胶体金微孔法检测试剂盒及其制备方法
【技术领域】
[0001]本发明属于食品安全快速检测技术领域，具体涉及一种检测试剂盒。
【背景技术】
[0002]目前我国食品安全状况并不令人乐观:剧毒农药、兽药的大量使用；添加剂的误用、滥用；各种工业、环境污染物的存在；有害元素、微生物和各种病原体的污染；有害生物和疫病多次发现；生物技术和食品新技术、新工艺的应用带来的可能的负面效应；周边国家疫情的频繁发生；国内外人口流动的增加，新疾病的出现和原已消灭的重大疫病的死灰复燃等。近年在市场上曾发现食物加吊白块、鸡鸭饲喂激素、面粉加增白剂、海鲜用甲醛浸泡等，还有在水果上喷施催熟剂、膨大剂，在蔬菜上喷施剧毒农药等案例。
[0003]食品安全问题似有愈演愈烈之势，概括起来，有如下三个特点。一是问题食品的涉及面越来越广。问题食品已从过去的粮油肉禽蛋菜豆制品、水产品等传统主副食品，扩展到水果、酒类、南北干货类、奶制品、炒货食品等，呈立体式、全方位态势。二是问题食品的危害程度越来越深，已从食品外部的卫生危害走向了食品内部的安全危害。过去只注意食品细菌总数，现在是深入食品内部的农药、化肥、化学品残留。三是制毒制劣手段越来越多样、越来越“深入”、手法越来越隐蔽，从食品外部的走向内部的、从物理的走向化学的。
[0004]随着食品安全问题的严重程度愈演愈烈，对于食物中药物残留的检测，例如，水产品中的呋喃唑酮、阿莫西林、环丙沙星以及四环素等等采用的方法有化学比色法、液相色谱法、酶联免疫法、胶体金法等。其中，化学比色法、液相色谱法和酶联免疫法耗时较长，且需要配备专门的检测设备，不能满足抽检过程中现场快速检测的要求；同时，这三种检测方法相对来说检测成本很高，而且需要专业人员进行检测操作，会无形中增加检测成本和人工成本。胶体金检测方法是最近几年新兴的检测技术，该检测方法是利用抗原与抗体的高度特异性反应的原理进行检测，具有高度的灵敏度和特异性，操作过程简单，且不需要配套的仪器设备，检测耗时短，而且检测结果可直接用肉眼进行判读，适合抽检过程中样本的现场快速检测，可以较好的实现食品安全领域快速、准确的检测要求。
[0005]虽然经过近几年的发展，胶体金检测技术逐渐发展成熟，但是之前的胶体金检测试纸条产品都是直接将胶体金颗粒标记在单克隆或多克隆抗体上，这样会增加抗体的用量和标记的成本，同时，由于标记技术的局限性会导致胶体金颗粒的标记影响抗体的活性，导致抗体活性下降，从而影响实际应用过程中的检测效果，因此，需要开发一种新的技术，既能应用胶体金检测方法的快速、灵敏度高和特异性好等特点，又能保证抗体的活性，减少因为标记对抗体活性的影响而导致的检测结果不理想的问题。
【发明内容】
[0006]本发明的目的之一是为了提供一种间接标记的检测食物中药物残留的检测试剂盒，该检测试剂盒能克服以上的缺陷，能利用胶体金检测方法的快速、简便等特点，同时又能避免原有的胶体金标记技术对抗体活性的影响保证检测结果的准确性。
[0007]本发明的目的之二是提供一种制备该检测试剂盒的方法。
[0008]本发明采用的技术方案为:
[0009]胶体金微孔法检测试剂盒，包括金标微孔板和检测卡，所述金标微孔板为在微孔板上包被有胶体金标记的单克隆抗体，所述检测卡包括吸水垫和载体膜，所述吸水垫与所述载体膜一端相连，所述载体膜上设有检测区和质控区，检测区位于吸水垫与质控区间，检测区上包被有特异性结合抗原，质控区上包被有二抗。
[0010]进一步地，所述胶体金标记的单克隆抗体采用间接标记的方法制备，具体方法为:将胶体金标记在抗抗体上，然后用胶体金标记完的抗抗体与单克隆抗体特异性的结合。
[0011]进一步地，所述载体膜为硝酸纤维素膜。
[0012]进一步地，所述吸水垫为吸水纸或滤油纸。
[0013]一种制备上述检测试剂盒的方法，所述金标微孔板的制备方法为:取微孔板，将胶体金标记的单克隆抗体溶液加入微孔板中，溶液高度为微孔高度的五分之一至二分之一，加入溶液完成之后，即将带有溶液的微孔板冷冻干燥，即得金标微孔板；所述检测卡的制备方法为:首先将载体膜粘附于底板上，然后将吸水垫粘附在载体膜的一端，制备特异性结合抗原溶液和二抗溶液，然后制备检测区和质控区，最后切成宽度小于金标微孔板内径的检测卡。
[0014]本发明提供的胶体金微孔法检测试剂盒及其制备方法，具有以下优点:
[0015]1、本发明采用胶体金免疫层析法作为检测手段，胶体金金颗粒对蛋白有很强的吸附功能，可以与蛋白或者抗体非共价结合，这样可以放大反应信号，使溶液观察不到的反应通过胶体金放大反应信号。
[0016]2、本发明采用胶体金间接与单克隆抗体相结合，避免了胶体金直接标记抗体而导致的抗体效价下降，从而避免了检测灵敏度的下降，从而间接的避免了单克隆抗体用量的增加，因为传统的直接对单克隆抗体进行标记的方法很容易导致抗体的效价降低，这种情况下要保证检测的灵敏度就必须要增加单克隆抗体的用量。采用胶体金间接与单克隆抗体相结合的方法可以减少单克隆抗体的用量，一定程度的控制成本。
[0017]3、采用金标微孔板有利于样品的批量检测，同时将金标的抗体与检测卡分开包装，避免了检测卡的污染，从而避免了对检测结果的不良影响。
[0018]4、本发明利用了胶体金检测方法的优良特性，可实现现场样本的快速检测，符合市场需求，有利于推广应用。
【附图说明】
[0019]图1为本发明实施例提供的金标微孔板单元的纵剖示意图。
[0020]图2为本发明实施例提供的金标微孔板单元的结构示意图。