一种提高寡糖离子化效率的方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于生化分析领域，涉及一种寡糖离子化的方法，具体涉及一种提高寡糖 离子化效率的方法，尤其是一种提高寡糖在基质辅助激光解吸飞行时间质谱（MLDI-T0F M巧中离子化的方法；该方法采用6-联阱尼克醜胺（HYNIC)作为基质分析寡糖，选择性地 提高寡糖的离子化效率，且抑制了其它被分析物如肤段的离子化。
【背景技术】
[0002] 寡糖是体内一类重要的信息物质，具有诸多生物学功能，一般由3-10个单糖分子 通过糖巧键连接而成。所述寡糖具有重要的生理功能，如激活细胞的自我防卫系统，决定细 胞识别，集聚及受体作用等，其诸多生物学功能决定了其在医药领域有着广泛的应用前景。
[0003] 所述基质辅助激光解吸飞行时间质谱（MALDI-T0F M巧是20世纪末问世并迅速发 展起来的质谱技术，广泛应用于生物化学领域。所述MLDI-TOF MS因快速、灵敏、可提供结 构信息等优点，已成为糖类物质分析的重要工具。在所述MALDI-TOF MS分析中，基质起到 极其重要的作用；其中，所述基质是一类能吸收激光的小分子有机物，将样品混于基质中， 在激光的照射下，样品解吸并电离，再经过飞行时间质谱分析。但是，天然寡糖的亲水性强， 且缺乏质子受体，在气相中离子化效率低，阻碍了所述MLDI-TOF MS对寡糖的研究。目前， 为提高寡糖在质谱中的离子化效率，有研究者进行了各种尝试，如进行全甲基化衍生或还 原氨化衍生提升寡糖的疏水性或带电性质，从而提高寡糖的质谱检测信号。所述新型基质 如二元基质，离子液基质，无机基质等也陆续被报道可提高寡糖的检测灵敏度。与衍生的方 法相比，直接利用基质检测具有操作简便，节省试剂，无需纯化，谱图解析方便等优点。
[0004] 但迄今为止，尚未见有关采用6-联阱尼克醜胺（HYNIC)作为基质分析寡糖、提高 寡糖在基质辅助激光解吸飞行时间质谱中离子化方法的报道。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于提供一种提高寡糖离子化效率的方法，尤其是一种提高寡糖在 基质辅助激光解吸飞行时间质谱（MLDI-T0F M巧中离子化的方法；该方法采用6-联阱尼 克醜胺（HYNIC)作为基质分析寡糖，选择性地提高寡糖的离子化效率，且抑制了其它被分 析物如肤段的离子化。
[0006] 具体而言，本发明提供的的提高寡糖在基质辅助激光解吸飞行时间质谱中离子化 的方法，其特征在于，采用6-联阱尼克醜胺（HYNIC)作为寡糖在MLDI分析中的基质，其步 骤包括：
[0007] (1)样品溶液点祀烘干后，将所述基质6-联阱尼克醜胺（HYNIC)溶液点在相应革己 点上烘干；
[000引 似将祀板送入所述MLDI-TOF-MS分析。
[0009] 本发明的方法中，所述6-联阱尼克醜胺（HYNIC)具有式（I )的结构，
[0010]
[0011] 本发明的方法中，所述基质溶剂体系为甲醇与己酸体系；
[0012] 本发明的方法中，所述己酸体积分数为1. 5-5%，本发明的一个实施例中优选己酸 体积分数为2% ;
[0013] 本发明的方法中，所述6-联阱尼克醜胺（HYNIC)的终浓度为1. 5-3mg/mU本发明 的一个实施例中优选为2mg/mL。
[0014] 本发明进行了对比实验，其包括下述步骤：
[0015] (1) W麦芽走糖值P7)，葡聚糖1000为标准寡糖，标准核必岩藻糖（NA2F)，标准唾 液酸化N糖（Al)为标准N-糖链，测试所述HYNIC作为基质的效果，并与传统基质D皿进行 对比；
[0016] (2) W标准合成肤段与DP7的混合物，核糖核酸酶B糖链与肤段混合物为模型测试 所述HYNIC的选择性离子化效果，并与传统基质D皿进行对比；
[0017] (3) W DP7为标准寡糖，非挥发性盐氯化钢为溶剂测试所述HYNIC的耐盐性，并与 传统基质D皿进行对比；
[0018] (4) W DP7为标准寡糖利用串级质谱测试所述HYNIC对于其碎裂方式的影响，并与 传统基质D皿进行对比；
[0019] (5) W去糖链酶PNGase F释放人血清糖蛋白质N-糖链作为实际样品，测试所述 HYNIC基质用于实际样品分析的可行性。
[0020] 实验结果显示，本发明方法与现有技术相比，本发明能选择性地提高寡糖的离子 化效率，且抑制了其它被分析物如肤段的离子化（如表1和表2所示）；且具有灵敏度高、 结晶均匀、耐盐性强、串级质谱碎片信息丰富等特点。
[0021] 表1分别采用HYNIC和D皿检测到的SOpmol葡聚糖1000的不同聚合度寡糖的质 荷比信息
[0022]
[0023] 表2采用HYNIC为基质的进行麦芽走糖串级谱图检测中跨环断裂的信息
[00巧]本发明所述方法与现有技术相比，具有W下优点：
[0026] (1)所述HYNIC作为基质可大幅度提高寡糖质谱分析的信噪比与信号强度；
[0027] (2)所述HYNIC作为基质可选择性地提高寡糖的离子化效率，同时抑制肤段的离 子化效率；
[0028] (3)所述HYNIC作为基质结晶均匀，提高了寡糖检测的信号稳定性与重复性；
[0029] (4)所述HYNIC作为基质提高了寡糖二级质谱信噪比，丰富了碎裂信息，有利于糖 链结构解析。
【附图说明】
[0030] 图1为HYNIC的结构示意图；
[0031] 图2为上样量为Ipmol的DP7, Ipmol甲基化的DP7, 5pmol NA2F和5pmol Al分别 采用D皿（图片上部）和HYNIC(图片下部）为基质的质谱图；其中，?代表糖链加钢峰， 代表糖链加钟峰；
[0032] 图3上样量为10化mol的葡聚糖1000分别采用和D皿(a)和HYNIC化）为基质的 质谱图；其中，?代表糖链加钢峰，代表糖链加钟峰；
[003引图4为标准肤段与DP7摩尔比为1:1 (曰，b)和1:10 (C，d)时，分别采用D皿(曰，C) 和HYNIC(b，d)为基质的质谱图；其中，?代表糖链加钢峰，代表糖链加钟峰。*代表肤段 峰；
[0034] 图5为1化mol当量的核糖核酸酶B糖链与肤段混合物分别采用D皿(a)和 HYNIC化）为基质的质谱图；其中，?代表糖链加钢峰，*代表肤段峰；
[00对图6为上样量为Ipmol的DP7分别采用HYNIC (红色）和D皿（黑色）为基质信号 重复性示意图；
[003引图7上样量为Ipmol的麦芽走糖分别采用HYNIC (a)和D皿化）为基质的质谱成像 图；
[0037] 图8为上样量为Ipmol的DP7分别采用D皿（左侧）和HYNIC (右侧）W氯化钢为 非挥发性溶剂进行耐