扫描模式下测定样品溶液，将侦测结果与T0F数据库进行比对，得出1级 T0F得分，见图1。
[0077] 3.2对于得分满足要求的化合物，在软件中建立二级采集方法，详见图2。
[0078] 3.3在MS/MS模式下，重新运行样品溶液，获得样品碎片离子全扫描数据，将其与二 级质谱图库中碎片离子信息进行比对，得到二级QT0F得分，见图3。
[0079] 4某省会城市豆角样品中LC-Q-T0F/MS侦测结果
[0080]采集某省会城市市售豆角样品13个，应用LC-Q-T0F/MS技术进行544种农药残留侦 测，LC-Q-T0F/MS技术检出9种农药残留，共计16频次，涉及样品9个，具体结果见表2。
[0081 ] 表1 544种农药LC-Q-T0F/MS侦测参数表
[0082]
[0083]
[0084]
[0085]
[0086」
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[0090]
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[0092]
[0093]
[0094]
[0095]
[0096] 表2某地区豆角样品中LC-Q-T0F/MS侦测结果
[0097]
[0098] 实施例2
[0099]豆类蔬菜（以菜豆为例）中544种农药(见表1)LC-Q-T0F/MS侦测和确证技术实施实 例。
[0100]样品前处理步骤、LC-Q-T0F/MS操作条件均参照实施例1中的处理条件。
[0101]在全扫描模式下测定样品溶液，将侦测结果与T0F数据库进行比对，得出1级T0F得 分，见图4;对于得分满足要求的化合物，在软件中建立二级采集方法，详见图5;在MS/MS模 式下，重新运行样品溶液，获得样品碎片离子全扫描数据，将其与二级质谱图库中碎片离子 信息进行比对，得到二级QT0F得分，见图6。
[0102] 某省会城市菜豆样品中LC-Q-T0F/MS侦测结果:采集某省会城市市售菜豆样品7 个，应用LC-Q-T0F/MS技术进行544种农药残留侦测，LC-Q-T0F/MS技术检出15种农药残留， 共计29频次，涉及样品7个，具体结果见表3。
[0103] 表3某地区菜豆样品中LC-Q-T0F/MS侦测结果
[0104]
[0105] 实施例3
[0106] 豆类蔬菜（以豇豆为例）中544种农药(见表1) LC-Q-T0F/MS侦测和确证技术实施实 例。
[0107]样品前处理步骤、LC-Q-T0F/MS操作条件均参照实施例1中的处理条件。
[0108]在全扫描模式下测定样品溶液，将侦测结果与T0F数据库进行比对，得出1级T0F得 分，见图7;对于得分满足要求的化合物，在软件中建立二级采集方法，详见图8;在MS/MS模 式下，重新运行样品溶液，获得样品碎片离子全扫描数据，将其与二级质谱图库中碎片离子 信息进行比对，得到二级QT0F得分，见图9。
[0109]某省会城市豇豆样品中LC-Q-T0F/MS侦测结果:采集某省会城市市售豇豆样品6 个，应用LC-Q-T0F/MS技术进行544种农药残留侦测，LC-Q-T0F/MS技术检出9种农药残留，共 计19频次，涉及样品5个，具体结果见表4。
[0110] 表4某地区豇豆样品中LC-Q-T0F/MS侦测结果
[0111]
【主权项】
1. 一种用于检测豆类蔬菜中544种农药残留的侦测方法，其特征在于：通过建立544种 农药的TOF/MS数据库和Q-TOF/MS数据库，将目标化合物的色谱质谱信息与TOF/MS数据库和 Q-TOF/MS数据库的信息检索匹配，实现了无需标准物作对照，同时对农产品中500种以上农 药进行定性侦测与确证;所述的544种农药为表1中编号为1-544的农药。2. -种如权利要求1所述的TOF/MS数据库，其特征在于:通过以下方法构建数据库：在 TOF/MS模式下，分别测定每种农药标准物在指定色谱质谱条件下的保留时间，确定该化合 物ESI源下的离子化形式，选择+!1，+顯 4，+似，及化学式，得到每种化合物母离子的精确质量 数，同位素峰分布和丰度比，将544种农药的名称、保留时间、分子式、精确质量数、同位素峰 分布和丰度比信息导入到数据库CSV文件中，形成TOF/MS数据库。3. -种如权利要求1所述的Q-TOF/MS数据库，其特征在于:通过以下方法构建数据库： 在数据采集界面依次输入如权利要求2中所述TOF/MS数据库中544种农药的母离子，在Q-T0F/MS模式下，对544种农药分别在8个碰撞能量下，进行碎片离子全扫描质谱图采集，优选 其中离子信息丰富的3-5个不同碰撞能量下碎片离子全扫描质谱图导入数据库软件文件 中，并与对应的农药信息相关联，建成Q-TOF/MS数据库。4. 根据权利要求1所述的侦测方法，其特征在于:对于农药残留的侦测不需要农药标准 物作对照。5. 根据权利要求1所述的侦测方法，其特征在于，所述方法包括以下程序： (a) 样品制备：豆类蔬菜样品经醋酸乙腈匀浆提取，经脱水和离心、浓缩后，再经 Carbon/NH2柱净化，乙腈+甲苯洗脱残留农药，经浓缩、过滤后制成待测样液a; (b) 色谱质谱检测:采用配有反相色谱柱的液相色谱，在特定色谱条件下，分离待测样 液a中的农药;采用配有电喷雾离子源的LC-Q-TOF/MS-MS，在特定质谱条件下，检测农药； (c) TOF/MS数据库筛查：在定性软件中调用已建立的如权利要求2所述的TOF/MS数据 库，依据TOF/MS数据库对质谱检测结果中目标化合物定性检索，检索参数保留时间偏差限 定为± 0.5min，精确质量偏差限定为± lOppm，离子化形式选择+H，+順4，+Na模式，依据每种 化合物各要素的实测值与TOF/MS数据库中理论值的偏差，给出检索匹配得分值，检索匹配 得分值> 70的化合物，为疑似检出化合物； (d) Q-T0F/MS数据库确证:在Targeted MS/MS采集模式下，输入疑似检出化合物的母离 子，保留时间和最佳的碰撞能量，对待测样液a再次检测，将检测谱图与如权利要求3所述的 Q-TOF/MS数据库中谱图，在镜像对比条件下匹配确证，其匹配得分值>70,即确认检出该目 标化合物。6. 根据权利要求5所述的侦测方法，其特征在于：步骤(a)中，所述豆类蔬菜包括豆角、 豇豆、菜豆、豌豆、刀豆、食荚豌豆和菜用大豆。7. 根据权利要求5所述的侦测方法，其特征在于:步骤(a)中，所述Carbon/NH2柱净化步 骤如下：在Carbon/NH 2柱中加入无水硫酸钠，先用乙腈+甲苯混合液淋洗SPE柱，并弃去流出 液，当液面到达硫酸钠的顶部时，迅速将样品浓缩液转移至净化柱上，下接新鸡心瓶接收； 再乙腈+甲苯混合液洗涤样液瓶三次，并将洗涤液移入SPE柱中；再用乙腈+甲苯混合液洗脱 农药，合并洗脱液于鸡心瓶中。8. 根据权利要求5所述的侦测方法，其特征在于：步骤(a)中，所述经浓缩、过滤后制成 待测样液a是指权利要求7所得到的洗脱液，在40°C水浴中旋转浓缩，并将浓缩液置于氮气 下吹干，加入乙腈+甲酸水混匀，经滤膜过滤后定容，得到待测样品溶液a。9. 根据权利要求5所述的侦测方法，其特征在于：步骤(b)中，所述特定色谱条件是指： 液相色谱流动相A为5mM的乙酸铵-0.1 %甲酸-水;流动相B为乙腈;梯度洗脱程序为:Omin: l%B,3min：30%B,6min：40%B,9min：40%Ba5min：60%Ba9min：90%B,23min：90%B, 23. Olmin: 1 ，后运行 4min;流速为 0.4mL/min;柱温:40°C;进样量：10yL。10. 根据权利要求5所述的侦测方法，其特征在于:步骤(b)中，所述特定质谱条件是指： Agilent 6530LC-Q-T0F/MS质谱仪的毛细管电压：4000V;干燥气温度：325°C ;干燥气流量 10L/min，鞘流气流速1 lL/min，鞘流气温度为325°C;雾化气压力40psi，锥孔电压60V，碎裂 电压140V，全扫描质核比范围为50-1600m/z，并采用内标参比溶液对仪器质量精度进行实 时校正，通过Agilent MassHunter Workstation Software对质谱检测结果采集与处理。
【专利摘要】本发明建立了一种豆类蔬菜中544种农药残留LC-Q-TOF/MS侦测技术。LC-Q-TOF/MS在TOF/MS模式下，分别测定每种农药标准物在指定色谱质谱条件下的保留时间，确定该化合物ESI源下的离子化形式及化学式，得到每种化合物母离子的精确质量数，形成TOF/MS数据库。在Q-TOF/MS模式下，分别采集每种农药标准物在3-5个不同碰撞能量下的碎片离子质谱图，并将采集信息导入PCDL软件，形成Q-TOF/MS数据库。通过比较豆类蔬菜样品中保留时间、一级质谱和二级质谱信息，确定样品中是否含有农药残留，并对一级得分较高的化合物进行二级确证，如果二级得分较高，即确认检出相关农药残留。本发明具有快速、高通量、高精度和高可靠性等优势，能够对豆类蔬菜中农药进行准确筛查。
【IPC分类】G01N30/88
【公开号】CN105548435
【申请号】CN201511018337
【发明人】庞国芳, 范春林, 康健, 常巧英
【申请人】中国检验检疫科学研究院
【公开日】2016年5月4日
【申请日】2015年12月28日