一种大黄中总蒽醌的提取方法
【专利摘要】本发明公开了一种大黄中总蒽醌的提取方法，包括以下步骤：步骤1：将大黄粉碎后，过筛；步骤2：称取0.15重量份大黄粉，与适量硅藻土混合均匀待用；步骤3：在预先放好过滤膜的萃取池中先加入少量石英砂，混合均匀后加入适量的硅藻土至达到萃取池的池口；盖上萃取池的盖子进行静态萃取；萃取结束后得到萃取液；萃取条件为：萃取溶剂为1％乙酸甲醇；萃取温度100℃；静态萃取时间5min；冲洗体积100％；静态循环次数3次。本发明提供了一种大黄中总蒽醌的提取方法，该提取方法操作简单，用时短，有效的降低了对技术人员的操作技能的要求。
【专利说明】
一种大黄中总蒽醌的提取方法
技术领域
[0001] 本发明涉及实验室检测领域，特别是一种大黄中总蒽醌的提取方法。
【背景技术】
[0002] 2010年药典记录了提取大黄中总蒽醌的方法:取本品粉末(过四号筛）约0.15g，精 密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重 量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液5ml，置烧瓶中，挥去溶剂，加8%盐 酸溶液l〇ml，超声处理2分钟，再加三氯甲烷10ml，加热回流1小时，放冷，置分液漏斗中，用 少量三氯甲烷洗涤容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷层，酸液再用三氯甲烷提取3次，每 次10ml，合并三氯甲烷液，减压回收溶剂至于，残渣加甲醇使溶解，转移至10ml量瓶中，加甲 醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 yl，注入液相色谱仪，测定，即得。本品按干燥品计算，含总蒽醌以芦荟大黄素(C15H1005)、 大黄酸(C15H806)、大黄素(C15H1005)、大黄酚(C15H1004)和大黄素甲醚(C16H1205)的总量 计，不得少于1.5%。色谱条件为:色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为 填充剂；以甲醇〇. 1%磷酸溶液(85:15)为流动相;检测波长为254.nm。理论板数按大黄素峰 计算应不低于3000。
[0003] 药典的方法操作过程复杂，对操作人员的操作技能要求高
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是提供一种大黄中总蒽醌的提取方法，该方法操作简单，提取效率 尚。
[0005] 本发明提供的技术方案为:一种大黄中总蒽醌的提取方法，包括以下步骤：
[0006] 步骤1:将大黄粉碎后，过筛；
[0007] 步骤2:称取0.15重量份大黄粉，与适量硅藻土混合均匀待用；
[0008] 步骤3:在预先放好过滤膜的萃取池中先加入少量石英砂，混合均匀后加入适量的 硅藻土至达到萃取池的池口；盖上萃取池的盖子进行静态萃取;萃取结束后得到萃取液；
[0009] 萃取条件为：萃取溶剂为1 %乙酸和甲醇水溶液；萃取温度100 °C ;静态萃取时间 5min;冲洗体积100% ;静态循环次数3次;其中，乙酸和甲醇水溶液为99单位体积水、0.5单 位体积的乙酸和〇. 5单位体积的甲醇混合物。
[0010] 在上述的大黄中总蒽醌的提取方法中，所述的萃取池的体积为l〇ml。
[0011] 在上述的大黄中总蒽醌的提取方法中，所述的静态萃取的压力为1500psi。
[0012] 在上述的大黄中总蒽醌的提取方法中，所述的静态萃取的吹扫时间为100s。
[0013] 在上述的大黄中总蒽醌的提取方法中，步骤2具体为:将萃取液在15000r/min的条 件下离心3min，取上清液。
[0014]在上述的大黄中总蒽醌的提取方法中，所述的ASE萃取法所采用的仪器为ASE350 快速溶剂萃取仪
[0015] 本发明在采用上述技术方案后，其具有的有益效果为：
[0016] 本发明的提取方法操作简单，用时短，有效的降低了对技术人员的操作技能的要 求。
【附图说明】
[0017] 图1为本发明中芦荟大黄素色谱分析有效性验证的直角坐标图；
[0018] 图2为本发明中大黄酸色谱分析有效性验证的直角坐标图；
[0019]图3为本发明中大黄素色谱分析有效性验证的直角坐标图；
[0020]图4为本发明中大黄酚色谱分析有效性验证的直角坐标图；
[0021]图5为本发明中大黄素甲醚色谱分析有效性验证的直角坐标图；
【具体实施方式】
[0022]下面结合【具体实施方式】，对本发明的技术方案作进一步的详细说明，但不构成对 本发明的任何限制。
[0023] 实施例1:
[0024]将大黄经粉碎机粉碎，过四号筛，约0.15g，精密称定，与适量硅藻土混合均匀，待 用，先在萃取池加入少量石英砂，再把样品移入到预先放好过滤膜的ASEK10ml萃取池中 再加入适量硅藻土，轻轻振摇使之与池口在同一水平线上，拧紧萃取池上盖。萃取结束后， 把萃取液转移于50ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，在15000r/min下离心3min，取上清液， 进入LC测定。
[0025] 萃取条件(见表1)为：
[0026] 表 1
[0029]乙酸和甲醇水溶液为99单位体积水、0.5单位体积的乙酸和0.5单位体积的甲醇混 合物
[0030] 分析方法为LC液相色谱法，液相色谱分析条件：
[0031] a)仪器:agilentl260超高效液相色谱仪
[0032] b)色谱柱规格:Agilent ZORBAX Extend_C18 1 ? 8tim 4 ? 6 X 100mm，即碳 18色谱柱， 直径4.6mm，长度100mm，粒径1.8微米；
[0033] c)柱温：4(TC
[0034] d)流速：0.5mL/min
[0035] e)流动相:0_6min:0.1%磷酸-甲醇(体积比40:60)
[0036] 6min: 0.1 %磷酸-甲醇（体积比10 :90)，即第6分钟前流动相为体积比为40 :60的 0.1 %磷酸-甲醇的混合物，在第6分钟时，流动相为体积比为10 :90的0.1 %磷酸-甲醇的混 合物。
[0037] f)检测波长：254nm [0038] 色谱分析有效性验证：
[0039] 取芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、对照品适量，精密称定，加甲醇制成每lml 含16ug的溶液，大黄素甲醚8ug。即得。
[0040] 取芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚对照品适量，精密称定，置棕 色量瓶中，加甲醇制成芦荟大黄素〇. 〇 1295mg/ml、大黄酸0.01422mg/ml、大黄素0.0102lmg/ ml、大黄酚〇. 〇1215mg/ml、大黄素甲醚0.005385mg/ml的溶液，然后分别精密吸取该溶液0.5 yl、0.8yl、lyl、1.5yl、2ul 进入 LC 测定，结果详见表 2-1、表 2-2、表 2-3、表 2-4、表 2-5;附图 1、 附图2、附图3、附图4、附图5分别与表2-1、表2-2、表2-3、表2-4、表2-5对应，附图1、附图2、附 图3、附图4、附图5的横坐标表示浓度，纵坐标表示峰面积。
[0041]表2-1芦荟大黄素线性试验结果
[0044]表2-2大黄酸线性试验结果
[0046]表2-3大黄素线性试验结果
[0048]表2-4大黄酚线性试验结果
[0050]表2-5大黄酚线性试验结果
[0052] 1.1实施例1的萃取方法的重现性验证：
[0053]取相同批号的样品（批号：20150701)0.15g，共5份，精密称定，按ASE提取方法提取 供试品溶液，进样量为lyL，以上述的色谱条件平行试验，测得样品中芦荟大黄素、大黄酸、 大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的含量见表三，RSD为1.02%，试验表明ASE提取方法重复性良 好，结果详见表3
[0054]表 3
[0056] 1.2实施例1的萃取方法的精确度测试
[0057] 采用实施例1的ASE萃取方法和药典的萃取方法对大黄进行萃取，大黄为3批，批号 分别为 150912,1511012,20150701;
[0058] 实施例1的ASE萃取方法对同一批次的大黄采用两套相同规格的设备平行测试两 次，分别为ASE1和ASE2表示。
[0059]具体测试结果见下表4;
[0060]表 4
[0062]以上所述的仅为本发明的较佳实施例，凡在本发明的精神和原则范围内所作的任 何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
【主权项】
1. 一种大黄中总蒽醌的提取方法，其特征在于，包括以下步骤： 步骤1:将大黄粉碎后，过筛； 步骤2:称取0.15重量份大黄粉，与适量硅藻土混合均匀待用； 步骤3:在预先放好过滤膜的萃取池中先加入少量石英砂，混合均匀后加入适量的硅藻 土至达到萃取池的池口；盖上萃取池的盖子进行静态萃取;萃取结束后得到萃取液； 萃取条件为:萃取溶剂为体积比为1 %乙酸和甲醇水溶液;萃取温度100°c;静态萃取时 间5min;冲洗体积100 % ;静态循环次数3次，其中，乙酸和甲醇水溶液为99单位体积水、0.5 单位体积的乙酸和〇. 5单位体积的甲醇混合物。2. 根据权利要求2所述的大黄中总蒽醌的提取方法，其特征在于，所述的萃取池的体积 为10ml。3. 根据权利要求2所述的大黄中总蒽醌的提取方法，其特征在于，所述的静态萃取的压 力为 1500psi。4. 根据权利要求2所述的大黄中总蒽醌的提取方法，其特征在于，所述的静态萃取的吹 扫时间为100s。5. 根据权利要求1所述的大黄中总蒽醌的提取方法，其特征在于，步骤2具体为:将萃取 液在15000r/min的条件下离心3min，取上清液。6. 根据权利要求1所述的大黄中总蒽醌的提取方法，其特征在于，所述的ASE萃取法所 采用的仪器为ASE350快速溶剂萃取仪。
【文档编号】G01N30/06GK105929086SQ201610234890
【公开日】2016年9月7日
【申请日】2016年4月15日
【发明人】陈学松, 廖强, 韦日伟, 陈佳丽, 王 华, 姚泳成
【申请人】广西壮族自治区梧州食品药品检验所