水混合液中甲醇与水的体积比大于9: 3，分离效果与实施例1?3基本相当，但是展开时间需由50min延长至54min。因此，本发明所述的以甲醇-水混合液(7?9: 3)为展开剂，展开效果好，展开时间适宜，以较大的优势处于较佳的效果。
[0116]对比例4
[0117]考察提取方法对丹酚酸B含量测定的影响。
[0118]丹酚酸B的含量测定:照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VI D)测定；
[0119]用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比的甲醇:乙腈:甲酸:水=30: 10: I: 59为流动相；检测波长为286nm;理论板数按丹酚酸B峰计算应不低于2000 ；
[0120]精密称取丹酚酸B对照品适量，加75v%甲醇制成每Iml含丹酚酸B 0.14mg的对照品溶液；
[0121]供试品溶液的制备:取本品40粒，取其内容物，研细，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入75v%甲醇50ml，称定重量，间隙振摇，浸渍过夜，再称定重量，用75v%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，得供试品溶液；
[0122]分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μ 1，注入液相色谱仪，测定，本品每粒含丹酚酸B0.54mgo
[0123]对比实施例1?3和本对比例4可知，常规的间隙振摇浸渍过夜的提取方法与本发明所述的超声提取方法提取含量测定结果基本相当，因此更优选操作更加方便简单、时间最短的超声方法提取。
[0124]对比例5
[0125]考察超声提取时间对丹酚酸B含量测定的影响。
[0126]取同一批次制得的乙肝扶正胶囊，按照实施例1中的实施过程测试，各项均符合国家标准。在丹酚酸B的测试过程中，超声处理(功率120W，频率50KHz)5min、10min、20min、30min，分别取样，按照实施例1中的高效液相色谱条件进行测试。测定丹酚酸B的含量结果分别为本品每粒含丹酚酸B0.49mg、0.53mg、0.54mg、0.54mg。
[0127]由对比例5可知，提取时间为5min时，丹酚酸B的含量较低。当提取时间增长到30min后，丹酚酸B的含量基本不再变化，因此超声提取时间为10?20min为宜，其中提取时间20min时的提取效果以较小的优势处于较佳的效果。
【主权项】
1.一种乙肝扶正胶囊的检测方法，包括薄层色谱定性鉴别、含量测定项目，其特征在于:所述薄层色谱定性鉴别包括对制剂中何首乌的鉴别、虎杖和博落回的鉴别、贯众的鉴另|J、沙苑子和猪屎豆的鉴别；所述含量测定包括对制剂中丹参特征成分丹酚酸B的含量测定; (1)薄层色谱定性鉴别 何首乌的鉴别:以何首乌对照药材为对照品，以体积比氯仿:甲醇:水=19?22: 8?10:1的氯仿-甲醇-水混合液为展开剂，用薄层色谱法鉴别； 虎杖和博落回的鉴别:分别以虎杖对照药材和博落回对照药材为对照品，以体积比氯仿:甲醇=11?15: 3的氯仿-甲醇混合液为展开剂，用薄层色谱法鉴别； 贯众的鉴别:以贯众对照药材为对照品，以体积比氯仿:丙酮:冰醋酸=13?17: 2.5?3.5: 0.5的氯仿-丙酮-冰醋酸混合液为展开剂，用薄层色谱法鉴别； 沙苑子和猪屎豆的鉴别:分别以沙苑子对照药材和猪屎豆对照药材为对照品，以体积比甲醇:水=7?9: 3的甲醇-水混合液为展开剂，用薄层色谱法鉴别； (2)含量测定 丹酚酸B的含量测定:照高效液相色谱法《中国药典》2010年版一部附录VID测定； 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比甲醇:乙腈:甲酸:水=28?32: 9?11:1: 57?61的甲醇-乙腈-甲酸-水混合液为流动相；检测波长为286nm;理论板数按丹酚酸B峰计算应不低于2000 ; 精密称取丹酚酸B对照品适量，加70?80v%甲醇制成对照品溶液； 取本品，取其内容物，研细，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70?80v%甲醇，称定重量，超声处理，取出，放冷，再称定重量，用70?80v%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，得供试品溶液； 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪，测定，本品每粒含丹酚酸B不得少于0.5mgo
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于:所述(I)项下虎杖和博落回薄层色谱定性鉴别的具体步骤为:取本品，取其内容物，置锥形瓶中，加入甲醇，振摇，超声提取，滤过，滤液水浴蒸干，残渣加甲醇使溶解，作为供试品溶液；另取虎杖对照药材，博落回对照药材，按照供试品溶液的制备方法分别制成虎杖对照药材溶液和博落回对照药材溶液；照薄层色谱法《中国药典》2010年版一部附录VI B试验，吸取上述供试品溶液、虎杖对照药材溶液和博落回对照药材溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比氯仿:甲醇=11?15: 3的氯仿-甲醇混合液为展开剂，展开，取出，晾干，置于365nm紫外灯下检视；供试品色谱中，在与虎杖对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，在与博落回对照药材色谱相应的位置上，不得显相同颜色的斑点；
3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于:所述虎杖和博落回薄层色谱定性鉴别中氯仿-甲醇混合液为体积比的氯仿:甲醇=12?14: 3。
4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于:所述(I)项下贯众的薄层色谱定性鉴别的具体步骤为:取本品，取其内容物，置锥形瓶中，加入甲醇，振摇，超声提取，滤过，滤液水浴蒸干，残渣加甲醇使溶解，作为供试品溶液；另取贯众对照药材，按照供试品溶液的制备方法制成对照药材溶液；照薄层色谱法《中国药典》2010年版一部附录VI B试验，吸取上述两种溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比氯仿:丙酮:冰醋酸=13?17: 2.5?3.5: 0.5的氯仿-丙酮-冰醋酸混合液为展开剂，展开，取出，晾干，先喷以8?12被％磷钼酸乙酸溶液，再喷以0.2?0.6wt%氢氧化钠溶液，于日光下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
5.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于:所述贯众的薄层色谱定性鉴别中，氯仿-丙酮-冰醋酸混合液为体积比的氯仿:丙酮:冰醋酸=14?16: 2.5?3: 0.5。
6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于:所述(I)项下沙苑子和猪屎豆的薄层色谱定性鉴别的具体步骤为:取本品，取其内容物，置锥形瓶中，加入沸程为60?90°C的石油醚，间歇性振摇，浸渍过夜，滤过，滤液挥干，残渣加70?80v%乙醇使溶解，作为供试品溶液；另取沙苑子对照药材，猪屎豆对照药材，按照供试品溶液的制备方法分别制成沙苑子对照药材溶液和猪屎豆对照药材溶液；照薄层色谱法《中国药典》2010年版一部附录VI B试验，吸取上述供试品溶液、沙苑子对照药材溶液、猪屎豆对照药材溶液，点于同一聚酰胺薄膜上，以体积比甲醇:水=7?9: 3的甲醇-水混合液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以I?2wt%三氯化铝的乙酸溶液，加热显色，于365nm紫外灯下检视；在供试品色谱中，在与沙苑子对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，在与猪屎豆对照药材色谱相应的位置上，不得显相同颜色的斑点。
7.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于:所述沙苑子和猪屎豆的薄层色谱定性鉴别中甲醇-水混合液为体积比的甲醇:水=7?8: 3。
8.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于:所述(I)项下何首乌的薄层色谱定性鉴别的具体步骤为:取本品，取其内容物，置锥形瓶中，加入甲醇，振摇，超声提取，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇使溶解，作为供试品溶液；另取何首乌对照药材，按照供试品溶液的制备方法制成对照药材溶液；照薄层色谱法《中国药典》2010年版一部附录VI B试验，吸取上述供试品溶液和对照药材溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比氯仿:甲醇:水=19?22: 8?10: I的氯仿-甲醇-水混合液为展开剂，展开，取出，晾干，于365nm紫外灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
9.根据权利要求8所述的检测方法，其特征在于:所述何首乌的薄层色谱定性鉴别中氯仿-甲醇-水混合液为体积比的氯仿:甲醇:水=20?21: 9?10: 1
10.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于:所述(2)项下供试品溶液的制备过程中超声处理的时间为10?20min。
【专利摘要】本发明公开了一种乙肝扶正胶囊的检测方法。该检测方法包括薄层色谱定性鉴别、含量测定项目，所述薄层色谱定性鉴别包括对制剂中何首乌的鉴别、虎杖和博落回的鉴别、贯众的鉴别、沙苑子和猪屎豆的鉴别；所述含量测定包括对制剂中丹参特征成分丹酚酸B的含量测定。本发明所述检测方法不仅有效地控制了乙肝扶正胶囊中博落回和猪屎豆的混入，同时有效地控制了乙肝扶正胶囊的成分和含量，使该药品更加安全、有效。
【IPC分类】G01N30-02, G01N30-06, G01N30-90
【公开号】CN104792917
【申请号】CN201510201278
【发明人】钟茂团, 黎黎, 温国梁, 杨辉, 邹波
【申请人】九寨沟天然药业集团有限责任公司
【公开日】2015年7月22日
【申请日】2015年4月24日