一种治疗急性痛风性关节炎、痛风的中药制剂的检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种治疗急性痛风性关节炎、痛风的中药制剂（商品名为痛风舒缓胶 囊）的检测方法。
【背景技术】
[0002] 痛风，由于鸟嘌呤代谢紊乱和尿酸排泄减少，使尿酸含量持续升高而引起尿酸盐 沉积在关节部位，在外界刺激性发生炎症反应，损害组织而产生的临床综合症。其临床症状 主要是关节部位红、热、肿、痛，金元年代中医对"痛风"就有了认识，强调痛风疾病的病因是 风寒湿邪气外袭，而对痛风现代中医基于前人的认识，有很多的不同的解释原因，综合上述 原因，笔者认为痛风患者多有机体先天不足，脾肾乏虚，后天不良的饮食，食肥甘厚，以致湿 热内积，易受风邪外袭，内外交加，湿热风邪，滞留于关节，易血脉不通，最后发展为痛风病。 痛风最初的临床症状是急性痛风性关节炎，其表现是夜间突然发作的急性单个关节或多关 节疼痛。成积在关节部位的尿酸钠结晶是急性痛风性关节炎的病原。由于一些原因，如鸟 嘌呤代谢紊乱和尿酸排泄减少等，使血中尿酸的含量偏高，在一些关节及关节周围组织中， 由于该部位血管少，易缺氧，易增加乳酸的生成而降低了关节部位的PH，而且关节部位的基 质中含较多的结缔组织及黏多糖酸，因此尿酸盐较容易在关节部位沉积。尿酸钠盐结晶成 积在关节部位后，在外界条件影响下，如寒冷、饮酒等，刺激肥大细胞脱颗粒和巨噬细胞激 活增多，释放细胞因子和趋化因子，激活中性粒细胞释放超氧化酶，释放更多的粘附分子， 也释放大量的细胞因子和趋化因子，等等引起非特异性的炎症反应而损害关节部位。血尿 酸值突然的升高或降低，都会引起炎症反应。因为血尿酸值迅速的升高使尿酸结晶沉积在 关节部位；而快速的降低，使沉积在关节部位尿酸盐溶解。
[0003] 中医领域对痛风治疗有独特的一面，我公司2010年06月22日公开了公开号 CN101926896A的专利，提供了一种治疗痛风的中药制剂及其制备方法，该中药制剂由金钱 草30份、威灵仙15份、石楠藤10份、追风伞15份、北刘寄奴15份、泽泻12份和车前草10 份制成药剂学上任一种剂型，有明显的抗炎作用和镇痛作用，对急性痛风性关节炎及痛风 发作间期的各种病症有良好的治疗效果，且不易复发，无明显毒副作用和不良反应。
[0004] 本发明现对该中药制剂提供一种检测方法，该检测方法稳定可靠，能有效确保产 品质量。
【发明内容】
[0005] 为解决现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种治疗急性痛风性关节炎、痛 风的中药制剂的检测方法，本发明检测方法简单方便且稳定可靠，可以有效地检测金钱草、 威灵仙、泽泻等多种有效物质，有效确保产品质量。
[0006] 为了实现上述目标，本发明采用如下的技术方案：一种治疗急性痛风性关节炎、痛 风的中药制剂的检测方法，所述检测方法包括鉴别和/或含量的测定项目；其中鉴别是对 金钱草、威灵仙和/或泽泻的薄层色谱鉴别；含量测定是用高效液相色谱法测定制剂中金 钱草的含量。
[0007] 上述的治疗急性痛风性关节炎、痛风的中药制剂的检测方法中，金钱草的鉴别方 法具体为：取3~4g生药粉的该中药制剂，加80%甲醇30~50ml，加热回流0. 5~1小 时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水8~10ml使溶解，用乙醚振药提取2~4次，每次10~ 30ml，弃去乙醚液，水液加稀盐酸8~10ml，置水浴中加热0. 5~1小时，取出，迅速冷却， 用乙酸乙酯振摇提取2~4次，每次20~30ml，合并乙酸乙酯，用水30~50ml洗涤，弃去 水液，乙酸乙酯液蒸干，残渣加甲醇1~2ml使溶解，作为供试品溶液；另取金钱草对照药 材0. 5~1. 5g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法（附录VIB)试验，吸取供试品溶液 3~4y1、对照品溶液3~4y1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸 =10~8 :8~6 :1~0. 5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%三氯化铝乙醇溶液，在105°C 加热数分钟，置365nm的紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材相应位置上，显相 同颜色的焚光斑点。
[0008] 前述的治疗急性痛风性关节炎、痛风的中药制剂的检测方法中，威灵仙的鉴别方 法具体为：取2~3g生药粉的该药中药制剂，加乙醇30~50ml，加热回流1~2小时，滤过， 滤液浓缩至15~20ml，加盐酸3~6ml，加热回流0. 5~1小时，加水8~10ml，放冷，加入 60~90°C石油醚15~25ml振摇提取3~4次，每次20~25ml，石油醚蒸干，残渣用无水 乙醇7~10ml溶解，作为供试品溶液；另取齐墩果酸对照品，加无水乙醇制成lml含0. 45mg 的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法（附录VIB)试验，吸取供试品溶液7~8y1、对 照品溶液2~3y1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸=20~17 : 3~1. 5 :0. 2~0. 1为展开剂，薄层板置展开缸中预饱和5~10分钟，展开，取出，瞭干，喷 以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应 的位置上，显相同颜色的斑点。
[0009] 前述的治疗急性痛风性关节炎、痛风的中药制剂的检测方法中，泽泻的鉴别方法 具体为：取8~10g生药粉的该药中药制剂，加乙醇40~50ml，搅匀，超声处理70~90分 钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水40~50ml使溶解，滤去不容物，滤液用60~90°C的石油醚振 摇提取3~4次，每次40~50ml，合并石油醚液，蒸干，残渣加60~90°C的石油醚lml使 溶解，作为供试品溶液；另取泽泻对照药材1. 5~2g，加水40~50ml，加热回流30分钟，放 冷，用脱脂棉滤过，滤液用石油醚振摇提取3~4次，每次30~50ml(必要时离心），合并 石油醚提取液，蒸干，残渣加60~90°C的石油醚0. 5~lml使溶解，作为对照药材溶液；照 薄层色谱法（附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各9~12y1，分别点于同一硅胶G薄层 板上，以60~90°C的石油醚-三氯甲烷-乙酸乙酯=2~1 :1~0. 5 :2~1为展开剂，展 开，取出，晾干，喷以5%磷钼酸乙醇溶液，在110°C加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在 与对照药材相应位置上，显相同颜色的斑点。
[0010] 前述的治疗急性痛风性关节炎、痛风的中药制剂的检测方法中，金钱草含量测定 方法是以山奈素对照品为对照，以甲醇-0. 4%磷酸溶液=50 :50为流动相为流动相的高效 液相色谱法。
[0011] 前述的治疗急性痛风性关节炎、痛风的中药制剂的检测方法中，金钱草的含量测 定方法具体为：
[0012] 金钱草中山奈素的含量测定：
[0013] 色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-o. 4% 磷酸溶液=50 :50为流动相；检测波长为360nm;板数按山奈素计算不低于2500 ;
[0014] 对照品溶液的制备；取山奈素对照品适量，精密称定，加80%甲醇制成每1ml含山 奈素20yg的溶液，即得；
[0015] 供试品溶液的制备；取相当于1. 5g生药粉的该药中药制剂，精密称定，置具塞锥 形瓶中，精密加入80%甲醇50ml，密塞，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用 80 %甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过；精密量取续滤液25ml，精密加入盐酸5ml，置90°C水 浴中加热水解1小时，取出，迅速冷却，转移至50ml量瓶中，用80%甲醇稀释至刻度，摇匀， 滤过，取续滤液，即得；
[0016] 测定法；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10iil，注入液相色谱仪，测 定，即得。
[0017] 前述的治疗急性痛风性关节炎、痛风的中药制剂的检测方法中，该中药制剂按重 量份由金钱草1~30份、威灵仙1~20份、石楠藤1~20份、追风伞1~20份、北刘寄奴 1~20份、泽泻1~20份和车前草1~10份为原料药制成的。
[0018] 前述的治疗急性痛风性关节炎、痛风的中药制剂的检测方法中，该中药制剂按重 量份由金钱草30份、威灵仙15份、石楠藤10份、追风伞15份、北刘寄奴15份、泽泻12份 和车前草10份制成。
[0019] 前述的治疗急性痛风性关节炎、痛风的中药制剂的检测方法中，取金钱草用75% 乙醇回流提取，滤过，回收乙醇并浓缩至适量，得药渣和醇溶液，将药渣与威灵仙、石楠藤、 追风伞、北刘寄奴、泽泻和车前草，加水煎煮三次，滤过，滤液与醇溶液合并，减压浓缩成稠 膏，干燥，粉碎，过筛，与辅料混合，过筛，混匀，装入胶囊，制成1〇〇〇粒，即得。
[0020] 前述的治疗急性痛风性关节炎、痛风的中药制剂的检测方法中，所述的中药制剂 可制备成任何一种常规制剂，包括片剂、丸剂、胶囊剂、冲剂、口服液、喷雾剂、注射剂、混悬 液、微球制剂
[0021] 为了确保本发明检测方法科学、合理、可行，对本发明的检测方法进行了研究和考 察。
[0022] 一、金钱草的含量测定方法学考察：
[0023] 金钱草为痛风舒缓胶囊（本发明制剂）中的君药，山奈素是其主要有效成分，故选 择以山奈素作为本制剂内在质量的指标成分，采用酸水解进行前处理样品，采用高效液相 色谱法进行样品测定，经试验，结果表明，该方法操作简单，成本低，检验时间短，同时具有 分离效果好、灵敏、准确等优点。
[0024] 1、仪器、试剂和样品
[0025]AgilentTechnologies1200series高效液相色谱仪，KQ-250DB型数控超声波清 洗器（昆山市超声仪器有限公司），十万分之一电子天平（梅特勒-托利多仪器（上海） 有限公司），甲醇（分析纯20130411，上海申博化工有限公司），HC1(分析纯20140328， 上海申博化工有限公司），乙腈（色谱纯20140721，上海申博化工有限公司），磷酸（分析 纯20140421，上海申博化工有限公司），山奈素对照品（中国药品生物制品检定所，供含量 测定用，编号为112542-201405)，其他均为分析纯。痛风舒缓胶囊（20140304、20140201、 20140202、20140401、20140402、20140403、20140404、20140405、20140501、20140502、 20140503,本发明制剂，由贵州百灵制药股份有限公司提供）。
[0026]2、色谱条件与系统适应性试验
[0027] 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇_0. 4%磷酸溶液（50 :50)为流动相； 检测波长为360nm。理论板数按山奈素计算不低于2500。
[0028] 3、对照品溶液的制备
[0029] 取山奈素对照品适量，精密称定，加80%甲醇制成每1ml含山奈素20yg的溶液， 即得。
[0030] 4、供试品溶液的制备
[0031] 取本品内容物约1.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入80%甲醇50ml，密 塞，称定重量，加热