一种麻附甘制剂单酯型生物碱的含量测定方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及药品，具体一种麻附甘制剂附子生物碱的含量测定方法，属药品技术 领域。 技术背景
[0002] 麻附甘制剂是麻黄附子甘草汤方制成制剂的简称，由附子、麻黄、甘草组成，其处 方出于《伤寒论》，具有解表散寒，固本通阳的功效，主治少阴病，恶寒身疼，无汗，微发热，脉 沉微者。
[0003] 现代研宄表明单酯型生物碱（苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌 头原碱）既是其有效成分，也是毒性成分，必须准确的测定其含量，否则无法保证其安全有 效。现公开的测定单酯型生物碱的含量测定方法很多，但都不适合于本麻附甘药物的测定， 无法在生产和使用中有效的保证产品的有效性和安全性。
[0004] 《中国药典》2010年版一部中采用的高效液相色谱法测定附子药材中单酯型和双 酯型生物碱，经过试验发现，该法测定"麻附甘制剂"中单酯型生物碱含量，杂质分离效果不 好，苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱分离度不理想，阴性存在明显 干扰。
[0005] 现有技术乌头总生物碱含量测定方法还有： 酸碱中和法：利用生物碱的碱性，用酸直接滴定或加入定量酸液及指示剂，用氢氧化钠 液回滴定，根据消耗碱液的体积计算出乌头类总生物碱的含量。此方法的优点是简单易行， 不需要很昂贵的仪器设备，容易普及；缺点是操作方法比较麻烦，如果操作的平行性不好， 会使误差较大。
[0006] 酸性染料比色法：利用生物碱和酸性染料(如溴甲酚氯）反应生成的络合物在紫外 光下有吸收，用乌头碱的标准液绘制标准曲线后，根据标准曲线法计算乌头类生物碱的含 量。此方法的优点是灵敏度高、简便、准确快速。缺点是干扰因素多，水相PH值或指示剂配 制、处理均影响呈色稳定性，颜色稳定时间较短，需用对照品绘制标准曲线，且专属性差。
[0007] 导数分光光度法：利用设定不同的求导阶数以清除干扰组分的吸收，直接进行测 定生物碱的含量。量依据。此法的优点是灵敏度很高、准确、简便。缺点是选择性差，达不 到对单酯型生物碱含量控制的要求。
[0008] 薄层扫描法：薄层扫描法准确度高，专属性强，重现性好。缺点是精密度低。
【发明内容】
[0009] 本发明的目的是为了提供一种麻附甘药物单酯型生物碱的含量测定方法，本发明 杂质与附子中单酯型生物碱分离效果好，阴性无干扰，苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原 碱、苯甲酰次乌头原碱分离度均大于1. 5,回收率、重现性、精密度均良好。
[0010] 本发明的目的通过以下技术方案实现： 本发明所述的一种麻附甘制剂单酯型生物碱的含量测定方法，其特征在于：用高效液 相色谱法测定附子中单酯型生物碱含量，其色谱柱以极性乙醚连接苯基键合硅胶为填充 剂。
[0011] 本发明所述的一种麻附甘药物单酯型生物碱的含量测定方法，其特征在于：系统 适用性试验，以乙腈：〇. 05%-0. 2%的磷酸溶液=19 :81至25 :75为流动相，其中磷酸溶液含 0. 02%-0. 06%三乙胺和0. 01%-0. 03%二正丁胺；检测波长为222-242nm，理论板数按苯甲酰 新乌头原碱峰计算应不低于6000 ; 对照品溶液的制备：取苯甲酰新乌头原碱对照品、苯甲酰乌头原碱对照品、苯甲酰次乌 头原碱对照品适量，精密称定，加乙腈制成每1ml分别含20-70 μ g、5-20 μ g、5-20 μ g的混 合溶液，作为对照品贮备液，精密量取对照品储备液用〇. 〇5%-〇. 2%磷酸溶液稀释2-10倍， 摇匀作为对照品溶液； 固相萃取柱系统适用性试验：精密量取对照品贮备液5ml，室温减压回收至干，精密加 入0. lmol/L盐酸50ml使溶解，精密量取10ml，加在固相萃取柱（以混合型阳离子交换反相 吸附剂为填充剂，150_200mg，容量为4-10ml，预先依次用乙腈、水各6ml洗脱)上，依次以水 3ml、1. 25%氨溶液、水、甲醇、乙腈各5ml洗脱，待洗脱液流尽后，放置5分钟，继用乙腈：浓 氨试液=90 :10的混合溶液IOml洗脱，收集洗脱液，于40°C以下减压回收溶剂至干，残渣精 密加入乙腈：〇. 1%的磷酸溶液=20 :80的混合溶液5ml使溶解，滤过，取续滤液作为固相萃 取柱系统适用性试验溶液； 分别精密吸取上述系统适用性试验溶液与对照品溶液各10-30 μ 1，注入液相色谱 仪，测定，计算系统适用性试验溶液与对照品溶液中各相应成分峰面积的比值，不得小于 0. 95 ； 供试品溶液的制备：取检品研细，称取〇.2-2g，置具塞锥形瓶中，精密加入0.1mol/ L盐酸溶液25ml，密塞，称定重量，超声处理10-50分钟并时时振摇，放冷，再称定重量，用 0. lmol/L盐酸溶液补足减失的重量，摇匀，以每分钟2000-6000转离心10-40分钟，滤过，精 密量取续滤液l〇ml，照固相萃取柱系统适用性试验项下的方法，自"加在固相萃取柱上"起， 依法操作，制备供试品溶液； 测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10-30 μ 1，注入液相色谱仪，测定， 即得。
[0012] 本发明所述的一种麻附甘药物单酯型生物碱的含量测定方法，其特征在于：以极 性乙醚连接苯基键合硅胶为填充剂的色谱柱长度为3-25cm，内径为2. 1-21. 2mm，填充剂粒 径为 3-10 μ m。
[0013] 本发明所述的一种麻附甘药物单酯型生物碱的含量测定方法，其特征在于：理论 板数按苯甲酰新乌头原碱峰计算应不低于10000。
[0014] 本发明所述的一种麻附甘药物单酯型生物碱的含量测定方法，其特征在于：供 试品溶液的制备过程中，所用固相萃取柱填料为混合型阳离子交换反相吸附剂，规格为 100-200mg，容积为4-8ml，并预先依次用乙腈、水各6ml洗脱处理。
[0015] 本发明所述的一种麻附甘药物单酯型生物碱的含量测定方法，其特征在于：检品 溶液加在固相萃取柱上后，依次以水3ml、1. 25%氨溶液、水、甲醇、乙腈各5ml洗脱，待洗脱 液流尽后，放置5分钟，继用乙腈：浓氨试液=90 :10的混合溶液IOml洗脱，收集洗脱液。
[0016] 本发明所述的一种麻附甘药物单酯型生物碱的含量测定方法，其特征在于：固相 萃取柱系统适用性试验中试验溶液与对照品溶液中三种单酯型生物碱峰面积的比值不得 小于0. 95。
[0017] 本发明提供了根据特定的处方制备的麻附甘药物中单酯型生物碱的含量测定方 法；本发明与现有技术的区别在于采用了以极性乙醚连接苯基键合硅胶为填充剂的色谱 柱，排除了阴性对单酯型生物碱测定的干扰，相比于以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的 色谱柱，其目标成分分离度、峰形、拖尾因子均有了显著改善，且专属性、准确度、线性、精密 度、耐用性均好。
[0018] 为了更好的理解本发明，以下通过本发明含量测定方法的方法学研宄进一步说明 本发明的有益效果。方法学旨在进一步说明本发明的作用，而非本发明的限制。
[0019] -、制备样品 1、制备麻附甘胶囊剂 取附子20kg，麻黄13. 34kg，甘草13. 34g，加水煎煮二次，第一次加水8倍量，煎煮3小 时，第二次加水6倍量，煎煮2小时，滤过，滤液合并，浓缩成稠膏状，在80°C以下减压干燥， 粉碎，与适量辅料混匀，装入胶囊，得麻附甘药物的胶囊剂。
[0020] 2、制备不含附子的阴性胶囊剂 取麻黄200g