流体技术测定食品中甜蜜素含量的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及食品中添加剂成分检测的技术领域，具体提供一种利用超临界C02流 体技术测定食品中甜蜜素含量的方法。
【背景技术】
[0002] 目前对于食品中常用到的甜味剂一一甜蜜素，常用的分析测定方法均是利用气相 色谱（国标GB/T 5009. 97-2003)和液相色谱质谱联用仪（SN/T 1948-2007)的技术进行分 析和定量，但上述两种技术对甜蜜素进行分析时，存在有如下的缺失：
[0003] 1)利用气相色谱方法进行甜蜜素含量分析时，需要对甜蜜素进行衍生化处理后， 才能在气相或是液相质谱联用仪上进行分析，但因试验过程繁琐、前处理过程的化学反应 不稳定，会衍生出其他的化合物，而此类的非目标性的衍生物会影响最终结果的判定，进而 容易造成数据的不准确性；此外，气相色谱方法需用氮气和氢气作为载气和反应气，而氢气 为易爆气体，对试验室的安全造成不稳定性因素。
[0004] 2)利用液相色谱质谱联用仪进行甜蜜素含量分析时，虽然其分析精确，但是设备 昂贵（200多万人民币），且操作要求高，需专业人员才能操作；而且利用液相色谱质谱联用 仪进行分析时必须用有机试剂甲醇和乙酸作为甜蜜素衍生物的载体，不仅不环保，而且长 期操作会影响操作人员的健康。
[0005] 3)因设备的原理不同，气相色谱只适合用于无极性到弱极性的分析物，液相质谱 联用仪则只适合用于中极性到强极性的分析物，但对于弱极性到中极性范围的分析物，气 相色谱和/或液相质谱联用仪则不能很好适用。因此气相色谱和液相质谱联用仪在弱极性 到中极性范围之间存在有技术缺陷，亟需改进。
【发明内容】
[0006] 为了克服上述缺陷，本发明提供了一种利用超临界C02流体技术测定食品中甜蜜 素含量的方法，该测定方法具有良好的分离度、灵密度、线性、精密度和准确度，能够准确测 定待测食品中甜蜜素的含量。
[0007] 本发明为了解决其技术问题所采用的技术方案是：一种利用超临界0)2流体技术 测定食品中甜蜜素含量的方法，包括以下步骤：
[0008] 步骤1):配制标准溶液，绘制标准溶液曲线；
[0009] 步骤2):从待测食品中提取甜蜜素，并配制样品溶液；
[0010] 步骤3):采用色谱检测器对上述步骤2)中所配制的样品溶液进行检测，并将样品 溶液的测定结果与所述标准溶液曲线进行比对，得到样品溶液中的甜蜜素含量；
[0011] 另所述色谱检测器的检测条件为：所用色谱柱采用：直径3. 0_、柱长100_、填料 粒径I. 8um ;流动相为超临界二氧化碳流体；分析时间不超过3min ;进样量为1~10 μ 1 ;柱 温为40~60°C ;紫外检测波长为220~250nm ;背压为1800~2200psi。
[0012] 作为本发明的进一步改进，所述步骤1)中，配制标准溶液、以及绘制标准溶液曲 线的实现方法为：首先，量取浓度为lOmg/ml的甜蜜素原液5ml，并转移至50ml的容量瓶 中，用超纯水定容，配制成浓度为l〇〇〇mg/L的甜蜜素标准储备液；其次，分别量取所述甜蜜 素标准储备液2ml、4ml、6ml、8ml、IOml并转移至五个100mL的容量瓶中，再分别用超纯水定 容，配制成浓度分别为20mg/L、40mg/L、60mg/L、80mg/L、100mg/L的甜蜜素标准溶液系列； 然后，采用色谱检测器对上述五个甜蜜素标准溶液系列进行检测，得到甜蜜素标准溶液的 五次平行测量结果；最后，以上述五次平行测量结果中的目标峰的峰面积为纵坐标（y)，甜 蜜素标准溶液系列的浓度为横坐标（X)，建立标准曲线。
[0013] 作为本发明的进一步改进，所述步骤2)中，样品溶液的配制方法为：步骤2a)， 利用超纯水对质量为m的待测食品进行甜蜜素的提取处理，得到体积为V 1的上清液；步 骤2b)，在上述上清液中依次加入硫酸溶液、次氯酸钠溶液和正己烷后进行柱前衍生化处 理，弃去下层水层部分，得到衍生化的提取液；步骤2c)，对衍生化的提取液进行中和反应 处理，得到净化后的提取液，即为样品溶液；所述色谱检测器对所述净化后的提取液进行检 测。
[0014] 作为本发明的进一步改进，所述步骤2a)中提取上清液的具体操作方法为：首先， 取质量m为3~6g的待测食品放入50ml的离心管中，再于离心管中加入20ml的超纯水， 超声振动萃取25~45min后，进行离心处理，收集全部上清液I ;然后，再向上述去除上清 液I后的沉淀物中加入IOml的超纯水，超声振动萃取25~45min后，进行离心处理，收集 全部上清液II ;最后，将上清液I和上清液II进行混合，待用。
[0015] 作为本发明的进一步改进，在提取所述上清液的具体操作方法中，两次超声振动 萃取的时间均为30min ;两次离心处理的转速均为4000r/min，且两次离心处理时间均为 IOmin0
[0016] 作为本发明的进一步改进，所述步骤2b)中得到衍生化的提取液的具体操作方法 为：取上清液I和上清液II的混合液于100mL分液漏斗中；再依次加入2ml的硫酸溶液、 Iml的次氯酸钠溶液、以及5ml的正己烷溶液，用力震荡混匀，弃去下层水层，即得到衍生化 的提取液。
[0017] 作为本发明的进一步改进，所述步骤2c)中对衍生化的提取液进行中和反应处理 的具体操作方法为：在所述衍生化的提取液中加入浓度为5%的碳酸氢钠溶液25ml，震荡 混匀后即得到净化后的提取液。
[0018] 作为本发明的进一步改进，所述色谱检测器的检测条件为：分析时间为3min，进 样量为5 μ 1，柱温为50°C，紫外检测波长为230nm，背压为2000psi。
[0019] 作为本发明的进一步改进，还包括步骤4):通过以下公式计算得到待测食品中的 甜蜜素含量：（甜蜜素的质量浓度*^/111。
[0020] 本发明的有益效果是：本发明所提供的利用超临界CO2流体技术测定食品中甜蜜 素含量的方法具有如下优点：①本发明通过对色谱检测器的测定条件进行改进，采用超临 界CO 2流体为流动相，并配以优化其它测定参数，从而使本发明测定方法具有良好的分离 度、灵密度、线性、精密度和准确度，能够准确的测定待测食品中的甜蜜素含量；②相较于传 统气相色谱仪和液相色谱质谱联用仪，本发明所用的色谱检测器采用超临界〇) 2流体为流 动相，不仅环保，又不会对操作人员的健康及人身安全造成影响；③相较于传统气相色谱的 分析物出峰时间需要4min左右，液相色谱质谱联用仪的分析物出峰时间需要5min左右，本 发明测定方法的分析物出峰时间只需要I. 2min，分析非常的快，提高了检测效率。
【附图说明】
[0021] 图1为采用本发明测定方法来检测得到的甜蜜素标准溶液的标准曲线图；
[0022] 图2为本发明实施例2中鸡肉粉样品中甜蜜素的色谱图；
[0023] 图3为图2中鸡肉粉样品在1. 153分钟时出的色谱峰的光谱图；
[0024] 图4为本发明实施例3中辣椒粉样品中甜蜜素的色谱图；
[0025] 图5为图4中辣椒粉样品在1. 156分钟时出的色谱峰的光谱图；