H左 右时，可实现令人惊奇地有效的结果。
[0095] 在一些实施例中，粒子造影剂组合物210包含一种或多种糖和/或糖醇，或者其他 膜稳定剂。溶液中的糖和糖醇可有助于保存细胞/细胞膜。合适的糖的例子包括海藻糖、 麦芽糖、蔗糖、甘油、麦芽酮糖、异麦芽糖、纤维二糖、乳果糖、龙胆二糖（gentiobulose)、蜜 二糖、甘露二糖、帕拉金糖、曲二糖、黑曲霉糖、槐糖、甘露糖醇、山梨醇、木糖醇、肌醇、鼠李 糖醇、海藻糖醇、核糖醇、苏糖醇、赤藓糖醇和山梨醇。具体而言，已发现糖海藻糖可抑制皂 苷引起的溶血现象。粒子造影剂组合物210可包括足以在染色条件下导致约5至约200mM 之间的浓度的量的海藻糖。海藻糖可以以足以在染色条件下导致约10至约IOOmM之间的 浓度的量包括在内。海藻糖可以以足以在染色条件下导致约67. 7mM的浓度的量包括在内。 海藻糖是蛋白质和膜二者的稳定剂并且可用于在干燥、加热、冷冻和/或酶促组织崩解的 极端条件下维持细胞完整性。
[0096] 在一些实施例中，粒子造影剂组合物210包含一种或多种蛋白质稳定剂或对抗脲 的去稳定化效果的其他相容溶质。合适的蛋白质稳定剂的例子包括甲胺和氨基酸蛋白质稳 定剂、三甲胺N-氧化物（TMAO)、三甲胺、甘油磷酰胆碱、甜菜碱、甘氨酸-甜菜碱、哌可酸甜 菜碱、肌氨酸、N-氨甲酰基-L-谷氨酰胺-I-酰胺、N-乙酰基谷氨酰胺酰基-谷氨酰胺氨基 化合物、牛磺酸、二甲基牛磺酸、亚牛磺酸、N-甲基牛磺酸、硫代牛磺酸、章鱼碱、精氨酸、甘 氨酸、二甲基甘氨酸、N-三甲基甘氨酸、ecotoine、脯氨酸、脯氨酸-甜菜碱、β -丙氨酸、谷 氨酸、谷氨酸-甜菜碱、N-乙酰基-β -赖氨酸、胆碱-〇-硫酸酯、GABA、龙虾肌碱和二甲基 疏基丙酸（dimethylsulfonoproprionate)。在一个实施例中，相容溶质策略可用于增加尿 液样品中细胞的染色强度而同时使细胞蛋白质稳定。三甲基胺N-氧化物（TMO)可抵消由 脲和尿液中存在的氯化钠引起的蛋白质增溶作用（去稳定化作用）。以一份TMO对两份蛋 白质去稳定剂的比率，TMO可平衡蛋白质去稳定剂的效果。在一些实施例中，粒子造影剂 组合物210可包括足以在染色条件下导致约5mM至约200mM之间的浓度的量的ΤΜΑ0。
[0097] 在一些实施例中，粒子造影剂组合物210可包括用于调节pH的缓冲剂。缓冲剂还 可包括合适的粘度剂/粘度调节剂、固定剂、离子强度调节剂、表面活性剂和去垢剂。
[0098] 在一些实施例中，粒子造影剂组合物210可包括粘度调节剂。在一些实施例中，粘 度调节剂可以是甘油。取决于具体样品的所需特性和所用的分析仪，甘油的百分比可以变 化。粘度调节剂的例子可包括PVP、天然的水胶体（及衍生物），例如角叉菜胶、刺槐豆胶、 瓜耳胶和明胶；糖（及衍生物），例如葡萄糖、果糖；聚葡萄糖；葡聚糖；多聚葡聚糖；糖；和 多糖；半合成水胶体（及衍生物），例如甲基纤维素、羧甲基纤维素；合成的水胶体（及衍生 物），例如CarbopoΓ;等等。
[0099] 怏谏的一步染色法
[0100] 图3为根据一个实施例的快速一步染色法300的流程图。虽然该快速一步染色法 300可含有数个子步骤，但术语"一步"用于确定在该染色程序过程中不需要将样品引入至 多种不同的溶液。粒子造影剂组合物210在方框302中制备，如上文参照图2所述的。任 选地，在一些实施例中，可在方框306处纯化组分（例如任何粒子造影剂202)。纯化粒子造 影剂202可减少在与样品接触时形成的沉淀物水平，从而减少背景并改善基于图像的尿液 样品分析的结果，减少对图像或湿法安装或手动准备的显微镜镜检进一步观察的需要。
[0101] 在方框308处，将粒子造影剂组合物210与样品合并。可以将粒子造影剂组合物 210与样品以任何合适的方式（包括混合在一起）合并。方框308处的合并可包括用一定 量的粒子造影剂组合物210稀释样品。样品可用粒子造影剂组合物210稀释。可选择稀释 液的量以在基于图像的分析过程中每帧提供最佳数目的细胞。
[0102] 通过不懈的努力和实验，已经发现，当与样品合并使粒子造影剂组合物210在所 得的样品混合物中的浓度高达20% (v/v)时，则可在粒子造影剂组合物210的一些实施例 中实现令人惊奇地有效的结果。粒子造影剂组合物210在所得的样品混合物中的百分比可 以是约 1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、 17%、18%、19%或约20% (v/v)。可通过将粒子造影剂组合物210与样品以粒子造影剂组 合物210在所得的样品混合物中的百分比为15% (即85%的样品）相混合来实现令人惊 奇地有效的结果。
[0103] 通过不懈的努力和实验，已经发现，当经配制而以15%或低于15%的百分比与尿 液样品混合时可在粒子造影剂组合物210的一些实施例中实现令人惊奇地有效的结果。以 低的稀释度染色可使基于图像的尿液样品分析系统十分有效。
[0104] 在一些实施例中，将样品与粒子造影剂组合物210在升高的温度（例如下文结合 温育所述的任何温度）下相混合。
[0105] 在某些实施例中，可在与粒子造影剂组合物210合并之前制备或处理（如浓缩、稀 释）样品。
[0106] 如本文所用，合并的样品和粒子造影剂组合物210称为样品混合物。
[0107] 在方框310处，将样品混合物在某个温度下温育一定量的时间。温育可增加细胞 或其内部结构的通透性，从而允许粒子造影剂202更好地渗入细胞或细胞结构。可选择温 育的时间和温度以使得粒子造影剂组合物210能恰当地对样品进行渗透、固定和染色。
[0108] 在一个实施例中，粒子造影剂组合物210可包括表面活性剂并且温育期间高温加 热可用于实现膜的透化以保持RBC的完整性以及仍以所需的分辨率实现WBC、上皮细胞和 细菌的染色功效。
[0109] 通过不懈的努力和实验，已经发现，通过将样品混合物在约40°C至约50°C之间的 温度下温育约1至90秒可在粒子造影剂组合物210的一些实施例中实现令人惊奇地有效 的结果。可将样品混合物加热至约41°C至约44°C之间的温度。可将样品混合物温育1至 60秒。可将样品混合物温育30至35秒。可将样品混合物温育少于30秒。在一些实施例 中，可通过将样品混合物在约42°C至约43°C之间温育约30秒来实现令人惊奇地有效的结 果。
[0110] 在一些实施例中，在方框308处的合并以及在方框310处的温育以大概与在成像 设备中对样品混合物进行处理以及对成像设备的线路进行冲洗和/或清洁所耗费的时间 相同的时间量或以更少的时间完成。以该方式，可在第二样品混合物在合并和温育的同时 对第一样品混合物进行成像。一旦已对第一样品混合物进行了成像并且已经清洁了该成像 设备，就可立即对第二样品混合物进行成像。
[0111] 在备选的实施例中，在方框308处的合并以及在方框310处的温育以少于在成像 设备中对样品混合物进行处理以及对成像设备的线路进行冲洗和/或清洁所耗费的时间 的两倍时间内完成。以该方式，在第一样品混合物正在成像的同时，第二样品混合物可准备 用于成像，并且第三样品混合物和第四样品混合物可处于正被合并和温育的过程中。一旦 已对第一样品混合物进行了成像并且已经清洁了该成像设备，就可立即对第二样品混合物 进行成像。第三样品混合物可正完成其合并和温育并且第四样品混合物可仍正在合并和温 育。一旦已对第二样品混合物进行了成像并且已经清洁了成像设备，就可立刻对第三样品 混合物进行成像，同时第四样品混合物开始完成合并和温育并且第五样品混合物开始合并 和温育。该过程可无限地继续以持续对样品混合物进行成像。
[0112] 通过不懈的努力和实验，已经发现，可通过粒子造影剂组合物210的某些实施例、 将粒子造影剂组合物210与样品合并的某些方式以及温育该样品混合物的某些方式的组 合实现令人惊奇地有效的结果。
[0113] 具体而言，通过使用包括80%纯度或更高纯度的结晶紫（在染色条件下为约 0· 57mM)、23. 3重量％的5PD-Lytic和0· 05%的Proclin 300的粒子造影剂组合物210可 实现令人惊奇地有效的结果；其中将粒子造影剂210与样品合并，从而导致以样品混合物 的重量计该粒子造影剂组合物的浓度为约15%至约20% ;并且其中将所得的混合物在约 40°C至约50°C下温育约30至35秒。
[0114] 某些有效的粒子造影剂组合物210和染色程序使得能以相对较高的尿液/试剂比 对样品进行快速染色。某些有效的粒子造影剂组合物210和染色程序使得能对样品进行快 速染色，使得各种细胞组分、核叶和颗粒结构可清晰地辨别。某些有效的粒子造影剂组合物 210和染色程序适合于体外活体染色。某些有效的粒子造影剂组合物210和染色程序生成 视觉区别供进行粒子分类和亚分类。某些有效的粒子造影剂组合物210和染色程序能有效 用于增强血清、脑脊液、胸膜液、滑液、精液、腹膜液、羊水、洗出液、骨髓抽出液、流出液、渗 出液或血液样品中的粒子的细胞内内容物特征。某些有效的粒子造影剂组合物210和染色 程序可有效用于对嗜中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、血小 板、织网红细胞、有核红细胞、胚细胞、前髓细胞、隋细胞、晚幼粒细胞、管型、细菌、上皮细胞 和/或寄生生物进行染色。某些有效的粒子造影剂组合物210和染色程序能有效用于生成 视觉区别供进行粒子分类和亚分类，例如，通过提供对细胞中的初级和次级颗粒的差异染 色，如能有效用于基于初级和次级颗粒的差异染色或增强来帮助对未成熟粒细胞进行亚分 类以及确定它们的年龄。某些有效的粒子造影剂组合物210和染色程序能有效用于生成 视觉区别以供对白血细胞、上皮细胞和/或细菌进行计数和表征，包括对白血细胞的分类 和亚分类。可促进有形成分识别。某些有效的粒子造影剂组合物210和染色程序能有效用 于在有活力的和/或活的细胞和/或具有基本保持完整的结构的细胞中生成视觉区别。某 些有效的粒子造影剂组合物210和染色程序可有效用于对细菌、寄生生物或毛滴虫进行染 色。某些有效的粒子造影剂组合物210和染色程序能有效用于识别、预测、诊断、预后和/或 支持病症、疾病、感染和/或综合征的诊断和/或监测受试者是能响应还是不能响应治疗。 某些有效的粒子造影剂组合物210和染色程序可有效用于对尿液管型中的细胞和/或细胞 成分内含物进行染色，这可有助于管型的亚分类。
[0115] 本文所述的某些有效的粒子造影剂组合物210和染色程序推动的快速染色可与 手动或半自动成像和/或分析程序一起使用。
[0116] 通过不懈的努力和实验，已经发现，当使用由如表1中所列构成的粒子造影剂组 合物210时可实现令人惊奇地有效的结果。
[0117] 表 1
[0118]
[0119] 图4为所选择的来自尿液样品的粒子的代表性示例，该样品用表1所列的粒子造 影剂组合物210染色并且用上文所述的快速一步染色程序染色，具体而言通过将300微升 表1中所列的粒子造影剂组合物210吸移进试管中并与I. 7mL尿液样品混合，之后使该样 品混合物在60°C的水浴中升温30秒进行染色。红血细胞、白血细胞、鳞状上皮细胞、管型、 晶体和酵母是可通过视觉区分的。
[0120] 通过不懈的努力和实验，已经发现，当使用由如表2中所列构成的粒子造影剂组 合物210时可实现令人惊奇地有效的结果。
[0121] 表 2
[0122]
[0123]
[0124] 通过不懈的努力和实验，已经发现，当使用由如表3中所列构成的粒子造影剂组 合物210时可实现令人惊奇地有效的结果。
[0125] 表 3
[0126]
[0127] 通过不懈的努力^实验，已经发现/当使用由如表4 ￥所列构成的粒子造影剂组 合物210时可实现令人惊奇地有效的结果。
[0128] 表 4
[0129]
[0130] 在一些实施例中，由本发明的粒子造影剂组合物染色的成像细胞的特征在表5中