一种饮品总多酚检测试剂盒的制作方法
【技术领域】
[0001] 本实用新型属于食品营养领域，特别是属于食品分析检测领域。本实用新型涉及 一种饮品总多酚检测试剂盒，特别是涉及一种适用于半自动生化分析仪的饮品总多酚检测 试剂盒，适用于食品、保健品等市场销售的液体及固体饮品中总多酚的快速检测。
【背景技术】
[0002] 植物多酚是多羟基类化合物的总称，狭义上是单宁或鞣质，广义上还包括小分子 酚类化合物，如花青素、儿茶素、栎精、没食子酸等。其广泛存在于蔬菜、水果、豆类、谷物类 等植物中，尤以种子植物中更为常见，苹果、葡萄、荔枝、浆果等水果中植物多酚含量很高。 它们也存在于茶叶、啤酒、果酒、果汁等饮料中，与人类的生活和健康密切相关。
[0003] 植物多酚是植物体内复杂的酚类次生代谢物，具有多元酚结构，酚羟基中的邻位 酚羟基可与金属离子发生络合反应，且极易被氧化，对活性氧等自由基有较强的捕捉能力， 使其具有很强的抗氧化性和清除自由基的能力。多酚还可以通过疏水键和多点氢键与蛋白 质、生物碱、多糖等发生复合反应。另外，植物多酚在200~300nm波长间有较强的紫外吸收 能力。
[0004] 近年来发现植物多酚能够抑制动物和人类肿瘤的发展，防治心脑血管疾病、提高 免疫力、调解内分泌系统、保肝以及抗炎、抗癌、抗氧化、抗衰老等功效，被称作人类健康的 "第七营养素"。其功能活性被很好地应用于医药、化妆品、食品、环境等领域，在美、德、法、 意、日、澳大利亚、加拿大、罗马尼亚、匈牙利等国己有许多植物多酚专利及产品问世。尼柯 维斯基公司成功开发并推出了以"苹果酸"命名的苹果多酚产品，并得到广泛的应用。此外， 茶多酚和银杏黄酮也已被广泛运用于食品、医药、精细化工等领域。液体饮品中多酚物质的 含量，不仅影响其功能营养活性，对其色泽、风味和非生物稳定性也有重要影响。啤酒中过 高量的多酚物质可使啤酒口味粗涩、苦味不正、后苦味长，并且会引起啤酒冷浑浊和永久性 浑浊，过低量的多酚对啤酒的稳定性以及风味又有不良影响。果酒中多酚物质不仅影响果 酒的颜色、风味和香气，还能抑制微生物生长，且在储藏过程中参与沉淀物的形成。然而，在 贮藏及加工过程中，过多的多酚物质会使果酒褐变，导致货架期简短，经济效益降低。
[0005] 随着生活质量的提高，人们对饮品，尤其是功能饮品的消费日益增加，且市场上饮 品的覆盖面很广，多酚，作为饮品中一个重要的营养素指标，其检测方法对于饮品的质量检 测具有重要意义。目前多酚含量的测定方法主要有以下这些：
[0006] 高锰酸钾滴定法，原理是在靛红作指示剂的情况下，高锰酸钾氧化具还原性的多 酚物质。此法虽简便易行，但滴定终点较难观察，测定灵敏度低。
[0007] 香草醛盐酸法，在酸性条件下，多酚与香草醛发生缩合，产物在浓酸作用下形成有 色的正碳离子。其对测定条件要求严格，干扰因素多，稳定性较差。
[0008] 酒石酸压铁法，是茶多酚含量检测的国标方法。其测定原理是茶多酚类物质能与 过量的亚铁离子形成紫蓝色络合物，颜色的深浅与多酚含量成正比，具有良好的重现性。此 法多适用于低含量多酚的茶叶原料，测出的数值往往偏高。
[0009] 普鲁士蓝法，在酸性条件下，多酚能将Fe(CN)A还原成Fe(CN)64'还原产物Fe (CN)#与Fe3+反应生成Fe[Fe(CN)6]3(普鲁士蓝)供定量测定。反应中不好控制高铁溶液用 量，用量少时会生生成成藤氏蓝Fe 3[Fe(CN)6]2沉淀，不适测定。
[0010]高效液相色谱法，准确性高，灵敏度好，检测限低，但其前处理复杂，成本高，不适 于大量的定量分析，多用于单体酚类的测定。
[0011] F〇lin-Denis(FD)法，利用样品测试液中易氧化的羟基与FD试剂作用，产生蓝色， 于波长725nm处有最大吸收而用比色法测定。但Π )显色剂稳定性差，灵敏度低，测定结果误 差较大。
[0012] Folin-Ciocalteu法，其原理是在碱溶液中，酚类化合物可将钨钼酸定量还原(W6+ 变成W5+)，其自身被氧化为蓝色化合物，颜色深浅程度与酚含量正相关。此法价格低、灵敏度 高，但反应时间较长，不适于批量产品的快速测定。
[0013] 综上所述，各种检测方法的灵敏度、准确度、检测繁简程度和成本等方面均存在较 大差异，因而建立新的简便易行、灵敏度高、准确性好、成本低廉，耗时少的绿色检测方法仍 是社会的迫切要求和重要的研究目标。 【实用新型内容】
[0014] 本实用新型的目的是提供一种简便易行、灵敏度高、准确性好、成本低廉，耗时少 的饮品总多酚检测试剂盒，试剂盒采用优化的Folio-Ciocalteu比色法在通过紫外分光光 度计或半自动生化分析仪检测总多酚含量，无须制定标曲，大大缩短检测时间，尤以半自动 生化分析仪的应用，可直观读取检测结果，省时省力，并且可以连续批量检测多个样品中总 多酸的含量。
[0015] 本实用新型饮品总多酚检测试剂盒，包括盒体，以及盒体内的3瓶试剂、放试剂的 下凹瓶位、一份说明书，3瓶试剂分别为显色液、显色稳定液和标准品，放试剂的下凹瓶位共 有3个，分别放置3瓶试剂，说明书用自封袋包裹放置于盒内。
[0016] 本实用新型所述盒体是硬纸盒;下凹瓶位由塑料制成。
[0017] 本实用新型所述显色液为10%福林酚试剂，装于大号的棕色玻璃瓶。
[0018]本实用新型所述显色稳定液为12%碳酸钠溶液，装于PE塑料瓶。
[0019] 本实用新型所述标准品为0.1mg/mL没食子酸标准液，装于小号的棕色玻璃瓶。
[0020] 本实用新型所述显色液1瓶，75mL;显色稳定液1瓶，25mL;标准品1瓶，10mL。
[0021] 本实用新型所述适当的量器选自：移液枪、移液管、注射器、刻度吸管。本实用新型 将3瓶试剂固定在放试剂的下凹瓶位中与说明书一同封装在硬纸盒内，以便于携带和运输。 每一个试剂盒中的试剂足够进行150次测定，检测时，用移液枪移取0.16mL超纯水、标准液 和混合果汁备用样品液，分别置于试剂空白管、标准管和样品管中；于暗处在3支管中均加 入0.8mL超纯水和0.48mL显色剂，涡旋震荡，室温下避光静置3min;暗处分别加0.16mL显色 稳定剂于3支管中，最后3支管均用超纯水稀释至4mL，涡旋振荡充分混匀，45°C水浴30min后 在紫外分光光度计或半自动生化分析仪测定，整个实验过程应避光操作。样品中总多酚含 量为半自动生化分析仪显示的样品液浓度或紫外分光光度计测得吸光值结合公式计算得 到的样品液浓度乘以稀释倍数。实验显示本试剂盒有较高的灵敏度，线性范围为〇~6yg/ mL，相关系数r = 0.9996,加标回收率范围为95%~110%，线性偏差不超过5%。批内差不超 过8%。
[0022]本实用新型饮品总多酚检测试剂盒有益效果：结构安全可靠，简便易行、灵敏度 高、准确性好、成本低廉，耗时少，采用优化的Folio-Ciocalteu比色法在通过紫外分光光度 计或半自动生化分析仪检测总多酚含量，无须制定标曲，大大缩短检测时间，尤以半自动生 化分析仪的应用，可直观读取检测结果，省时省力。可满足相关企业单位批量检测液体及固 体饮品中总多酚含量。
【附图说明】
[0023]下面通过附图和实施例对本实用新型作进一步说明，但是，应当理解为，这些实施 例仅用于更详细地说明之用，而不应理解为用于任何形式限制本申请。
[0024] 图1是本实用新型检测试剂盒的结构示意图；
[0025] 图2是本实用新型检测试剂盒中放置试剂的下凹瓶位结构示意图；
[0026] 图3是本实用新型试剂瓶结构示意图；
[0027]图中：1是盒体;2是放试剂的下凹瓶位；3是显色液瓶位;4是显色稳定液瓶位；5是 标准品瓶位;6是大号棕色玻璃瓶;7是PE塑料瓶;8是小号棕色玻璃瓶。
【具体实施方式】
[0028] 下面结合具体实施例对本实用新型作进一步详细说明，但本实用新型的保护范围 并不仅限于此：
[0029] 实施例1:本实用新型包括盒体，以及盒体内的3瓶试剂、放试剂的下凹瓶位、一份 说明书，3瓶试剂分别为显色液、显色稳定液和标准品，放试剂的下凹瓶位共有3个，分别放 置3瓶试剂，说明书用自封袋包裹放置于盒内；其中盒体是硬纸盒;下凹瓶位由塑料制成;显 色液为10%福林酚试剂，装于大号的棕色玻璃瓶;显色稳定液为12%碳酸钠溶液，装于PE塑 料瓶;标准品为0.1mg/mL没食子酸标准液，装于小号的棕色玻璃瓶。显色液1瓶，75mL;显色 稳定液1瓶，25mL;标准品1瓶，1 OmL;适当的量器选自：移液枪、移液管、注射器、刻度吸管。
[0030] 试剂盒性能指标：
[0031] (1)空白吸光度46961?〈0.005;
[0032] (2)分析灵敏度:测试4.0yg/mL被测物时，吸光度变化为0.278~0.280;
[0033] (3)线性范围:①0~6yg/mL，相关系数r>0.999;②线性偏差不超过5 %
[0034] (4)重复性:测量精密度批内差:相对偏差
[0035] 使用试剂盒检测时，样本的前处理如下：
[0036] (1)提取液的配制:取40mL无水乙醇用超纯水定容至100mL，涡旋振荡混匀，备用。
[0037] (2)固体样品的处理步骤如下：
[0038] 首先以料液比为1: 30 (W/V)将样品与提取液充分混合，室温振荡1 Omin，再以300w 功率超声处理20min，取上清液，提取两次，合并2次提取液连同残渣倒入离心管，最后 10000r/min，常温条件下离心10min，得到的上清液进行适当稀释即可。
[0039] (3)液体样品的处理步骤如下：