专利名称：利用6-二甲氨基嘌呤诱导牡蛎四倍体的方法
技术领域：
本发明涉及一种诱导贝类四倍体方法，特别是涉及一种利用6-二甲氨基嘌呤诱导牡蛎四倍体的方法。
背景技术：
目前国内外诱导贝类四倍体方法有二种一种是采用二倍体精卵受精，用细胞松弛素B作抑制剂抑制第一极体和第一次卵裂方法诱导四倍体；另一种是采用三倍体的卵子和二倍体的精子受精，用细胞松弛素B抑制第一极体释放的方法诱导四倍体。由于细胞松弛素B是一种毒性很强的化学物品，易对人体和环境造成危害，并且还有价格昂贵、受精卵孵化率低等缺点，不宜在社会上推广应用。另外采用二倍体精卵受精诱导四倍体，还有四倍体产率低，后代的四倍体不能存活等缺点。
发明内容
本发明的目的是提供一种利用6-二甲氨基嘌呤诱导牡蛎四倍体的方法，它能克服现有技术的上述缺点。
一种利用6-二甲氨基嘌呤诱导牡蛎四倍体的方法，包括获取三倍体牡蛎产生的卵子并使之与二倍体产生的精子受精，然后采用抑制剂抑制第一极体或第二极体，其特征是所述的抑制剂为6-二甲氨基嘌呤。
本发明采用的诱导剂6-DMAP具有价格便宜、低毒等特点，克服了以往所用细胞松弛素B价格昂贵、毒副作用大、易对工作人员身体和环境造成危害等缺点。通过抑制三倍体受精卵第二极体释放获得的四倍体也不同于以往的四倍体，其细胞中虽然也含有相当于四套染色体的染色体数目，但实质上含有三套完整的染色体和两个相同的半套染色体，其本质属于非整倍体类型，与传统意义上的四倍体有着遗传学上的本质区别。
具体实施例方式
本发明的诱导牡蛎四倍体方法包括1、三倍体卵子的获取及倍性快速检测取三倍体群牡蛎解剖后镜检，区分雌雄，留雌弃雄。剖取卵子，用500目筛绢过滤洗卵，用过滤海水浸泡1h后，卵子呈圆形。三倍体的卵子较大，平均卵径59.51微米(57.5-61.8微米)，比二倍体(平均卵径51.3微米)增大16.05％，卵子体积增大56.49％。此时通过目微尺侧卵径大小可快速准确的检测倍性。
2、采用6-二甲氨基嘌呤(6-DMAP)抑制三倍体受精卵第一极体释放获得四倍体在22～24℃下，使上述的三倍体牡蛎的卵子与二倍体牡蛎的精子受精，当观察到受精卵中出现第一个极体时即开始加入70mg/L的6-DMAP进行处理，持续处理20min后，滤洗受精卵，除去药液后，放入新鲜过滤海水中孵化。采用流式细胞仪检测，D形幼虫的四倍体率最高达62.18％，平均51.9％(38.17-62.18％)。
本实施例中的第2步是通过抑制第一极体而得到四倍体的，这一步也可以改成采用6-DMAP抑制三倍体受精卵第二极体释放获得四倍体，即当30-40％的三倍体受精卵释放出第一极体时，加入70mg/L的6-DMAP进行处理，处理持续时间为15-20min。处理完毕后，滤掉药液，放入新鲜过滤海水中孵化。D形幼虫的四倍体率最高达68.87％，平均58.71％(50.45-68.87％)。
权利要求
1.一种利用6-二甲氨基嘌呤诱导牡蛎四倍体的方法，包括获取三倍体牡蛎产生的卵子并使之与二倍体产生的精子受精，然后采用抑制剂抑制第一极体或第二极体，其特征是所述的抑制剂为6-二甲氨基嘌呤。
2.如权利要求1所述的方法，其特征是所述的获取三倍体卵子的雌体的倍性是通过卵径大小测量检测的。
全文摘要
一种利用6－二甲氨基嘌呤诱导牡蛎四倍体的方法，包括获取三倍体牡蛎产生的卵子并使之与二倍体产生的精子受精，然后采用抑制剂抑制第一极体或第二极体，其特征是所述的抑制剂为6－二甲氨基嘌呤。本发明采用的诱导剂6－DMAP具有价格便宜、低毒等特点，克服了以往所用细胞松弛素B价格昂贵、毒副作用大、易对工作人员身体和环境造成危害等缺点。通过抑制三倍体受精卵第二极体释放获得的四倍体也不同于以往的四倍体，其细胞中虽然也含有相当于四套染色体的染色体数目，但实质上含有三套完整的染色体和两个相同的半套染色体，其本质属于非整倍体类型，与传统意义上的四倍体有着遗传学上的本质区别。
文档编号A01K67/00GK1545873SQ20031011449
公开日2004年11月17日 申请日期2003年12月16日 优先权日2003年12月16日
发明者王昭萍, 于瑞海, 王如才, 郑小东, 李慷均, 姜波 申请人:中国海洋大学