的相对标准偏差，结果见表2。由表2可以看出，在3个加标水平上，利用此方法检 测茶叶中烟碱、降烟碱、麦斯明、假木贼碱、新烟碱和可替宁的平均回收率在86.2%~92.1%之 间。样品测试结果的平均相对偏差小于9.2%;说明本法的回收率较高，重复性较好。
[0020]
【附图说明】
[0021]图1为本发明的测定方法流程图。
[0022] 图2为标准溶液色谱图（上图为烟碱，中图为降烟碱，下图为麦斯明、假木贼碱、新 烟碱和可替宁）。
[0023] 图3为样品色谱图。
[0024]
【具体实施方式】
[0025]本发明以下结合具体实施例(附图）做进一步描述： 实例1: 1.试剂与仪器： 标准品:2-甲基喹啉、烟碱、降烟碱、麦斯明、假木贼碱、新烟碱和可替宁； 试剂:三乙胺、三氯甲烷、5%的氢氧化钠溶液、甲基叔丁基醚； 仪器:气相色谱质谱联用仪(安捷伦公司）；熔融石英毛细管柱(30m X 0.25mm X 0.25 μπι);漩祸振荡器，（Adwanced multi公司）台式高速冷冻离心机(SIGMA公司）;AE163电子天 平，感量:0.0001 g，（瑞士Mettler公司）。有机相针式滤器，13 mm X 0.22 μπι(上海安谱科 学仪器有限公司）。
[0026] 2.样品处理： 称取2 g茶叶粉末样品放入50 mL离心管中，然后加入1.0~6.OmL 10%的氢氧化钠溶 液，静置10 min。取10 mL 0.01%三乙胺的甲基叔丁基醚溶液（即萃取溶液)到离心管中，并 加入200 yL的内标溶液（2-甲基喹啉的浓度为800 yg/mL)，于旋涡混合器上以2000 rpm速 度振荡1 min。
[0027] 取1 ·0 mL上清液于2 mL净化离心管中（内含150 mg无水硫酸镁，50 mg PSA吸附 剂，50 mg C18E吸附剂），于旋祸混合器上以2000 rpm振荡2 min，以5000 rpm离心3 min。取 上清液过0 · 22 μπι有机相滤膜后，进GC-MS检测。
[0028] 3.标准工作溶液制备:按前面
【发明内容】
中的方法配制，此处不再重复。
[0029] 4.测定方法： 以目标物的色谱峰面积对其相应浓度进行回归分析，得到标准曲线。对制备好的样品 进行测定，测得检出目标物的色谱峰面积，代入标准曲线，分别得到样品中的烟碱、降烟碱、 麦斯明、假木贼碱、新烟碱和可替宁的含量，结果见表4。
[0030]表4茶叶中的检测结果 5.气相笆谐/质谐联用仪杀忏
色谱柱:推荐使用恪融石英毛细管柱，30m X 0.25mm X 0.25μηι，固定相：（35%_苯基)-甲基聚硅氧烷。载气:氦气，载气流速:1.0 mL/min;进样口温度:250°C。
[0031 ]进样量3yL，分流进样，分流比5:1。采用程序升温方式：初始温度：100°C;初始时 间：3min;以8°C/min速率由100°C升至260°C，保持lOmin。总运行时间：33min。
[0032] 检测器:质谱检测器;溶剂延迟:8min;电离电压:70ev;离子源温度:230°C;传输线 温度:280°C;扫描离子范围：33~400amu;质谱扫描方式:选择离子监测（SHO，各化合物定 量及定性离子参见表1。
[0033] 实例2: 具体步骤如实施例1所述，选择另一样品B，测得的含量见表5。
[0034] 表5茶叶中的检测结果_
实例3: 具体步骤如实施例1所述，选择另一样品C，测得烟碱的含量见表6。
[0035]表6茶叶中的检测结果 头例4:
具体步骤如实施例1所述，选择另一样品D，测得烟碱的含量见表7。
[0036]表7茶叶中的检测结果
【主权项】
1. 一种使用GC-MS法测定茶叶中生物碱的方法，包括烟碱、降烟碱、麦斯明、假木贼碱、 新烟碱和可替宁的测定，其特征在于:该方法具体包括以下步骤： 1) 萃取溶液的配制:配制浓度为0.01%三乙胺的甲基叔丁基醚溶液为萃取溶液； 2) 样品的处理:称取2g茶叶末放入50mL离心管中，然后加入1.0~6.OmLIO%的氢氧化 钠溶液，静置10min，取10mL步骤1)所配的萃取溶液到离心管中，并加入200yL的内标 溶液，于旋祸混合器上以2000rpm速度振荡1min;取1.0mL上清液于内含150mg无水硫酸 镁，50mgPSA吸附剂，50mgC18E吸附剂的2mL净化离心管中，于旋涡混合器上以2000 rpm振荡2min，以5000rpm离心3min，取上清液过0.22μπι有机相滤膜后，进GC-MS检测； 3)标准工作溶液制备： 用萃取溶液配制六个不同浓度的均含有200yL内标溶液的烟碱系列标准溶液，浓度范 围：1.144-57.2yg/mL， 用萃取溶液配制六个不同浓度的均含有200yL内标溶液的降烟碱系列标准溶液，浓度 范围：1.456-72.8yg/mL， 用萃取溶液配制六个不同浓度的均含有200yL内标溶液的麦思明、可替宁、假木贼碱、 和新烟碱的混合标样系列标准溶液，各成分浓度范围：麦思明：〇.792-39.6yg/mL，可替宁： 1.264-63.2yg/mL,假木贼碱：1.376-68.8yg/mL,新烟碱:0.88-44yg/mL; 4) 气相色谱/质谱联用法测定:利用气相色谱/质谱联用仪对标准工作溶液和样品处理 液进行检测，气相色谱/质谱联用仪条件如下： 色谱柱:恪融石英毛细管柱，30mX0.25mmX0.25μηι，固定相：35%-苯基-甲基聚娃氧 烷;载气:氦气，载气流速：1. 〇mL/min;进样口温度:250°C;进样量3yL，分流进样，分流比5: 1;采用程序升温方式:初始温度：l〇〇°C;初始时间：3min;以8°C/min速率由100°C升至260 °C，保持lOmin，总运行时间：33min; 检测器：质谱检测器；溶剂延迟：8min;电离电压：70ev;离子源温度：230°C;传输线温 度:280°C;扫描离子范围：33~400amu;质谱扫描方式:选择离子监测(S頂）； 5) 测定方法：以目标物的色谱峰面积对其相应浓度进行回归分析，得到标准曲线;对制 备好的样品进行测定，测得检出目标物的色谱峰面积，代入标准曲线，分别得到样品中的烟 碱、降烟碱、麦斯明、假木贼碱、新烟碱和可替宁的含量。2. 根据权利要求1所述的使用GC-MS法测定茶叶中生物碱的方法，其特征在于:萃取溶 液的具体配制方法为:准确移取50ul的三乙胺溶液到500mL的容量瓶中，加入甲基叔丁基醚 定容至刻度，配置成浓度为0.01%三乙胺/甲基叔丁基醚溶液。3.根据权利要求1所述的使用GC-MS法测定茶叶中生物碱的方法，其特征在于：内标为 2-甲基喹啉，内标溶液浓度为800 yg/mL，用萃取溶液配制。4. 根据权利要求1所述的使用GC-MS法测定茶叶中生物碱的方法，其特征在于:标准工 作溶液的具体配制方法如下： 1)标准储备液的配制： 烟碱储备液:准确称取约15.Omg烟碱，置于25mL的棕色容量瓶中，用萃取溶液稀释定容 至刻度，该溶液在4°C~8°C条件下避光保存； 降烟碱储备液:准确称取约15.Omg降烟碱，置于25mL的棕色容量瓶中，用萃取溶液稀释 定容至刻度，该溶液在4°C~8°C条件下避光保存； 麦斯明储备液:准确称取约10.Omg麦斯明，置于25mL的棕色容量瓶中，用萃取溶液稀释 定容至刻度，该溶液在4°C~8°C条件下避光保存； 假木贼碱和新烟碱混标储备液:准确称取约15.Omg假木贼碱、10 .Omg新烟碱置于25mL的棕色容量瓶中，用萃取溶液稀释定容至刻度，该溶液在4°C~8°C条件下避光保存； 可替宁储备液:准确称取约15.Omg可替宁，置于25mL的棕色容量瓶中，用萃取溶液稀释 定容至刻度，该溶液在4°C~8°C条件下避光保存； 2)系列标准工作溶液： 烟碱工作标准溶液：分别移取20yL、50yL、100yL、250yL、500yL、lmL的烟碱储备液于不 同的10mL棕色容量瓶中，再准确加入200yL内标溶液，用萃取溶液稀释定容至刻度，得到六 个不同浓度的烟碱系列标准溶液； 降烟碱工作标准溶液：分别移取20yL、50yL、100yL、250yL、500yL、lmL的降烟碱储备液 于不同的10mL棕色容量瓶中，再准确加入200yL内标溶液，用萃取溶液稀释定容至刻度，得 到六个不同浓度的降烟碱系列标准溶液； 麦斯明、可替宁、假木贼碱和新烟碱的混和标样工作标准溶液：分别移取20μL、50μL、 100yL、250yL、500yL、lmL的麦斯明、可替宁、假木贼碱和新烟碱混标储备液于不同的10mL棕 色容量瓶中，再准确加入200yL内标溶液，用萃取溶液稀释定容至刻度，得到六个不同浓度 的麦斯明、可替宁、假木贼碱和新烟碱的混和标样系列标准溶液。
【专利摘要】本发明属于茶叶的理化检验技术领域，具体说是一种使用GC-MS法测定茶叶中生物碱的方法，主要包括茶叶粉末中烟碱及次要生物碱（烟碱、降烟碱、麦思明、假木贼碱、新烟碱和可替宁）的测定，该方法是利用装有0.01%三乙胺/叔丁基甲醚溶液的离心管萃取茶叶中的烟碱类物质，利用气相色谱/质谱联用法（GC-MS）分析茶叶中烟碱类物质的方法。采用本发明方法检测茶叶中烟碱的含量，快速有效，前处理简单，平均相对标准偏差小于10%，各指标的平均回收率在86.2%~92.1%之间。具有快速准确、灵敏度高及重复性好的优点。
【IPC分类】G01N30/88
【公开号】CN105467055
【申请号】CN201510987659
【发明人】张洪非, 朱风鹏, 姜兴益, 李雪, 罗彦波, 李翔宇, 庞永强, 陈欢, 韩书磊, 刘彤, 付亚宁, 刘洋
【申请人】国家烟草质量监督检验中心
【公开日】2016年4月6日
【申请日】2015年12月25日