基于碳13标记的尿素呼吸试验的非侵入型方法进行的。所以，由本发明所提供的检测幽门螺杆菌的方法可用于胃及十二指肠疾病的诊断，如十二指肠消化性溃疡、十二指肠溃疡、胃溃疡、消化不良、非-霍奇金氏胃淋巴瘤、甚至胃癌。
本发明检测幽门螺杆菌的方法的另一个应用是检查胃及十二指肠疾病的治疗进展，特别是幽门螺杆菌的根除作用，这是因为该方法即使在治疗后最多一个月内也能测定幽门螺杆菌的根除，而不会象血清学方法那样产生假阴性结果。
由本发明所提供的检测幽门螺杆菌的方法无论哪一种供选择的实施方案，都具有许多突出于其他类似已知方法的优点，它们有-该方法是一种非侵入型方法，因此不需要对患者进行胃镜检查；-该方法是安全的，它使用了适量稳定、无放射性的同位素(碳13)；-该方法是可靠和可重复的，它再现了胃幽门环境的标准条件，确保可能存在的幽门螺杆菌菌落的存活；-该方法是有效的，它反映了全部胃表面的感染情况；-该方法是快速的，它在48小时内出结果；-该方法是容易、简单的，它不需要有资格的人员操作，实际上它可在医生营业所或医院中实施，也可以在患者自己的家中实施，然后将收集有不同呼吸样本的密封容器送交分析实验室；-该方法是令人舒适的，患者在进行测定的过程中不用被迫保持某一种体位，实际上患者在试验中不必保持现有技术所述的其他测定方法所需的水平体位，他可以改变姿势，或坐或站，唯一的限制是他在试验中不可以吸烟或吃喝；-呼吸的收集非常简单，成本低；-该方法具有广泛应用，它能应用于孕妇、儿童、成人和老人。
2．检测幽门螺杆菌的试剂盒本发明第二个目的是提供了一种用于检测幽门螺杆菌的试剂盒，特别是用于实施上述基于碳13标记的尿素呼吸试验的方法的试剂盒。试剂盒最简单的形式包括一个盒子，该盒子含有-一个含有碳13标记的尿素的容器；-至少两个指定用于装患者呼吸的容器，其中之一指定装柠檬酸给药后但是碳13标记的尿素给药前的患者呼吸，而另一个容器指定装碳13标记的尿素给药后的患者呼吸，所述容器由玻璃管构成，玻璃管具有带螺帽的塞子，塞子装有一个隔板；-向上述容器中呼气的装置。
试剂盒可以另外包括或可以不另外包括一个含有可以是固态的柠檬酸的容器，柠檬酸的量应使其在溶于适量水后产生pH2至2.5。在该特定的盒子中，含有柠檬酸的容器是一个扁囊或诸如此类。或者可选地，容器除柠檬酸以外可含有可接受的药物及食品添加剂(甜味剂、矫味剂、防腐剂和着色剂)。因此，在本发明试剂盒的一个具体实施方案中，提供了一个扁囊，该扁囊含有2至5g柠檬酸、一般为4.2g，可选地还有其他添加剂，供其溶解在200ml水中。
含有碳13标记的尿素的容器可以是一个扁囊，该扁囊含有适量粉末形式的碳13标记的尿素，容器或可以是一个泡形容器，该泡形容器含有适当剂量的碳13标记的尿素药片，容器还可以是一个密封瓶子，该瓶子含有适量碳13标记的尿素，其中所述瓶子具有适当体积，以获得所需浓度的碳13标记的尿素水溶液。在一个具体实施方案中，含有碳13标记的尿素的容器是一个至少为20至50ml的瓶子，其中含有50至100mg粉末状碳13标记的尿素。在另一个具体实施方案中，所述容器是一个含有可选择性地为可分散的药片的泡形容器，其含有75至100mg碳13标记的尿素。
指定装患者呼吸的容器是测试瓶，如图1和图2所示，从图中可以看到，所述测试瓶由一个管(1)和塞子(2)组成，管优选由玻璃制成，塞子刻有螺纹，中间有一个隔板(3)，隔板由适用于医药目的的弹性材料制成，可被针刺穿，针是用来收集测试瓶中含有的气体，供其随后的分析之用。隔板(3)经特殊设计，使其可以被气体收集机的针刺穿，进行连续的空气收集而没有停顿。
为了评定本发明测定方法的可靠性和可重复性，在碳13标记的尿素给药前后一式两份收集呼吸样本是重要的，因此，本发明试剂盒优选将含有四个测试瓶，其中两个将被用于在柠檬酸给药后但是碳13标记的尿素给药前收集患者的呼吸，而其他两个将在碳13标记的尿素给药后收集患者的呼吸。为了使所得结果的整理分析简单易行，测试瓶具有一个标识是重要的，该标识使区分开收集来自碳13标记的尿素给药前的患者呼吸的测试瓶与收集来自碳13标记的尿素给药后的患者呼吸的测试瓶成为可能。一般来说，用于向容器中呼气的装置是细管或类似装置。
因此，在本发明的一个具体和优选的实施方案中，提供了一种用于检测幽门螺杆菌的试剂盒，特别是用于进行前述碳13标记的尿素呼吸试验的试剂盒，该试剂盒包括一个盒子，该盒子含有-一个含有固态柠檬酸的扁囊，柠檬酸的量足以使其在溶于适量水后产生pH2至2.5，可选还含有几种添加剂，如甜味剂、矫味剂、防腐剂和着色剂；-一个含有适量粉末形式的碳13标记的尿素的瓶子，所述瓶子具有溶解尿素并达到所需浓度所需的体积，或者是一个含有适量碳13标记的尿素药片的泡形容器；-四个指定装患者呼吸的测试瓶，其中两个将被用于在柠檬酸给药后但是碳13标记的尿素给药前收集患者的呼吸，而其他两个将在碳13标记的尿素给药后收集患者的呼吸；-几支用于向测试瓶呼气的细管。
给测试瓶作标记会是有利的，这样一来可以将指定用于收集碳13标记的尿素给药前的患者呼吸的测试瓶与用于收集碳13标记的尿素给药后的患者呼吸的测试瓶容易区分开来。
下列实施例解释说明本发明。
实施例1柠檬酸水溶液的制备将下列成分的混合物溶于200ml水，制得pH2至2.5柠檬酸水溶液克 百分比柠檬酸 4.2 96.1碳酸钠 0.1 2.24柠檬香料(粉) 0.040.9天冬苯丙二肽酯 0.030.67日落黄(Sunset-Yellow) 0.002 0.04总计 4.472 99.95例2幽门螺杆菌的检测对怀疑患有与幽门螺杆菌有关的胃及十二指肠疾病的患者进行下述测定。测定是对一个已禁食8小时的成人患者进行的。
给患者服用按照实施例1制得的200ml柠檬酸水溶液。10分钟后，将患者的呼吸样本一式两份收集在标识为“基线”的测试瓶中，用于测定基线碳13含量。为了收集呼吸样本，患者利用预先装在测试瓶中的细管轻轻地吐出呼气，直到由于呼气使得在测试瓶内壁上出现冷凝为止，之后在移去细管的同时保持呼气，最后用相应的塞子密封测试瓶。
然后，给患者服用50ml浓度为1.5mg/ml的碳13标记的尿素水溶液(剑桥同位素实验室公司)。30分钟后，如上所述将患者的呼吸样本一式两份收集在标识为“给药后”的测试瓶中，用于测定碳13标记的尿素给药后所述同位素的含量。
将测试瓶送交分析实验室，对所收集的呼吸样本进行分析，以测定碳13标记的尿素给药前后碳13的含量。为此将样本送入自动呼吸碳分析仪(ABCA)(Europa Cientifica,S.L)，随后不打开瓶子借助于刺穿塞子隔板的针抽取测试瓶中含有的气体。呼吸样本中含有的气体经气相色谱法分离，按照制造商的说明用质谱法测定碳13含量。
医生通过比较碳13基线浓度[基线]与碳13标记的尿素给药后的碳13浓度[给药后]，可对尿素酶活性作出判断，从而对可能患有的与幽门螺杆菌的存在有关的胃及十二指肠疾病作出诊断。
权利要求
1．一种基于碳13标记的尿素呼吸试验的检测幽门螺杆菌的方法，该方法由下列步骤组成a)给患者服用一种柠檬酸水溶液，柠檬酸的含量足以产生pH2至2.5；b)收集患者的呼吸样本，目的在于测定碳13的基线含量；c)给患者服用适量碳13标记的尿素；d)收集患者的呼吸样本，目的在于测定碳13标记的尿素给药后的碳13含量；e)分析所收集的呼吸样本，以测定碳13标记的尿素给药前后的碳13含量。
2．根据权利要求1的方法，其中所述的柠檬酸水溶液另外还含有可接受的药物或食品添加剂，选自甜味剂、矫味剂、着色剂和防腐剂。
3．根据权利要求1的方法，其中所述的柠檬酸水溶液来源于果汁，可选用可接受的药物或食品酸化剂进行酸化。
4．根据权利要求1的方法，其中用于测定基线碳13浓度的患者呼吸样本的收集是在柠檬酸水溶液给药后大约10分钟进行的。
5．根据权利要求1的方法，其中碳13标记的尿素是以水溶液的形式给药的。
6．根据权利要求5的方法，其中所述的碳13标记的尿素水溶液的浓度为1至4.5mg/ml。
7．根据权利要求1的方法，其中碳13标记的尿素是以药片的形式给药的。
8．根据权利要求7的方法，其中所述的药片含有50至100mg碳13标记的尿素。
9．根据权利要求1的方法，其中用于测定碳13标记的尿素给药后的碳13含量的患者呼吸样本的收集是在碳13标记的尿素给药后大约30分钟进行的。
10．根据权利要求1的方法，其中患者的呼吸是收集在测试瓶中的。
11．根据权利要求1的方法，其中对呼吸的分析和对碳13含量的测定是用气相色谱法和质谱法进行的。
12．根据权利要求1的方法，其中基线碳13含量与碳13标记的尿素给药后的碳13含量的比较是患者体内存在尿素酶活性的指征。
13．一种基于碳13标记的尿素呼吸试验的检测幽门螺杆菌的方法，该方法由下列步骤组成a)收集患者的呼吸样本，目的在于测定碳13的基线浓度；b)同时给患者服用-一种柠檬酸水溶液，柠檬酸的含量足以产生pH2至2.5；-和适量碳13标记的尿素；c)收集患者的呼吸样本，目的在于测定柠檬酸水溶液与碳13标记的尿素给药之后的碳13含量；d)分析所收集的呼吸样本，以测定碳13标记的尿素给药前后碳13的含量。
14．根据权利要求13的方法，其中所述的柠檬酸水溶液另外还含有可接受的药物或食品添加剂，选自甜味剂、矫味剂、着色剂和防腐剂。
15．根据权利要求13的方法，其中所述的柠檬酸水溶液来源于果汁，可选用可接受的药物或食品酸化剂进行酸化。
16．根据权利要求13的方法，其中碳13标记的尿素是溶解在水溶液中给药的。
17．根据权利要求16的方法，其中所述的碳13标记的尿素水溶液的浓度为1至4.5mg/ml。
18．根据权利要求13的方法，其中碳13标记的尿素是以药片的形式给药的。
19．根据权利要求18的方法，其中所述的药片含有50至100mg碳13标记的尿素。
20．根据权利要求13的方法，其中用于测定碳13标记的尿素给药后的碳13含量的患者呼吸样本的收集是在碳13标记的尿素给药后大约30分钟进行的。
21．根据权利要求13的方法，其中患者的呼吸是收集在测试瓶中的。
22．根据权利要求13的方法，其中对呼吸的分析和对碳13含量的测定是用气相色谱法和质谱法进行的。
23．根据权利要求13的方法，其中基线碳13含量与碳13标记的尿素给药后的碳13含量的比较是患者体内存在尿素酶活性的指征。
24．一种用于检测幽门螺杆菌的试剂盒，所述检测是通过实施根据权利要求1或13的基于碳13标记的尿素呼吸试验的方法进行的，该试剂盒包括一个盒子，该盒子含有-一个含有碳13标记的尿素的容器；-至少两个指定装患者呼吸的容器，其中之一指定装柠檬酸给药后但是碳13标记的尿素给药前的患者呼吸，而另一个容器指定装碳13标记的尿素给药后的患者呼吸，所述容器由玻璃管构成，玻璃管具有带螺帽的塞子，塞子装有一个隔板；-向上述容器中呼气的装置。
25．根据权利要求24的试剂盒，该试剂盒另外包括一个含有柠檬酸的容器。
26．根据权利要求25的试剂盒，其中柠檬酸是固态的，其含量使其在溶于适量水后产生pH2至2.5。
27．根据权利要求26的试剂盒，其中含有柠檬酸的容器是一个扁囊。
28．根据权利要求25的试剂盒，其中柠檬酸容器除柠檬酸以外还含有其他可接受的药物或食品添加剂，选自甜味剂、矫味剂、防腐剂和着色剂。
29．根据权利要求24的试剂盒，其中含有碳13标记的尿素的容器是一个瓶子，该瓶子含有适量碳13标记的尿素，该瓶子具有适当的体积适合于获得所需浓度的碳13标记的尿素水溶液。
30．根据权利要求24的试剂盒，其中含有碳13标记的尿素的容器是一个泡形容器，该泡形容器含有一个可选择地为可分散的药片，该药片含有适量碳13标记的尿素。
31．根据权利要求24的试剂盒，其中指定装患者呼吸的容器是测试瓶，该测试瓶由一个玻璃制成的管(1)和塞子(2)组成，塞子刻有螺纹，并且中间有一个隔板(3)，隔板由适用于药用目的的弹性材料制成，其可被针刺穿，针收集测试瓶中含有的体气，供其随后的分析之用。
32．根据权利要求24的试剂盒，其中所述的向容器中呼气的装置是细管。
33．一种用于检测幽门螺杆菌的试剂盒，其适用于实施根据权利要求1或13的基于碳13标记的尿素呼吸试验的方法，该试剂盒包括一个盒子，该盒子含有-一个含有固态柠檬酸的扁囊，柠檬酸的量足以使其在溶于适量水后产生pH2至2.5，可选择地还含有几种添加剂，如甜味剂、矫味剂、防腐剂和着色剂；-一个含有碳13标记的尿素的瓶子，选自ⅰ)一个含有适量碳13标记的尿素的瓶子，所述瓶子具有溶解尿素并达到预定浓度所需的体积，或者另一种选择是ⅱ)一个含有适量碳13标记的尿素药片的泡形容器，药片可选择地为可分散的；-四个指定装患者呼吸的测试瓶，其中两个将被用于在柠檬酸给药后但是碳13标记的尿素给药前收集患者的呼吸，而其他两个将在碳13标记的尿素给药后收集患者的呼吸；-几支用于向测试瓶呼气的细管。
34．根据权利要求33的试剂盒，其中所述的扁囊含有2至5g柠檬酸，以及可选择的其他添加剂，供在适量水中溶解之用。
35．根据权利要求33的试剂盒，其中含有碳13标记的尿素的瓶子是一个至少20至50ml的瓶子，其中含有50至100mg碳13标记的尿素。
36．根据权利要求33的试剂盒，其中所述的药片含有50至100mg碳13标记的尿素。
37．根据权利要求33的试剂盒，其中对所述的测试瓶进行了标识，使容易区分开用于收集来自碳13标记的尿素给药前的患者呼吸的测试瓶与用于收集来自碳13标记的尿素给药后的患者呼吸的测试瓶成为可能。
38．一种柠檬酸水溶液的用途，该柠檬酸水溶液中柠檬酸的含量足以产生pH2至2.5，可选择地还含有其他药学上可接受的添加剂，该柠檬酸水溶液用于实施基于碳13标记的尿素呼吸试验的检测幽门螺杆菌的方法中。
全文摘要
本方法是基于碳13标记的尿素呼吸试验,包括a)给患者服用一种pH2至2.5的柠檬酸水溶液;b)收集患者的呼吸样本,目的在于测定碳13的基线含量;c)给患者服用适量碳13标记的尿素;d)收集患者的呼吸样本,目的在于测定碳13标记的尿素给药后的碳13含量;e)分析所收集的呼吸样本,以测定碳13标记的尿素给药前后的碳13含量。本发明试剂盒具有一个柠檬酸容器、还有一个碳13标记的尿素容器、指定装患者呼吸的测试瓶、和向测试瓶中呼气的装置。
文档编号G01N33/00GK1219238SQ9719276
公开日1999年6月9日 申请日期1997年7月21日 优先权日1996年11月12日
发明者A·比塞罗·德·本格亚·瓦莱奥 申请人:伊索梅德公司