一种乙肝扶正胶囊的检测方法
【技术领域】
[0001 ] 本发明涉及一种药物的检测方法，特别涉及一种乙肝扶正胶囊的检测方法。
【背景技术】
[0002]乙肝扶正胶囊是《卫生部药品标准》中药成方制剂第一册收载的品种，其标准编号为WS3-B-0001-89，处方何首乌、虎杖、贯众、肉桂、明矾、石榴皮、当归、丹参、沙苑子、人参、麻黄，是纯中药制成的胶囊剂，具有补肝肾，益气活血的作用。临床上用于治疗乙型肝炎，辨证属于肝肾两虚证候。临床表现为:肝区隐痛不适，全身乏力，腰膝酸软，气短心悸，自汗，头晕，纳少，舌淡脉弱的常用药品。该药品标准是卫生部最早制定的药品标准，收载于第一册第一页，在当时是比较好的药品标准。原标准中仅对当归和肉桂进行了显微鉴别，没有对其它几种药材和任何成份进行定性定量的质量控制，既没有质量指标，也没有这些质量指标的鉴别和检验方法，由此会导致不法厂商在生产药品时可能不严格按照处方的剂量配料，肆意减少原料，致使药品的疗效明显下降，影响药品的安全有效，严重损害患者的利益。
[0003]处方中的虎杖，为常用中药材；主产于江苏、浙江及安徽等地。因其采收期叶均枯萎、脱落，仅剩残茎，与博落回的残茎相似，均为中空似竹，故在浙江某些地方民间均称作“猢狲竹”或“蛤蟆竹”，药农极易误采误收，导致虎杖商品中混有博落回根。而博落回为罂粟科植物，含多种生物碱，毒性较大，文献上已屡有口服或肌注后中毒乃至死亡的报道，主要为引起急性心源性脑缺血综合征。因此，控制乙肝扶正胶囊中博落回的混入非常必要。
[0004]处方中用到沙苑子，为豆科植物扁茎黄芪的干燥、成熟种子，具有温补肝肾、固精、缩尿、明目等功效，是一种常用中药材，临床应用广泛且疗效肯定。由于市场需求量大，一些不法分子为达到其赢利的目的，常以次充好、以假乱真，造成市场上沙苑子的品种比较混乱，常有混入紫云英、猪屎豆的种子等情况发生。猪屎豆，又名太阳麻，为豆科多年生草本或直立矮小灌木，其种子和幼嫩枝叶有毒，人畜误食种子或茎叶，严重者会因腹水和肝功能丧失而导致死亡。因此，控制猪屎豆，不让其混入沙苑子中，对保证乙肝扶正胶囊的安全性十分必要。
[0005]在现有乙肝扶正胶囊的检测方法中，均未对博落回和猪屎豆进行鉴别。根据乙肝扶正胶囊的处方特点，制定确实可行的检测方法，尤其是对处方中虎杖和博落回、沙苑子和猪屎豆的鉴别，以保证产品的质量和临床疗效非常迫切。
【发明内容】
[0006]本发明的目的在于克服现有技术中所存在的上述不足，提供一种乙肝扶正胶囊的检测方法。该检测方法通过对制剂中的何首乌、虎杖和博落回、沙苑子和猪屎豆、贯众主要药材进行薄层色谱定性鉴别，同时对丹参特征成分丹酚酸B进行含量测定，有效地控制了乙肝扶正胶囊的成分和含量，使该药品更加安全、有效。
[0007]为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案:
[0008]本发明所述乙肝扶正胶囊的制备方法为:分别称取何首乌15g、虎杖25g、贯众50g、肉桂5g、明矾10g、石榴皮6g、当归10g、丹参15g、沙苑子10g、人参10g、麻黄6g。将当归、肉桂、丹参、明矾粉碎为细粉；将余下七味药材加水煎煮二次，第一次3h，第二次2h，合并煎液，滤过，滤液浓缩成稠膏状，然后加入上述细粉，混匀，于70?80°C干燥，再粉碎成细粉，过筛，装胶囊，即得乙肝扶正胶囊。
[0009]本发明所述乙肝扶正胶囊的检测方法，包括薄层色谱定性鉴别、含量测定项目，所述薄层色谱定性鉴别包括对制剂中何首乌的鉴别、虎杖和博落回的鉴别、贯众的鉴别、沙苑子和猪屎豆的鉴别；所述含量测定包括对制剂中丹参特征成分丹酚酸B的含量测定；
[0010](I)薄层色谱定性鉴别
[0011]何首乌的鉴别:以何首乌对照药材为对照品，以体积比氯仿:甲醇:水=19?22: 8?10:1的氯仿-甲醇-水混合液为展开剂，用薄层色谱法鉴别；
[0012]虎杖和博落回的鉴别:分别以虎杖对照药材和博落回对照药材为对照品，以体积比氯仿:甲醇=11?15: 3的氯仿-甲醇混合液为展开剂，用薄层色谱法鉴别；
[0013]贯众的鉴别:以贯众对照药材为对照品，以体积比氯仿:丙酮:冰醋酸=13?17: 2.5?3.5: 0.5的氯仿-丙酮-冰醋酸混合液为展开剂，用薄层色谱法鉴别；
[0014]沙苑子和猪屎豆的鉴别:分别以沙苑子对照药材和猪屎豆对照药材为对照品，以体积比甲醇:水=7?9: 3的甲醇-水混合液为展开剂，用薄层色谱法鉴别；
[0015]⑵含量测定
[0016]丹酚酸B的含量测定:照高效液相色谱法《中国药典》2010年版一部附录VID测定;
[0017]用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比甲醇:乙腈:甲酸:水=28?32: 9?11:1: 57?61的甲醇-乙腈-甲酸-水混合液为流动相；检测波长为286nm;理论板数按丹酚酸B峰计算应不低于2000 ;
[0018]精密称取丹酚酸B对照品适量，加70?80v %甲醇制成对照品溶液；
[0019]取本品，取其内容物，研细，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70?80v%甲醇，称定重量，超声处理，取出，放冷，再称定重量，用70?80v%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，得供试品溶液；
[0020]分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪，测定，本品每粒含丹酚酸B不得少于0.5mgo
[0021]何首乌，又名多花寥、紫乌藤、夜交藤等。是寥科寥族何首乌属多年生缠绕藤本植物，块根肥厚，以其块根入药，可安神、养血、活络，解毒(截疟)、消痈；何首乌可补益精血、乌须发、强筋骨、补肝肾，是常见贵细中药材。何首乌块根含蒽醌类化合物，主为大黄素、大黄酚以及大黄素甲醚、大黄酸等，其溶解性不好。其生产过程中若不按照规定工艺，则可能导致有效成份提取不全或者保留不完。因此，必须对乙肝扶正胶囊中的何首乌进行检测。
[0022]贯众，多年生草本，为鳞毛蕨科植物粗茎鳞毛蕨的根茎及叶柄残基，性味苦、涩、微寒、有小毒；归肝经、胃经。其功能杀虫、清热、解毒、凉血止血。因为贯众有毒，所以必须严格控制好其在乙肝扶正胶囊中的含量，否则会对患者带来不良反应。现有技术中，许多厂家由于无法严格控制贯众在乙肝扶正胶囊中的含量，导致许多厂家直接取消贯众入药，而贯众为乙肝扶正胶囊中的主要药方，取消贯众入药会显著影响乙肝扶正胶囊的疗效。因此，对乙肝扶正胶囊中的贯众进行鉴别非常重要。
[0023]虎杖，为常用中药材；主产于江苏、浙江及安徽等地。因其采收期叶均枯萎、脱落，仅剩残茎，与博落回的残茎相似，均为中空似竹，故在浙江某些地方民间均称作“猢狲竹”或“蛤蟆竹”，药农极易误采误收，导致虎杖商品中混有博落回根。而博落回为罂粟科植物，含多种生物碱，毒性较大，文献上已屡有口服或肌注后中毒乃至死亡的报道，主要为引起急性心源性脑缺血综合征。因此，控制乙肝扶正胶囊中博落回的混入非常必要。
[0024]沙苑子，为豆科植物扁茎黄芪的干燥、成熟种子，具有温补肝肾、固精、缩尿、明目等功效，是一种常用中药材，临床应用广泛且疗效肯定。由于市场需求量大，一些不法分子为达到其赢利的目的，常以次充好、以假乱真，造成市场上沙苑子的品种比较混乱，常有混入紫云英、猪屎豆的种子等情况发生。猪屎豆，又名太阳麻，为豆科多年生草本或直立矮小灌木，其种子和幼嫩枝叶有毒，人畜误食种子或茎叶，严重者会因腹水和肝功能丧失而导致死亡。因此，控制猪屎豆，不让其混入沙苑子中，对保证乙肝扶正胶囊的安全性十分必要。
[0025]丹参，为唇形科植物丹参的干燥根和根茎，具有活血祛瘀，通经止痛，清心除烦，凉血消痈之功效。现代研宄表明，丹参中含有丹参酮II A、丹酚酸B、原儿茶醛等多种成份，其主要有效成份的热稳定性差，其中以丹酚酸B的热稳定性最差，甚至在高于60°C的温度时，低浓度下受热20min左右即损失50%以上。因此在乙肝扶正胶囊生产过程中，如果没有控制好工艺条件，乙肝扶正胶囊中的有效成份会发生损失，直接影响到乙肝扶正胶囊的疗效。对热稳定性最差的丹酚酸B进行含量测定，不仅可有效保证丹参中其它有效成份不受影响，也基本上保证了乙肝扶正胶囊中其它成份不受影响，从而保证了乙肝扶正胶囊的疗效。
[0026]在本发明所述丹酚酸B的含量测定中，采用超声提取，与传统的加热水流提取方式相比，提取效果相当，但是操作更加简单，易掌握。采用体积比甲醇:乙腈:甲酸:水=28?32: 9?11:1: 57?61的甲醇-乙腈-甲酸-水混合液为流动相，丹酚酸B在5min内即可出峰，出峰时间短，而且分离度好，图谱基线稳定。
[0027]本发明所述检测方法通过对何首乌、贯众、虎杖、博落回、沙苑子、猪屎豆进行薄层色谱鉴别，并对丹酚酸B进行含量测定，有效地控制了乙肝扶正胶囊的成分和含量，使该药品更加安全、有效，从而保证了该胶囊制剂的临床疗效，维护了患者利益。
[0028]优选地，所述(I)项下虎杖和博落回薄层色谱定性鉴别的具体步骤为:取本品，取其内容物，置锥形瓶中，加入甲醇，振摇，超声提取，滤过，滤液水浴蒸干，残渣加甲醇使溶解，作为供试品溶液；另取虎杖对照药材，博落回对照药材，按照供试品溶液的制备方法分别制成虎杖对照药材溶液和博落回对照