，甘草200g，照制备麻附甘胶囊剂的方法制成不含附子的阴性胶囊剂。
[0021] 二、药典法和本发明法含量测定适用性比较 《中国药典》2010年版第二增补本附桂骨痛胶囊项下附子单酯型生物碱含量测定法（以 下简称"药典法"）与本发明附子单酯型生物碱含量测定法，用于麻附甘胶囊剂附子单酯型 生物碱含量测定的适用性比较。
[0022] 1. "药典法"测定麻附甘胶囊剂单酯型生物碱含量适用性试验 色谱条件：以十八烷基键合硅胶为填充剂的色谱柱（DIKMA，C18, 250 X 4. 6mm，5 μ m，新 柱，以下简称"C18"）；以乙腈：0. 1%磷酸溶液（22 :78)为流动相；检测波长为232nm。理论 板数按苯甲酰新乌头原碱峰计算应不低于10000。
[0023] 对照品溶液的制备：取苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱对 照品适量，精密称定，加乙腈制成每1ml各含50 μ g的混合溶液，作为对照品贮备液。精密 量取对照品储备液5ml，置25ml量瓶中，加0. 1%磷酸溶液稀释至刻度，摇匀，即得。
[0024] 供试品溶液的制备：取胶囊剂10粒，倾出内容物，混匀，精密称取0. 5001g，置具塞 锥形瓶中，精密加入〇. lmol/L盐酸溶液25ml，密塞，称定重量，超声处理40分钟并时时振 摇，放冷，再称定重量，用0. lmol/L盐酸溶液补足减失的重量，摇匀，离心（转速为每分钟 4000转）30分钟，滤过，精密量取续滤液10ml，置于处理好的固相萃取柱（以混合型阳离子 交换反相吸附为填充剂的固相萃取柱，150mg，6ml，用前依次用乙腈、水各6ml洗脱）上，依 次以水3ml、氨水溶液（5 - 100)、水、甲醇、乙腈各5ml洗脱，弃去洗脱液，放置5分钟，继用 乙腈：浓氨试液（90 :10)的混合溶液IOml洗脱，洗脱液于40°C以下减压回收溶剂至干，残 渣精密加入乙腈：〇. 1%的磷酸溶液（20 :80)的混合溶液5ml使溶解，滤过，取续滤液，即得。
[0025] 阴性溶液的制备：取阴性制剂同法操作。
[0026] 测定法：分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液与阴性溶液各20 μ 1，注入液相色 谱仪，测定，即得。
[0027] 表1 "药典法"系统适用性与专属性试验结果
【主权项】
1. 一种麻附甘药物单酯型生物碱的含量测定方法，其特征在于：用高效液相色谱法测 定附子中单酯型生物碱含量，其色谱柱以极性乙醚连接苯基键合硅胶为填充剂。
2. 根据权利要求1的一种麻附甘药物单酯型生物碱的含量测定方法，其特征在于：采 用高效液相色谱法测定，系统适用性试验，以乙腈：〇. 05%_0. 2%的磷酸溶液=18 :82至25 : 75为流动相，其中0. 05%-0. 2%的磷酸溶液含0. 02%-0. 06%三乙胺和0. 01%-0. 03%二正丁 胺，检测波长为222-242nm，理论板数按苯甲酰新乌头原碱峰计算应不低于6000 ; 对照品溶液的制备：取苯甲酰新乌头原碱对照品、苯甲酰乌头原碱对照品、苯甲酰次乌 头原碱对照品适量，精密称定，加乙腈制成每Iml分别含20-70yg、5-20yg、5-20yg的混 合溶液，作为对照品贮备液，精密量取对照品储备液用〇. 〇5%-〇. 2%磷酸溶液稀释2-10倍， 摇匀作为对照品溶液； 固相萃取柱系统适用性试验：精密量取对照品贮备液5ml，室温减压回收至干，精密加 入0.lmol/L盐酸50ml使溶解，精密量取10ml，加在固相萃取柱上，以混合型阳离子交换反 相吸附剂为填充剂，150_200mg，容量为4-10ml，预先依次用乙腈、水各6ml洗脱，依次以水 3ml、1. 25%氨溶液、水、甲醇、乙腈各5ml洗脱，待洗脱液流尽后，放置5分钟，继用乙腈：浓 氨试液=90 :10的混合溶液IOml洗脱，收集洗脱液，于40°C以下减压回收溶剂至干，残渣精 密加入乙腈：〇. 1%的磷酸溶液=20 :80的混合溶液5ml使溶解，滤过，取续滤液作为固相萃 取柱系统适用性试验溶液； 分别精密吸取上述系统适用性试验溶液与对照品溶液各10-30yl，注入液相色谱 仪，测定，计算系统适用性试验溶液与对照品溶液中各相应成分峰面积的比值，不得小于 0. 95 ； 供试品溶液的制备：取检品，称取〇. 2-2g，置具塞锥形瓶中，精密加入0.lmol/L盐酸溶 液25ml，密塞，称定重量，超声处理10-50分钟并时时振摇，放冷，再称定重量，用0.lmol/L 盐酸溶液补足减失的重量，摇匀，以每分钟2000-6000转离心10-40分钟，滤过，精密量取续 滤液l〇ml，照固相萃取柱系统适用性试验项下的方法，自"加在固相萃取柱上"起，依法操 作，制备供试品溶液； 测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10-30y1，注入液相色谱仪，测定， 即得。
3. 根据权利要求1或权利要求2的一种麻附甘药物单酯型生物碱的含量测定方法， 其特征在于：以极性乙醚连接苯基键合硅胶为填充剂的色谱柱长度为3-25cm，内径为 2.l-10mm，填充剂粒径为3-10ym。
4. 根据权利要求1或权利要求2的一种麻附甘药物单酯型生物碱的含量测定方法，其 特征在于：流动相有机相为乙腈，水相为0. 05%-0. 2%的磷酸溶液，水相中含0. 02%-0. 06%三 乙胺和0. 01%-0. 03%二正丁胺，有机相与水相比例为18 :82-25 :75的流动相。
5. 根据权利要求1或权利要求2的一种麻附甘药物单酯型生物碱的含量测定方法，其 特征在于：理论板数按苯甲酰新乌头原碱峰计算应不低于10000。
6. 根据权利要求1或权利要求2的一种麻附甘药物单酯型生物碱的含量测定方法，其 特征在于：所用固相萃取小柱填料为混合型阳离子交换反相吸附剂，规格为100-200mg，容 积为4_8ml，并预先依次用乙腈、水各6ml洗脱处理。
7. 根据权利要求1或权利要求2的一种麻附甘药物单酯型生物碱的含量测定方法， 其特征在于：检品溶液加在固相萃取柱上后，依次以水3ml、I. 25%氨溶液、水、甲醇、乙腈各 5ml洗脱，待洗脱液流尽后，放置5分钟，继用乙腈：浓氨试液=90 :10的混合溶液IOml洗脱， 收集洗脱液。
8.根据权利要求1或权利要求2的一种麻附甘药物单酯型生物碱的含量测定方法，其 特征在于：固相萃取柱系统适用性试验中试验溶液与对照品溶液中三种单酯型生物碱峰面 积的比值不得小于〇. 95。
【专利摘要】本发明提供了一种麻附甘药物单酯型生物碱的含量测定方法，采用高效液相色谱法测定，使用极性乙醚连接苯基键合硅胶为填充剂的色谱柱，以乙腈﹕0.05%-0.2%的磷酸溶液（19：81至25：75）为流动相，其中磷酸溶液含有0.02%-0.06%三乙胺和0.01%-0.03%二正丁胺，检测波长为222-242nm，理论板数按苯甲酰新乌头原碱峰计算应不低于6000，其目标成分分离度、峰形、拖尾因子均有了显著改善，且专属性、线性、准确度、精密度、耐用性均好。
【IPC分类】G01N30-88
【公开号】CN104792912
【申请号】CN201510241514
【发明人】刘金磊, 石红艳, 张为胜, 李诗标, 赵颖
【申请人】济南康众医药科技开发有限公司
【公开日】2015年7月22日
【申请日】2015年5月13日