一种检测中成药中掺杂化学药品的方法
【技术领域】
[0001]本发明属于药品检测领域，具体涉及一种采用以甘油溶液为溶剂的金属纳米溶胶及其表面增强拉曼光谱检测方法进行中成药中掺杂化学药品的检测方法。
【背景技术】
[0002]中成药中掺杂化学药品的现象由来已久，且有愈演愈烈之势。由于掺入的化学药品的种类、数量、毒性等信息不为人所知，该药物的安全性根本无法保证，严重危害人民健康，且扰乱了药品市场的正当有序竞争，最终将影响到中药产业的可持续发展。
[0003]表面增强拉曼光谱法是近年来新兴的一种快速检测技术，具有灵敏度高、特征性强、检测时间短等优点。目前其与薄层色谱法联用的技术已应用于一些复杂体系的分离和检测，如水环境中的污染物，生物尿样中的代谢产物，中成药中违法添加的化学药物等。
[0004]—般情况下，大多不法药厂为了使中成药快速达到明显的治疗效果，常常向其中违法添加化学药物且含量较高(大于1% )。这些中成药通常通过简单地萃取分离即能检测得到违法添加药物的较强的表面增强拉曼光谱，因此很容易通过便携式拉曼光谱仪对其进行快速检测，从而判定其是否掺假。
[0005]但是随着掺伪技术不断提高，一些厂家通过降低掺假化药含量和增加掺假化药种类试图规避药监部门的检测。现有技术中常采用以水为溶剂的金属纳米溶胶作为表面增强剂，但将该表面增强剂滴加在薄板上时，其中的水分会快速挥发，导致其所包裹的金属粒子失去保护层而迅速被氧化，致使薄层板上检测待测物的表面增强拉曼散射(SERS)信号只能维持十几秒，难以得到持久的SERS信号，不利于实际检测。如，当掺杂化学药品的含量低于1%时，采用以水为溶剂的金属纳米溶胶作为表面增强剂，只能采集少数几个动态拉曼光谱，测试误差很大，结果难以令人信服，甚至无法实现检测。因此，直接用之前的表面增强拉曼光谱法时常难以检测到掺假药物。
【发明内容】
[0006]本发明是为解决上述问题而进行的，采用表面增强拉曼光谱与薄层色谱法联用的技术检测中成药中掺杂化学药品，将以甘油溶液为溶剂的纳米金属溶胶取代常用的以水为溶剂的纳米金属溶胶，进一步提高SERS信号的灵敏度和稳定性。采用了如下技术方案:
[0007]本发明提供了一种检测中成药中掺杂化学药品的方法，采用表面增强拉曼光谱和薄层色谱联用的方法进行检测，根据薄层斑点的比移值以及动态表面增强拉曼光谱来判定所掺杂化学药品的成分，包括以下步骤:
[0008]步骤一，标准品洛液和待检药品洛液的制备:将一定量的标准品经洛剂洛解后，米用超声处理10?30min后，得到一定浓度的标准品溶液；待测药品依次进行研成粉末、溶剂溶解、超声处理10?30min后，离心取上清液，得到待检药品溶液。所采用的溶剂为甲醇、乙醇以及水中的任意一种。但在后续步骤中，相对于水和乙醇，甲醇溶解性最好，最易挥干，使得斑点扩散最小，所以优选甲醇。
[0009]步骤二，层析:将步骤一得到的标准品溶液以及待检药品溶液分别滴加于薄层板上，展开晾干后，采用光学方法对标准品以及待检药品中与标准品比移值相等的点进行定位，定位位置记为待检位点；
[0010]步骤三，采集拉曼光谱:将表面增强剂滴加于步骤二的待检位点处，采用便携式拉曼光谱仪对所述待检位点进行动态检测60s?240s，分别得到标准品以及待检药品的动态表面增强拉曼光谱图。该拉曼光谱仪的功率为150mW?300mW，积分时间为5s?10s。
[0011]进一步的，本发明所提供的检测中成药中掺杂化学药品的方法，还具有这样的特征:所采用的表面增强剂为以甘油溶液为溶剂的纳米金属溶胶，纳米金属溶胶优选纳米银溶胶，甘油溶液和纳米银溶胶溶液的体积比为1:1?3，优选1:1(以下简称甘油银胶溶液)。
[0012]进一步的，本发明所提供的检测中成药中掺杂化学药品的方法，还具有这样的特征:上述甘油溶液中甘油的体积分数为10 %?70 %，优选30 %?70 %，最优选50 %。
[0013]进一步的，本发明所提供的检测中成药中掺杂化学药品的方法，还具有这样的特征:步骤二中所采用的薄层板为硅胶薄层板；进行薄板层析时，待检样品溶液和标准品溶液的滴加量均为I yL ;层析完毕后，采用波长为254nm紫外光进行斑点定位。
[0014]进一步的，本发明所提供的检测中成药中掺杂化学药品的方法，还具有这样的特征:步骤三中，表面增强剂的滴加量为3 μ L?5 μ L，所采用的便携式拉曼光谱仪的激发波长为785nm。
[0015]发明作用与效果
[0016]本发明提供了一种检测中成药中掺杂化学药品的方法，采用表面增强拉曼光谱与薄层色谱法联用的技术进行检测，表面增强剂采用以甘油为溶剂的纳米金属溶胶。相对于现有技术选择水作为溶剂，甘油的粘度较大，使其挥发性更小，当甘油和金属纳米粒子混匀后，可以更长时间包裹在金属纳米粒子的外围，减少金属纳米粒子和外界接触而被氧化失效的机会，进而降低了金属纳米粒子的削减速度。一方面，提高了 SERS信号的稳定性，信号可维持上百秒，实现对低含量掺伪中成药更好的现场快检；另一方面，提高了检测的灵敏度，如，当采用以水为溶剂的金属纳米粒子作为表面增强剂时，该方法检测中成药中的掺杂化学药品的质量分数的下限为0.1%，而当采用以甘油为溶剂的金属纳米粒子作为表面增强剂时，该方法检测中成药中的掺杂化学药品的质量分数的下限为0.01%，灵敏度提高了一个数量级。
【附图说明】
[0017]图1是本发明的检测中成药中掺杂化学药品方法的流程图；
[0018]图2(a)是本发明实施例一中的标准品的动态表面增强拉曼光谱图；
[0019]图2(b)是本发明实施例一中的掺杂化学药品的动态表面增强拉曼光谱图；
[0020]图3是本发明实施例一中的掺杂化学药品与其标准品的动态表面增强拉曼光谱对比图；
[0021]图4(a)是本发明实施例二中的标准品的动态表面增强拉曼光谱图；
[0022]图4(b)是本发明实施例二中的掺杂化学药品的动态表面增强拉曼光谱图；
[0023]图5是本发明实施例二中的掺杂化学药品与其标准品的动态表面增强拉曼光谱对比图；
[0024]图6(a)是本发明实施例三中的标准品的动态表面增强拉曼光谱图；
[0025]图6(b)是本发明实施例三中的掺杂化学药品的动态表面增强拉曼光谱图；
[0026]图7是本发明实施例三中的掺杂化学药品与其标准品的动态表面增强拉曼光谱对比图。
【具体实施方式】
[0027]以下结合附图来说明本发明的【具体实施方式】。
[0028]实施例一
[0029]本实施例以止咳平喘类中成药中常掺杂的盐酸苯海拉明的检测为例，对本发明的方法进行详细说明。
[0030]一、仪器和样品
[0031]仪器:便携式拉曼光谱仪(1-Raman ；B&ff Tek ；USA)，激发波长785nm。
[0032]银胶溶液的制备:称取90mg的硝酸银溶于500mL去离子水中加热至沸腾，加入1ml I %的柠檬酸钠，然后保持沸腾lh，冷却，得银胶溶液。
[0033]惨杂化学药品的标准品洛液的制备:精称定1.0mg的标准品，将标准品在ImL的甲醇中溶解、超声处理10?30min后，即得lmg/mL的标准品溶液。
[0034]待检药品溶液的制备:取一片中成药片剂，将该片剂研磨成细粉末后，在适量分析纯甲醇中溶解、超声处理10?30min后，离心取上清液，得到待检药品溶液。
[0035]其中，超声处理的时间优选20min。
[0036]以上仪器以及样品的制备方法也适用于后续的实施例。
[0037]图1为本实施例中的检测中成药中掺杂化学药品方法的流程图。
[0038]如图1所示，本实施例中检测止咳平喘类中成药中的盐酸苯海拉明的方法如下:
[0039]步骤1，制备甘油银胶溶液:取ImL甘油的体积分数为50%的甘油溶液与ImL银胶溶液混匀，得到甘油银胶；
[0040]步骤2，制备标准品溶液以及待检药品溶液:按上述方法制备；
[0041]步骤3，薄板色谱层析分离:用毛细管分别吸取待检药品溶液和标准品溶液各
Iμ L滴加于薄层板上，展开后在室温或加热温度下晾干；
[0042]步骤4，采用波长为254nm的紫外灯进行斑点定位，确定待检药品中与标准品相对应的位置处是否存在斑点，若存在，将两个斑点记为待检位点进入步骤5，若不存在，重新选择标准品，进入步骤2;
[0043]步骤5，在待检位点上滴加3 μ L甘油银胶溶液后利用便携式拉曼光谱仪进行动态检测，激光功率为200mw，积分时间为5s，动态采集时间为240s,分别得到各自的动态表面增强拉曼光谱图，如图2所示；
[0044]步骤6，选取各自峰值最高的一张拉曼光谱进行对比，再通过谱段选取(550cm LieOOcm》、基线校正(airPLS法)、平滑(Sgolay法)对这两个拉曼光谱进行预处理后，比较两图谱的差别，如图3所示。同时，结合待检位点在薄层板的比移值，确定中成药中是否添加了此类标准品。
[0045]图2(a)是本实施例中的标准品的动态表面增强拉曼光谱图。
[0046]图2(b)是本实施例中的掺杂化学药品的动态表面增强拉曼光谱图。
[0047]如图2所示，标准品的动态表面增强拉曼光谱图中，第30s时拉曼光谱峰值强度最高；待检药品的动态表面增强拉曼光谱图中，第5s时的拉曼光谱峰值强度最高。
[0048]图3为本实施例一中的掺杂化学药品与其标准品的动态表面增强拉曼光谱对比图。
[0049]如图3所示，标准品以及待检药品中谱峰值最强的两组拉曼光谱的峰型完全相同，由此可判定该中成药中添加有盐酸苯海拉明。
[0050]实施例二:
[0051]本实施例用于止咳平喘类中成药中常掺杂的磷酸苯丙哌林的检测，检测步骤如下:
[0052]步骤1，制备甘油银胶溶液:取ImL甘油的体积分