洗涤一次(重复步骤②)，将沉淀的细胞垂悬至10ml，混匀，用细胞计数版计数。总细胞数调为I X 108。
[0232](2)sp20骨髓瘤细胞悬液的制备
[0233]①将sp20骨髓瘤细胞进行扩增培养。
[0234]②将4瓶扩增培养的骨髓瘤细胞收集到50ml的离心管内。
[0235]③100rpm离心5分钟，弃去上清。
[0236]④加入30ml不完全培养液，重复步骤③，再离心洗涤一次，然后将细胞垂悬至1ml,混匀，计数。总细胞数调为3 XlO70
[0237](3)细胞融合
[0238]①分别吸取含IX 18个脾细胞悬液和3 X 17个骨髓瘤细胞悬液，加入50ml离心管中，补加不完全培养液至30ml，充分摇勾。
[0239]②100rpm离心7分钟，弃去上清。
[0240]③加50%的融合剂聚乙二醇(PEG)0.7ml。
[0241 ]④加入25ml不完全培养液，使PEG稀释而失去促融作用。
[0242]④800rpm离心7分钟，弃去上清。
[0243]⑥加入20ml含次黄嘌呤、氨基蝶呤、胸腺嘧啶的选择性培养液(HAT培养液)，轻轻吹吸沉淀细胞，使其垂悬并混匀。
[0244]⑦将细胞悬液加入辅有饲养细胞的96孔培养板中，每孔0.1ml，在37°C含5%⑶2的孵箱中培养。
[0245 ] (4)抗体阳性孔检测一间接ELI SA法
[0246]①用已知白色念珠菌液包被
[0247]②加有克隆生长的孔中的培养上清ΙΟΟμΙ。
[0248]③加酶标抗鼠IgG抗体ΙΟΟμΙ。
[0249]④加底物液ΙΟΟμΙ，室温避光显色20分钟。
[0250]⑤判定结果:在酶联免疫检测仪492波长下测定OD值，空白对照调零。若待测控OD值大于或等于阴性对照孔OD值2.1倍，则可判定为阳性孔，孔内生长有阳性克隆。
[0251](5)克隆化一有限稀释法
[0252 ]将96孔板中培养上清被检测为抗体阳性的孔标记出来。用加样器将孔内的杂交瘤细胞反复吹打均匀后计数，然后用有限稀释法进行逐级稀释，再加到96孔板进行培养。观察克隆生长，记录单克隆孔，并及时进行阳性检测。将阳性克隆的细胞转到24孔板培养，待其增殖到一定数量后再转入细胞瓶中扩大培养。
[0253](6)杂交瘤细胞的冻存
[0254]将呈对数生长的杂交瘤细胞收集于离心管，100rpm离心10分钟，弃去上清，加入Iml冻存液混匀，然后加到冻存管，在一 70°C低温冰箱过夜后转入液氮罐长期保存。
[0255](7)腹水型单克隆抗体制备
[0256]将冻存的杂交瘤细胞复苏扩增培养，将扩增培养的杂交瘤细胞吹打下来，100rpm离心10分钟，收集上清备用。加无血清培养液到沉淀的细胞中，调整细胞数为I X10%1_只Balb/C小鼠腹腔注射0.5ml，接种杂交瘤细胞后14天，拉颈脱臼处死小鼠，吸取腹水离心，收集上清即为腹水型单克隆抗体，分装后置一 20°C冰箱，冻存备用。
[0257](8)单克隆抗体的鉴定
[0258]白色念珠菌单克隆抗体筛选到6株能稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为102、1!13、1!19、207、3(:12、3?5。经效价测定:以上6种腹水型单克隆抗体的效价为1\10一7。经交叉反应测定1H3、2D7、3F5杂交瘤细胞株产生的单克隆抗体除白色念珠菌外不与其它支原体发生交叉反应。以2D7株单克隆抗体细胞株制备的单克隆抗体作为本发明检测用单克隆抗体。
[0259]实施例3:
[0260]家用智能检测试剂盒，是由电子读取分析部分与单克隆抗体检测试剂两大部分构成，所述电子读取分析部分包括单片机系统、光电检测系统、电池、开关K、液晶显示器、探针和试纸，所述复合金标检测探针、电池、开关K、单片机系统密封在机壳内，液晶显示器安装于机壳窗口处;所述单克隆抗体检测试剂包括特异性识别生殖道支原体的单克隆抗体、淋病奈瑟氏菌单克隆抗体、白色念球菌单克隆抗体、羊抗鼠IgG抗体、复合金标检测探针；
[0261 ]所述试纸包括金标垫、硝酸纤维素膜、样品垫、吸水垫；
[0262]所述复合金标检测探针包被在金标垫上，所述复合金标检测探针是由胶体金标记的特异性识别生殖道支原体的单克隆抗体、淋病奈瑟氏菌单克隆抗体、白色念球菌单克隆抗体的复合胶体金-抗体结合物；
[0263]所述硝酸纤维素膜上设有检测线1、检测线2、检测线3和对照线4，所述检测线I上包被特异性识别生殖道支原体的单克隆抗体，所述检测线2上包被淋病奈瑟氏菌单克隆抗体，所述检测线3上包被淋白色念球菌单克隆抗体，所述对照线4上包被羊抗鼠IgG抗体；
[0264]其中，所述复合金标检测探针的制备方法为:
[0265](I)单克隆抗体的制备:分别用人型支原体和解尿支原体作免疫原产生腹水型支原体单克隆抗体，用淋病奈瑟氏菌作免疫原产生淋病奈瑟氏菌单克隆抗体，用白色念珠菌作免疫原产生白色念球菌单克隆抗体；
[0266](2)胶体金的制备:先将10mL的0.01%HAuC14溶液加热至沸腾，一次性迅速加入1.4mL的I %柠檬酸三钠水溶液，继续加热至溶液由淡黄色转变为蓝黑色最终变为酒红色，颜色稳定后继续加热5min，室温冷却，加三蒸水定容至10mL，即得到胶体金溶液;制备的胶体金溶液用透射电镜镜检，确保胶体金颗粒大小一致、均匀，否则重新制备；
[0267](3)复合金标检测探针的制备:用0.1moVLK2CO3调节上述胶体金溶液的pH为9.0，向10mL胶体金溶液中缓慢加入1.2mg/ml特异性识别生殖道支原体的单克隆抗体、1.2mg/ml淋病奈瑟氏菌单克隆抗体、1.2mg/ml白色念球菌单克隆抗体，磁力搅拌器缓慢搅拌Ih使其结合，加牛血清白蛋白(BSA)作为稳定剂，使得终浓度为I %，2000r/min离心6分钟，弃上清液，沉淀用PH5?7檬酸磷酸盐缓冲液稀释至50m，制成抗体金;取抗体金Iml加PH5檬酸磷酸盐缓冲液稀释到30ml，加入微孔板中，-40°C冻干，制成复合胶体金-抗体结合物，即为复合金标检测探针。
[0268]其中，所述试纸的制备方法为:
[0269](I)硝酸纤维素膜上检测线的制备:将特异性识别生殖道支原体的单克隆抗体、淋病奈瑟氏菌单克隆抗体、白色念球菌单克隆抗体分别以0.lmg/ml的浓度在硝酸纤维素膜上按从左至右的顺序划线，分别为检测线1、检测线2和检测线3，相邻两膜线间的距离为5mm，粗细均匀，喷完检测好的膜需立即放入30°C烘干10小时；
[0270](2)硝酸纤维素膜上质控线的制备:将羊抗鼠IgG抗体按0.lmg/ml的浓度在硝酸纤维素膜上划线，该膜线为质控线，位于检测线3的右侧，距离检测线3的距离为5mm，粗细均匀，喷完检测好的膜需立即放入30°C的烘干10小时；
[0271](3)金标垫的制备:用复合金标检测探针溶液喷涂经预处理的金标垫，制得包含复合胶体金-抗体结合物的金标垫;将金标垫在20°C下干燥0.5小时；
[0272](4)将吸水垫粘贴在所述纤维素膜的远离检测线的一端，将金标垫粘贴在纤维素膜的靠近检测线的一端，将样品垫粘贴于金标垫上与所述纤维素膜相对的一端，即制成试纸。
[0273]该家用智能检测试剂盒的检测方法为:
[0274](I)取样:使用专用阴道棉拭子完成阴道分泌物取样后，混合稀释液后加注于智能检测试剂盒；
[0275](2)拔出隔片，合闭开关K，接通电池回路，通过液晶显示器显示电源接通;开关K由可插拔隔片把电池回路断开，平时不使用时减少电池待机损耗；
[0276](3)将样本加入加注口，当单片机系统检测到探针碰到试剂后，自动唤醒单片机程序，程序点亮发光二极管，发光二极管的光经试纸反射到光电检测系统，光电检测系统把光转换成相应的电信号送给单片机，单片机通过内部程序对数据进行分析比较，得出测试结果，然后显示到液晶显示器屏幕上。
[0277]本发明的硬件系统框图如图1所示，复合金标检测探针、电池、开关K、单片机系统密封在机壳内，液晶显示器安装于机壳窗口处。开关K由可插拔隔片把电池回路断开，减少电池待机损耗。使用本仪器检测试样时，拔出隔片。液晶显示器显示电源接通。将样本加入加注口，待3分钟内，液晶显示器即可显示检测结果。
[0278]本发明的软件流程图如图2所示，当接通电池电源，将样本加入加注口，单片机接收到需要测试的指令，开始工作。当检测到检测指令，延时片刻，首先自检本仪器内的检测试纸是否有效，当试纸有效后，按设定程序逐条检测试纸标定检测条。如发生变化即按不同变化，得出各自的检验结果。最终显示在显示器屏幕上。当测试到试纸无效后直接跳过检测环节，显示本测试仪无效。
[0279]实施例4:
[0280]家用智能检测试剂盒，是由电子读取分析部分与单克隆抗体检测试剂两大部分构成，所述电子读取分析部分包括单片机系统、光电检测系统、电池、开关K、液晶显示器、探针和试纸，所述复合金标检测探针、电池、开关K、单片机系统密封在机壳内，液晶显示器安装于机壳窗口处;所述单克隆抗体检测试剂包括特异性识别生殖道支原体的单克隆抗体、淋病奈瑟氏菌单克隆抗体、白色念球菌单克隆抗体、羊抗鼠IgG抗体、复合金标检测探针；
[0281 ]所述试纸包括金标垫、硝酸纤维素膜、样品垫、吸水垫；
[0282]所述复合金标检测探针包被在金标垫上，所述复合金标检测探针是由胶体金标记的特异性识别生殖道支原体的单克隆抗体、淋病奈瑟氏菌单克隆抗体、白色念球菌单克隆抗体的复合胶体金-抗体结合物；
[0283]所述硝酸纤维素膜上设有检测线1、检测线2、检测线3和对照线4，所述检测线I上包被特异性识别生殖道支原体的单克隆抗体，所述检测线2上包被淋病奈瑟氏菌单克隆抗体，所述检测线3上包被淋白色念球菌单克隆抗体，所述对照线4上包被羊抗鼠IgG抗体；
[0284]其中，所述复合金标检测探针的制备方法为:
[0285](I)单克隆抗体的制备:分别用人型支原体和解尿支原体作免疫原产生腹水型支原体单克隆抗体，用淋病奈瑟氏菌作免疫原产生淋病奈瑟氏菌单克隆抗体，用白色念珠菌作免疫原产生白色念球菌单克隆抗体；
[0286](2)胶体金的制备:先将10mL的0.01%HAuC14溶液加热至沸腾，一次性迅速加入1.4mL的I %柠檬酸三钠水溶液，继续加热至溶液由淡黄色转变为蓝黑色最终变为酒红色，颜色稳定后继续加热5min，室温冷却，加三蒸水定容至10mL，即得到胶体金溶液;制备的胶体金溶液用透射电镜镜检，确保胶体金颗粒大小一致、均匀，否则重新制备；
[0287](3)复合金标检测探针的制备:用0.1moVLK2CO3调节上述胶体金溶液的pH为9.0，向10mL胶体金溶液中缓慢加入2.lmg/ml特异性识别生殖道支原体的单克隆抗体、2.1mg/ml淋病奈瑟氏菌单克隆抗体、2.lmg/ml白色念球菌单克隆抗体，磁力搅拌器缓慢搅拌Ih使其结合，加牛血清白蛋白(BSA)作为稳定剂，使得终浓度为I %，3000r/min离心8分钟，弃上清液，沉淀用PH6檬酸磷酸盐缓冲液稀释至50m，制成抗体金;取抗体金1ml加PH6檬酸磷酸盐缓冲液稀释到45ml，加入微孔板中，-50°C冻干，制成复合胶体金-抗体结合物，即为复合金标检测探针。
[0288]其中，所述试纸的制备方法为:
[0289](I)硝酸纤维素膜上检测线的制备:将特异性识别生殖道支原体的单克隆抗体、淋病奈瑟氏菌单克隆抗体、白色念球菌单克隆抗体分别以1.5mg/ml的浓度在硝酸纤维素